Gélose de citrate Simmons

Pseudomonas fluorescens dans la gélose du citrate Simmons. Source: un doute, CC By-SA 3.0, Wikimedia Commons

Qu'est-ce que Simmons Citrate Apar?

Il Gélose de citrate Simmons Il s'agit d'un milieu solide utilisé comme test biochimique d'identification des micro-organismes, en particulier des bacilles négatifs en gramme. Le médium d'origine a été créé par Koser en 1923.

Le milieu du citrate de Koser était composé d'un bouillon contenant du phosphate de sodium, du phosphate d'ammonium, du phosphate monopotonique, du sulfate de magnésium et du citrate de sodium.

Comme on peut le voir, la seule source de carbone dans le milieu est le citrate, et l'azote est le phosphate d'ammonium, l'omet des protéines et des glucides comme source de ces éléments, couramment présents dans d'autres milieux.

Par conséquent, les bactéries inoculées dans ce milieu ne peuvent se reproduire que s'il est capable de prendre le carbone du citrate. Le test était positif s'il y avait une turbidité au milieu. Cependant, j'avais la gêne occasionnée qu'une turbidité non spécifique pouvait se produire.

Ce problème a été résolu par Simmons en ajoutant de la gélose bromotimol à la formule originale de Koser. Bien que le principe soit le même, il est interprété différemment.

Base

Certaines bactéries ont la capacité de survivre en l'absence de fermentation ou de production d'acide lactique, ayant besoin d'atteindre l'énergie grâce à l'utilisation d'autres substrats. Dans ce test, la seule source de carbone offerte est le citrate.

Les bactéries capables de survivre dans ces conditions se métaboliser rapidement le citrate par un autre itinéraire vers le traditionnel, en utilisant le cycle d'acide tricarboxylique, ou le cycle de fermentation du citrate.

Le catabolisme du citrate par les bactéries comprend un mécanisme enzymatique sans l'intervention de la coenzyme à. Cette enzyme est connue sous le nom de Citrica (citrate oxalacétate-liasa) ou de démolase citrate. La réaction nécessite la présence d'un cation bivalent qui, dans ce cas, est fourni en magnésium.

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La réaction génère de l'oxaloacétate et du pyruvate, qui donnent ensuite naissance à des acides organiques au milieu d'un pH alcalin formé par l'utilisation de la source d'azote. Ces acides organiques sont utilisés comme une source de carbone générant des carbonates et des bicarbonates, alcalisant davantage le milieu.

Mode semé

Le milieu de citrate Simmons doit être légèrement inoculé dans la queue de poisson à l'aide de droite ou d'aiguille, et incubé pendant 24 heures à 35-37 ° C. A culminé le temps où les résultats sont observés.

La semée se fait uniquement à la surface de l'agar, sans ponction.

Interprétation

Si le milieu est la couleur d'origine (vert) et qu'il n'y a pas de croissance visible, le test est négatif, mais si le milieu change bleu, indique la présence de produits alcalins, qui est détecté par l'indicateur de pH. Dans ce cas, le test est positif.

Cela se produit parce que si les bactéries utilisent le carbone du citrate, il est également capable de prendre l'azote du phosphate d'ammonium avec lequel il libère de l'ammoniac, alcalisant le milieu.

D'un autre côté, si la croissance des bactéries est observée au milieu, mais qu'il n'y a pas de changement de couleur, le test doit également être considéré comme positif, car s'il y a une croissance, cela signifie que les bactéries ont pu utiliser le citrate comme un Source du carbone, bien qu'il n'y ait pas de changement de pH à l'époque (parfois cela peut prendre).

S'il y a un doute dans l'interprétation de la couleur finale, elle peut être comparée à un tube de citrate nonocculé.

préparation

Peser 24,2 GR du milieu déshydraté pour un litre d'eau. Mélanger et partir à environ 5 minutes. Terminer la dissolution du chauffage moyen pendant 1 ou deux minutes, agitant fréquemment.

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Servir 4 ml dans les tubes d'essai et d'autoclaves à 121 ° C pendant 15 minutes. Lorsque vous quittez l'autoclave, inclinant à l'aide d'un support, afin que l'agar soit solidifiée sous la forme d'un pic de flûte avec peu de taco ou d'arrière-plan et plus de lunette.

Le pH final du citrate moyen est de 6,9 ​​(couleur verte). Ce milieu est très sensible au changement de pH.

Un pH 6 ou moins, le milieu devient couleur jaune. Cette couleur n'est pas observée dans le test des bactéries.

Et à pH 7,6 ou plus, les changements moyens du bleu de la Prusse intense.

Utiliser

La gélose en citrate Simmons est utilisée pour identifier certains micro-organismes, en particulier les bacilles appartenant à la famille des entérobactéries et à d'autres bacilles de glucose non fermentant.

Considérations finales

Le milieu Citrate Simmons est un test très délicat, car des faux positifs peuvent être obtenus si certaines erreurs sont faites.

Les soins qui doivent être effectués sont les suivants:

Inoculo

Un inoculum bactérien très épais ou chargé ne doit pas être fait, car il peut provoquer un développement d'une couleur jaune cuivrée à la place de la semée, sans affecter le reste du milieu, mais peut croire qu'il y a une croissance. Cela ne signifie pas la positivité de la preuve. 

De même, un inoculum épais peut générer un faux positif, car les composés organiques préformés dans les parois cellulaires des bactéries morboundaires peuvent libérer suffisamment de carbone et d'azote pour tourner l'indicateur de pH.

Par conséquent, l'idéal est de semer en utilisant l'aiguille au lieu de la poignée de platine, pour éviter de prendre un matériau excédentaire.

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Semé

D'un autre côté, lorsque la batterie des tests biochimiques pour l'identification du micro-organisme en question est en question, il est important que le test du citrate soit le premier à inoculer, pour éviter la traînée de protéines ou de glucides à partir d'un autre milieu.

Dans cette circonstance, il est possible d'obtenir un faux positif, car toutes ces substances introduites par erreur seront métabolisées et entraîneront un changement de pH.

Une autre façon d'éviter la traînée des substances est de brûler la poignée et de prendre un nouvel inoculum entre un test et un autre.

Il faut également prendre soin de toucher la colonie pour effectuer l'inoculum, car il doit être évité pour faire glisser une partie de la gélose de la culture à partir de laquelle les bactéries proviennent, en raison de ce qui précède expliquée.

En ce sens, Matsen, Sherris et Branson recommandent de diluer l'inoculum en solution physiologique avant d'inoculter le test de citrate pour éviter le transfert d'autres sources de carbone.

Intensité des couleurs

Il convient de tenir compte du fait que l'intensité de la couleur produite lorsque le test est positif peut varier en fonction de la maison commerciale.

De plus, il existe des micro-organismes qui positifs à 24 heures, mais il existe d'autres souches qui nécessitent 48 heures ou plus pour produire un changement de pH.

Les références

1. BBL Simmons Citrate Agar Inlants. BD a récupéré.com.
2. Gélose de citrate Simmons. Récupéré de Britanialab.com.