Chromatogramme

Chromatogramme typique. Source: Healigon, Wikimedia Commons

Qu'est-ce que le chromatogramme?

Il chromatogramme Il s'agit d'un enregistrement graphique à deux dimensions obtenu dans un milieu absorbant, qui montre la séparation des substances par chromatographie. Dans le chromatogramme, un motif visible, des pics ou des taches, qui reflètent la séparation physique des composants d'un mélange.

La figure supérieure est un chromatogramme avec trois pics, a, b et c, trois composantes de l'échantillon séparés par chromatographie. Il est observé que chacun des trois pics a une hauteur et une emplacement différentes sur l'axe du temps chromatogramme.

L'axe des ordonnées, ou et enregistre des informations sur l'intensité du signal (en milivolts MV dans ce cas). Représente l'enregistrement, en fonction du détecteur, d'une propriété physique de la substance ou du composant séparé du mélange.

La hauteur du pic est proportionnelle à la concentration du composant séparé de l'échantillon dans un système optimal. Ainsi, par exemple, il est facile de visualiser que le composant B est plus proportionnel que A et C.

Dans l'abscisse ou l'axe x, le temps de rétention des composants de l'échantillon ou du mélange est représenté. C'est le moment qui passe de l'injection de l'échantillon jusqu'à ce qu'il s'arrête, étant différent pour chaque substance pure.

Qu'est-ce qu'un chromatogramme?

Il constitue le record final de l'ensemble du processus de chromatographie. De lui sont obtenus paramètres d'intérêt analytique. Ceci peut être obtenu sous forme de fichier électronique, un histogramme imprimé ou dans la prise en charge du processus (sur papier, par exemple).

L'axe Y est généré par des détecteurs de signal ou une intensité de réponse, comme spectrophotomètres. Une analyse temporelle optimale, des caractéristiques des pics ou des taches obtenues, la taille, l'emplacement, la couleur, entre autres, est indispensable.

Peut vous servir: liaison chimique

L'analyse des chromatogrammes nécessite généralement l'utilisation de contrôles ou de normes, de substances d'identité et de concentration connue. L'analyse de ces contrôles permet d'établir par comparaison avec les échantillons caractéristiques des composants de l'échantillon étudié.

Dans le chromatogramme, vous pouvez faire l'observation et l'analyse de la façon dont la séparation des composants d'un mélange a été faite. Son étude optimale vous permet d'identifier une substance, de montrer sa pureté, de quantifier la quantité de substances présentes dans un mélange, entre autres aspects.

Les informations extraites peuvent être qualitatives. Par exemple, lorsque des substances sont identifiées et que sa pureté est déterminée. Les informations quantitatives sont liées à la détermination du nombre de composants du mélange et à la concentration de l'analyte séparé.

Identification des substances

En analysant les résultats du chromatogramme, diverses substances peuvent être identifiées en comparant les temps de rétention avec celui des substances connues. On peut voir si les substances à l'étude parcourent la même distance si elles ont le même temps que les substances connues.

Par exemple, le chromatogramme permet de détecter et d'identifier, dans l'urine des athlètes, les métabolites médicamenteux tels que les stimulants et les stéroïdes. C'est un soutien important dans l'étude et la recherche de certains métabolites produits par les troubles génétiques chez le nouveau-né.

Le chromatogramme facilite la détection d'hydrocarbures halogénés présents dans l'eau potable, entre autres substances. Il est indispensable dans l'analyse du laboratoire de contrôle de la qualité, car il permet de détecter et d'identifier les contaminants présents dans les différents produits.

Classification de la pureté des substances

Dans un chromatogramme, vous pouvez distinguer les substances pures et impures. Une substance pure produirait un seul pic dans le chromatogramme, tandis qu'une substance impure produirait deux pics ou plus.

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Ajustement correctement les conditions dans lesquelles la chromatographie est effectuée, deux substances peuvent être évitées.

Quantification de substance

Par analyse de l'analyse des pics chromatogrammes, la concentration des composants de l'échantillon peut être calculée.

Par conséquent, la zone du bec est proportionnelle à la quantité de substance présente dans l'échantillon. Ces données quantitatives sont obtenues dans des systèmes à haute sensibilité, tels que ceux générés par des chromatographies de gaz ou de liquides, par exemple.

Gars

L'une des classifications des chromatogrammes est étroitement liée aux différents types de chromatographie, qui génèrent le chromatogramme correspondant.

Selon les conditions d'exécution, les détecteurs, entre autres aspects, le chromatogramme variera dans son contenu et sa qualité.

Chromatogrammes sur papier ou couche fine

Le chromatogramme peut être généré directement sur papier ou couche fine, montrant directement la distribution ou la distribution des composants de l'échantillon.

Il est très utile pour la séparation et l'étude des substances colorées qui ont des pigments naturels, comme la chlorophylle. Il peut être soumis à des processus de développement en cas de cas de couleur naturelle et est utile pour les études qualitatives.

Chromatogrammes générés par les détecteurs

Le chromatogramme peut également être obtenu en utilisant un détecteur qui enregistre la réponse, la sortie ou le signal final de chromatographie. Comme mentionné précédemment, ce détecteur est généralement un spectrophotomètre, un spectromètre de masse, des séquenceurs électrochimiques automatiques, entre autres.

Les chromatogrammes générés dans des colonnes, soit des gaz ou des liquides, ainsi que ceux de haute résolution en couche fine, utilisent des détecteurs.

Selon le type de détecteur, le chromatogramme peut être classé comme différentiel ou intégral, selon la forme de réponse du détecteur.

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Chromatogramme différentiel

Un détecteur différentiel mesure en continu le signal de réponse du chromatogramme, tandis que les détecteurs complets accumulent le signal correspondant.

Un chromatogramme différentiel est un chromatogramme obtenu par un détecteur différentiel. Parmi ces détecteurs peuvent être mentionnés, par exemple, les spectrophotomètres et les détecteurs de changement dans la conductivité électrique.

Ce type de chromatogramme a montré le résultat de la séparation des anions d'un échantillon, détecté par photométrie indirecte. Les mêmes résultats ont également été obtenus pour l'étude des ions, par exemple, avec une détection finale par comportement.

Chromatogramme différentiel. Source: Pixabay

Le graphique supérieur montre l'exemple d'un chromatogramme différentiel, obtenu par des séquenceurs d'ADN automatiques (acide désoxyribonucléique). Le graphique montre clairement des pointes à quatre couleurs, une couleur pour chacune des bases azotées de l'ADN.

En soutenant un programme informatisé, l'interprétation de la séquence des analyses ADN est facilitée, ainsi que pour des analytes plus complexes.

Chromatogramme intégral

Le chromatogramme intégral correspond à celui obtenu par un détecteur intégral. Ce chromatogramme montre la sortie d'un seul composant à l'étude. Plus plusieurs pics sont obtenus comme dans le différentiel.

Dans le chromatogramme intégral, un enregistrement est obtenu avec une forme décrite comme une étape. Cette forme est la partie du chromatogramme qui correspond à la quantité d'une seule substance qui sort de la colonne.

Les références

1. Bhanot, D. Comment lire un chromatogramme? La formation en laboratoire récupérée.com.
2. Qu'est-ce qu'un chromatogramme? Récupéré de ChromatographyToday.com.
3. Mathias, J. Guide d'un débutant: comment interpréter la chromatographie en phase gazeuse chromatographie Résultats de la spectrométrie de masse. Récupéré de InnovateChLabs.com.
4. Le chromatogramme. Récupéré de Secyta.est.
5. Chromatographie papier. Récupéré de.Wikipédia.org.