Agar grande, préparation et utilisations

Il Gélose de grande taille Il s'agit d'un média de culture solide, sélectif et différentiel. Il a été conçu pour isoler et aider à l'identification des principales espèces de Candida. Son nom Biggy vient de l'acronyme en anglais bismuth glucose glycine yeas.

La formule originale a été créée par Nickerson, donc ce médium est également connu sous le nom de Nickerson Agar. Il est actuellement composé d'extrait de levure, de glycine, de dextrose, de citrate d'ammonium, de citrate de bismuth, de sulfite de sodium et d'agar.

Représentation graphique de l'agar Biggy. Source: Flickr.com

La gélose grand est formulée pour la différenciation des espèces complexes C. Albicans, c. Tropicalis, c. Krusei et C. Kefyr, Mais d'autres espèces comme Candida glabrata, c. parapsilose, c. Guilliermondii, Trichhosporun SP, Geotrichum candidum et Saccharomyces cerevisiae.

Il a une bonne sensibilité et spécificité, cependant, lors de la comparaison avec d'autres milieux avec une fonction similaire, c'est en deuxième place, surmonté par Chromagar. Pour cette raison, de nombreux laboratoires préfèrent ce dernier, bien qu'il soit beaucoup plus cher.

Il doit être clair que l'utilisation de la gélose grande, ainsi que d'autres moyens similaires, aident une identification présumée rapide, mais jamais confirmatoire. Par conséquent, des méthodes d'identification supplémentaires doivent être disponibles; Par exemple, les systèmes d'identification VITEK 32 et API 20.

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Base

L'agar biggy est considérée comme un médium partiellement sélectif pour l'isolement des levures, en particulier du genre Candida, bien que d'autres genres puissent grandir.

C'est aussi un milieu différentiel car en fonction des espèces impliquées, différentes caractéristiques seront observées en aspect, couleur, forme et taille. Il est considéré comme un milieu chromogène, pour le développement de couleurs diverses dans les colonies.

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La couleur présentée par les colonies des levures est due à la présence de sulfite de bismuth dans l'agar. Nickerson s'est rendu compte que les levures du genre candide. Cela provient des colonies entre la lumière à noire.

Cette gélose contient de l'extrait de levure et de dextrose, qui fournit la source des nutriments de base et de l'énergie pour le développement des levures. La glycine est une stimulation de la croissance des levures, tout en inhibant le développement de certaines bactéries.

Dans ce même sens, le citrate d'ammonium et de bismuth, ainsi que le sulfite de sodium agissent comme des inhibiteurs de croissance bactérienne. L'agar est l'agent qui donne la cohérence solide à l'environnement.

préparation

Peser 45 GR de la culture déshydratée et se dissoudre dans un litre d'eau distillée. Secouer et chauffer le mélange, en laissant bouillir 1 minute jusqu'à la solution complète. Ce milieu de culture n'est pas stérilisé dans l'autoclave.

Lors du refroidissement d'environ 45 ° C dans Maria, versez 20 ml sur des plaques stériles de Petri.

La couleur du milieu déshydraté est jaunâtre et le gris préparé est un gel blanc jaunâtre, dans lequel un léger précipité floculant peut être observé.

Le pH doit être de 6,8 ± 0,2.

Le milieu préparé doit être stocké au réfrigérateur (4 ° C) et protéger de la lumière. Comme c'est un moyen qui ne doit pas être utilisé dès que possible. Son utilisation est recommandée avant de se rencontrer 3 jours depuis sa préparation.

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Utiliser

Les plaques sont incubées à température ambiante (25 ° C) par 24, 48 et 72 heures, le temps d'incubation peut être prolongé jusqu'à 5 jours.

Chaque espèce de Candida développe certaines caractéristiques qui les font se distinguer les unes des autres. Les fabricants moyens décrivent les caractéristiques suivantes pour chaque espèce:

-Complexe Candida albicans: Il se développe dans cette gélose sous forme de colonies lisses, rondes, brunes ou noires, avec un léger bord mycélien. Avec la fourniture que la couleur sombre n'est pas répartie à l'environnement.

-Candida tropicalis: Les petites colonies brillantes brillantes et foncées, avec un bord mycélial noir et clair. La couleur sombre se propage vers l'environnement, caractéristique typique de cette espèce, après avoir été incubée pendant 72 heures.

-Candida Krusei Développez des colonies rugueuses et à plat, avec le bord entre le brun à Negruzco.

-Candida parakrusei: colonies moyennes, la plupart du temps avec une apparence rugueuse, plate. La couleur peut varier entre le café rougeâtre foncé brillant au café rougeâtre clair. Le bord des colonies a un mycélium vaste et jaunâtre.

-Candida stellelatoïde: Développer des colonies moyennes et plates, brun foncé, presque noir. Le développement mycélial est très rare.

Une étude de Yücesoy et Marol en 2003, a montré que le milieu Chromagar présente une meilleure sensibilité et spécificité pour la différenciation et l'identification de différentes espèces de Candida que l'agar Biggy.

Contrôle de qualité

Pour le contrôle de la stérilité, les plaques sont incubées sans inoculation à 25 ° C, dans l'obscurité pendant 24 à 48 heures, il est prévu qu'il n'y a pas de croissance d'aucune sorte ou de changement de couleur.

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Les souches ATCC recommandées pour effectuer un contrôle de qualité moyenne sont:

Complexe Candida albicans  ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida Krusei ATCC 34135. Dans tous, la croissance est attendue comme décrit ci-dessus.

Vous pouvez également utiliser les souches suivantes:

Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 et Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Dans les deux premiers, l'inhibition totale est attendue, mais en cas de culture partiellement, les colonies seront de couleur crème.

Dans le cas d S. aureus On s'attend à ce qu'il soit totalement inhibé, mais s'ils grandissent partiellement, leurs colonies sont blanches.

Limites

Certaines bactéries sont capables de se développer dans ce milieu et peuvent même devenir sombres, simulant un voisin de candida.

Table Yücesoy M et Marol S.

Source: Yücesoy M, Marol S. Performance de Chromagar Candida et Biggy Agar pour l'identification des espèces de Yeas. Ann Clin Antimicrob Microbiol. 2003; 2 (8): 1-7

Les références

1. Yücesoy M, Marol S. Performance de Chromagar Candida et Biggy Agar pour l'identification des espèces de Yeas. Ann Clin Antimicrob Microbiol. 2003; 2 (8): 1-7.
2. MCD Lab. Fichier technique du vieillissement Biggy. Disponible sur: McDLab.filet/
3. Laboratoire Neogen. Gélose de grande taille. Disponible sur: Foodsafety.Néogen.com
4. Conda pronadisa Laboratories. Gélose de grande taille. Disponible sur: condalab.com
5. Laboratoires BD. Agar BD Biggy (Bismuth Glucose Glycine Yaest Agar). 2011. Disponible sur: BD.com