Embrouille

E tache de lungerangulaire. Coli sur gél. Source: Eunice Laurent, CC BY-SA 4.0, Wikimedia Commons

Quelle est l'agar Embr?

Il Embrouille Il s'agit d'un milieu de culture solide sélectif et différentiel utilisé pour l'isolement des bacilles négatifs de Gram, principalement de la famille Enterobacteacee, et d'autres bacilles à grammes non exigeants. Il est également connu avec l'acronyme Eam, ce qui signifie Eosina-Azul de méthylène.

Ce médium a été créé par Holt-Harris et Teague en 1916. Il contient la peptone, le lactose, le saccharose, le phosphate de dipotassium, l'agar, l'éosine, le bleu de méthylène et l'eau. Il est très similaire à l'agar MacConkey, surtout si l'agar d'embar par Levine est utilisée, qui ne contient pas de saccharose.

En fait, chaque laboratoire décide s'il fonctionne avec l'un ou l'autre, car ils remplissent la même fonction, bien que biochimiquement ils soient différents.

Il présente même le même inconvénient que l'agar MacConkey classique dans la production d'essaimage pour le sexe Protéus. Par conséquent, pour éviter ce phénomène, la concentration de l'agar peut être augmentée jusqu'à 5%.

Base

Sélectif

L'agar EMP est subtilement sélective car elle contient une coloration anilinique (éosine et bleu de méthylène), qui agissent comme des inhibiteurs, empêchant la croissance de la plupart.

Cependant, cette gélose a la désinvolture que certaines bactéries positives à Gram peuvent résister à la présence de substances inhibitrices et se développer sous forme de petites ponctions incolores, comme les Enterococcus faecalis et certaines Staphylococcus.

Certaines levures peuvent également grandir, comme Complexe Candida albicans, qui donnera de très petites colonies roses. Les clomidospores peuvent même se développer à partir de cette levure si l'échantillon est semé par profondeur.

Différentiel

D'un autre côté, la gélose EMB est également un milieu différentiel, car ces colorants ensemble (éosine et bleu de méthylène) ont la propriété de former un précipité dans le pH acide, par conséquent, ils servent d'indicateurs de la même production.

Peut vous servir: allométrie

Par conséquent, les bactéries faiblement en fermentation ou en saccharose produisent des couleurs violettes en 24 à 48 heures. Par exemple, genres Klebsiella, Enterobacter et Serratia.

Ces bactéries qui ferment fortement le lactose, comme Escherichia coli, ou le saccharose, comme Yersinia entérocolithique soit Proteus Penneri, Ils forment un précipité noir verdâtre, donnant une apparence de luminosité métallique, caractéristique de ces espèces.

Il convient de noter que si le milieu Emb Levine est utilisé (sans saccharose), Yersinia entérocolithique et Proteus Penneri Ils produiront des colonies transparentes.

Les bactéries qui ne fermentent pas le lactose ou le saccharose sont nourries par la présence de peptonas, qui fournissent des acides aminés et de l'azote nécessaire pour le développement bactérien et produisent des colonies transparentes. Par exemple, genres Salmonelle et Shigella, entre autres.

Il est également important de souligner que le sexe Acinetobacter Il peut présenter des colonies de lavande bleues, même si ce n'est pas le fermer lactose, ni le saccharose, mais ils ont la propriété de fixer le bleu de méthylène sur sa paroi cellulaire. Cela peut également se produire avec d'autres bactéries oxydatives.

préparation

Le milieu déshydraté d'origine est beige clair. Pour préparer ce milieu de culture, 36 grammes du milieu déshydraté doivent être pondérés et suspendus dans une solution qui contient un litre d'eau distillée.

Après avoir quitté le mélange 5 minutes au repos, apportez le Fixola à une source de chaleur, en mélangeant de manière vigoureuse et constante jusqu'à ce qu'elle bouillonne et se dissout complètement.

Par la suite, le milieu de culture déjà dissous doit être stérilisé en utilisant l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

Temps terminé, il est supprimé de l'autoclave et laissez reposer brièvement. Ensuite, il est encore chaud (45-50 ° C) entre 15 et 20 ml d'agar sur chaque plaque stérile de Petri. Le médium doit être un tournesol bleu.

Peut vous servir: amilase: caractéristiques, classification, structure, fonctions

Après servi, les assiettes sont laissées légèrement découvertes jusqu'à ce que l'agar refroidit un peu. Ensuite, ils sont couverts et autorisés à se solidifier complètement. Par la suite, ils sont ordonnés dans des plaquettes inversées et sont stockées au réfrigérateur (8 ° C) jusqu'à utiliser.

Cette procédure est de préférence effectuée dans une cloche d'écoulement laminaire ou devant le briquet de Bunsen pour éviter de contaminer.

Il est important de garder à l'esprit que chaque maison commerciale indiquera la quantité qui doit être pesée pour préparer le support de culture.

Le pH final du médium doit être 7.2 ± 0.2

Applications

• Ce milieu est utilisé pour semer l'urine et les excréments ou tout type d'échantillons cliniques, surtout si la présence de bacilles à gramme non exigeante est suspectée, comme les bacilles appartenant à la famille des entérobactéries, qui se développent très bien dans ce milieu.
• Les bactéries entéropathogènes des genres Shigella et Salmonelle Ils se distinguent par leurs colonies incolores ou légèrement ambrées.
• D'autres bacilles non fermentants se développent, comme Aéromonas, pseudomonas, acinetobacter, entre autres.
• De plus, ce milieu est très utile dans l'analyse microbiologique des aliments et de l'eau, car il est idéal pour la phase de confirmation complète de la détermination des coliformes, c'est-à-dire pour corroborer la présence de ET. coli Des bouillons EC troubles, de la technique de nombre la plus probable (NMP).

Contrôle de qualité

Pour vérifier que le milieu de culture nouvellement préparé fonctionne bien, les contrôles peuvent être semés pour observer les caractéristiques des colonies et vérifier qu'ils donnent comme prévu.

Pour ce faire, vous pouvez utiliser des souches ATCC ou des souches bien identifiées ET. coli, Enterobacter Aerogenes, Klebsiella SP, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa et des bactéries positives à Gram, comme S. aureus.

Il est prévu que ET. coli générer des colonies noires bleuâtre bien développées avec une brillance métallique verte. En tant que Enterobacter Aerogenes et Klebsiella SP Ils doivent donner des colonies muqueuses bien développées.

Il peut vous servir: colonne Winograsky

Pour sa part, Salmonelle Typhimurium et Shigella flexneri Ils doivent développer de grandes colonies incolores ou avec une couleur ambre clair.

Enfin, le genre Pseudomonas aeruginosa Il pousse sous forme de colonies incolores de taille irrégulière, tandis que les bactéries positives à Gram doivent être totalement inhibées ou grandir avec de très petites colonies.

Considérations finales

Parfois, la stérilisation fait réduire le bleu de méthylène, observant un milieu orange. Pour que le bleu de méthylène s'oxyde et récupérer la couleur violette, il doit être mélangé doucement jusqu'à ce que la couleur se rétablisse.

De plus, après stériliser, le colorant peut précipiter, il doit donc être mélangé bien avant de servir les plaques de Pétri.

Les références

1. Gélose en bleu Eosina et méthylène. Récupéré de la calab.com.
2. Levine E.M.B. (Avec Eosina et Methylène Blue). Récupéré de Britanialab.com.