Fondation de bouillon tiogLolate, préparation et utilisations

Il Bouillon de tioglycolate C'est un moyen enrichi de cohérence des fluides. Il est connu avec l'acronyme FTM). Il a été créé par Brewer et modifié en 1944 par Vera, qui l'a incorporé Peptone of Casein.

Ce milieu a une faible réduction de potentiel d'oxydation, il n'est donc pas recommandé pour le développement de bactéries aérobies strictes, mais elle est idéale pour récupérer des bactéries aérobies en option, des bactéries anaérobies strictes et microaérophiles.

Tioglycolate bouillon sans indicateur. Échantillon de sécrétion vaginale. Source: bobjgalindo [cc by-sa 4.0 (https: // CreativeCommons.Org / licences / by-sa / 4.0)]

La haute performance observée avec ce milieu dans l'isolement et la récupération d'une grande variété de micro-organismes, l'a fait accepter par la pharmacopée des États-Unis (USP) par l'Association officielle des chimistes agricoles (AOAC) et par la pharmacopée européenne (EP).

Ces organisations le recommandent pour les tests de contrôle des stérilité des produits pharmaceutiques et pour l'enrichissement de divers types d'échantillons.

Le thioglycolate cado est composé d'extrait de levure, de caséine digréatique, de dextrose anhydre, de l-cistine, de chlorure de sodium, de tioglycolate de sodium, de repos et de pic en petite quantité en petite quantité.

Il existe plusieurs versions de ce milieu, parmi lesquelles sont: le bouillon de tioglycolate avec indicateur, bouillon de tioglycolate sans indicateur, bouillon de tioglycolate avec indicateur de richesse avec l'hémine et la vitamine K_1, Et bouillon de tiogLlication avec carbonate calcien.

Il convient de noter que la variante du bouillon de tioglycate enrichi d'hémine et de vitamine K sert à améliorer la croissance des anaérobies stricts exigeants, et la variante du bouillon de tioglycolate qui contient du carbonate de calcium est utile pour contrecarrer les acides produits pendant la croissance microbiale.

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Base

Le bouillon de tioglycolate est considéré comme un enrichissement, pas sélectif car il permet le développement de la plupart des bactéries non exigeantes. Les besoins nutritionnels sont fournis par l'extrait de levure, le pancréatique digéré et le glucose.

D'un autre côté, ce médium malgré le fait d'être un bouillon contient une petite quantité d'agar; Cela provoque un faible potentiel de réduction de l'oxyde, car les freins d'entrée à l'oxygène, de sorte que l'oxygène diminue à mesure qu'il s'approfondit à l'intérieur du tube.

C'est pourquoi ce milieu est idéal pour le développement de bactéries aérobies en option, de microaérophiles et d'anaérobies stricts, ces 2 derniers sans incubation dans ces conditions. Le même milieu régule la quantité d'oxygène dans l'environnement, étant absente au bas du tube et en quantité suffisante à la surface.

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De même, le tioglycolate et le l-cistin agissent comme des agents réducteurs, contribuant à la prévention de l'accumulation de substances nocives au développement bactérien, comme le peroxyde. De plus, ces composés contiennent des groupes de sulfidrilles (-sh-), neutralisant les effets inhibiteurs des dérivés mercuriels, arsenical, entre autres métaux lourds.

D'un autre côté, l'agitation est un indicateur d'oxyde de réduction. Cette substance est incolore lorsqu'elle est réduite et rose lorsqu'elle est oxydée. Il y a les variantes du bouillon de tiogLlication avec indicateur et sans indicateur. Son utilisation dépendra du type d'échantillon et de préférence de laboratoire.

Pendant ce temps, le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique du bouillon Tioglycate et l'utilisation de l'anhydrate glucose empêche l'excès d'humidité dans l'environnement déshydraté.

préparation

Bouillon tioglycolate avec indicateur

Peser 29,75 gr du milieu déshydraté et se dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Le mélange est laissé à environ 5 minutes. Apportez une source de chaleur et remuez fréquemment jusqu'à ce qu'elle se dissout complètement.

Versez le milieu dans les tubes à essai et autoclavate à 121 ° C pendant 15 minutes. Laisser refroidir avant l'utilisation. Vérifiez l'insert de la maison commerciale pour sa conservation. Certains recommandent d'économiser à température ambiante dans un endroit sombre, et d'autres dans le réfrigérateur protégé contre la lumière.

Le pH moyen préparé est de 7,1 ± 0,2.

La couleur du milieu déshydraté est légère et beige préparée est un ambre clair avec une certaine opalescence.

Bouillon tioglycolate avec hémin et indicateur de vitamine K₁

Il existe des médias commerciaux qui apportent déjà l'hémina et la vitamine K₁, Spécial pour la culture anaérobie.

Si vous n'avez pas de médium enrichi pour les anaérobies, le bouillon de Tioglycolate de base peut être préparé. Pour ce faire, 10 mg de chlorhydrate d'hémine et 1 mg de vitamine K sont ajoutés₁ Pour chaque litre de médium. Cependant, si du sang ou du sérum est ajouté au bouillon de tioglycolate, l'ajout d'hémine, la vitamine K n'est pas nécessaire.

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Bouillon tioglycolate avec carbonate de calcium

Vient commercialement et se prépare après les instructions de l'insert.

Tioglycolate bouillon sans indicateur

Cela a la même composition du tioglycate de base, mais ne contient pas de résazurine.

Peser 30 gr de milieu déshydraté et se dissoudre dans un litre d'eau distillée. Le reste de la préparation est égal à celui décrit dans le bouillon Tioglycate avec indicateur.

Utiliser

Le bouillon de tioglycolate est utile pour l'enrichissement d'échantillons cliniques, en particulier pour ceux de sites stériles. Il est également utile pour les échantillons non cliniques, tels que les cosmétiques, les médicaments, etc.

Pour l'inoculation d'échantillons liquides (tels que le LCR, le liquide synovial, entre autres), les échantillons sont d'abord centrifugants, puis 2 gouttes de sédiments sont prélevées et placées dans le bouillon de tioglycolate. Incuber à 35 ° C pendant 24 heures. S'il n'y a pas de croissance (turbidité), il est incubé jusqu'à un maximum de 7 jours.

Si l'échantillon est prélevé avec Hiopus, les supports de culture sont d'abord inoculés dans des plaques et enfin l'écouvillon est introduit dans le bouillon, la partie qui se démarque et le tube est couvert, laissant l'écouvillon à l'intérieur. Incuba à 35 ° C pendant 24 heures, 7 jours maximum.

Pour les échantillons solides, il doit être homogénéisé dans une solution de solution saline physiologique (SSF) puis inoculer le bouillon de tioglycolate avec 2 gouttes de la suspension.

Parfois, il peut être utilisé comme moyen de transport pour des échantillons où la présence d'anaérobies stricts ou comme bouillon d'enrichissement de secours est suspecté.

La variante du bouillon de tioglycolate avec du carbonate de calcium est utilisée pour le maintien des contrôles plus longtemps, car il a la capacité de neutraliser les acides produits par l'utilisation du glucose; Ces acides sont toxiques pour certaines bactéries.

Une croissance du bouillon de tioglycolate sera observée en raison de la turbidité de l'environnement. Il est recommandé d'effectuer une coloration de gram.

Contrôle de qualité

Pour le contrôle de stérilité, il est recommandé d'incuber un ou deux bouillons sans inoculation. Le résultat attendu est un bouillon transparent, sans changement de couleur, bien qu'il soit normal qu'une légère couleur rose soit observée sur la surface du tube.

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Pour un contrôle de la qualité, entre 10 et 100 UFC de contrôles certifiés, tels que Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bactérides vulgatus ATCC 8482.

Incuber à 30-35 ° C dans l'aérobiose pendant 24 heures jusqu'à un maximum de 3 jours, car ces micro-organismes sont une croissance rapide.

Dans tous les cas, un bon développement est prévu, à l'exception de Micrococcus luteus et Bacillus subtilis, là où il peut y avoir un développement modéré.

Pour le contrôle de la qualité du bouillon de tioglycolate enrichi d'hémina et de vitamine K₁, Les souches de contrôle peuvent être utilisées Bactérides vulgatus  ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 et Fragilis bacteroids ATCC 25285. Le résultat attendu est une croissance satisfaisante.

recommandations

-Parfois, on peut voir que la surface du bouillon Tioglycate avec un indicateur devient rose; Cela est dû à l'oxydation de l'environnement. Si la couleur rose couvre 30% ou plus du bouillon total peut être chauffé dans un bain-marie pendant 5 minutes, refroidir à nouveau et utilisé.

Cela éliminera l'oxygène absorbé, renvoyant le milieu à sa couleur d'origine. Cette procédure ne peut être effectuée qu'une seule fois.

-Pour améliorer la croissance des bactéries aérobies, elle doit être incubée avec le couvercle légèrement paresseux. Cependant, il est préférable d'utiliser à cet effet un bouillon de bouillon de perfusion cardiaque cerveau ou du bouillon de soja triptique pour le bon développement d'aérobies strictes.

-La congélation de l'environnement ou la surchauffe doit être évitée, car les deux conditions endommagent le milieu.

-La lumière directe endommage le milieu de culture, il doit être protégé de la lumière.

Les références

1. Laboratoires britanniques. Tioglycolate USP avec indicateur. 2015. Disponible sur: Labbritania.com.
2. Laboratoires Quos SAS. 2019. Bouillon de tioglycolate. Disponible sur: Quios.com.co
3. BD Laboratories Fluid ThioglyCollate Medium (FTM). 2003. Disponible sur: BD.com / Europe
4. Médias BBL préparés dans des tubes pour la culture des micro-organismes anaérobies. Média tioglycate. 2013. Disponible sur: BD.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique de Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.POUR. Argentine.