May Grünwald-Giemsa

Échantillon de leucémie myéloïde chronique, avec coloration de May Grünwald-Giemsa. Source: Paulo Henrique Orlandi Mourao, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Qu'est-ce que May Grünwald-Giemsa?

La May Grünwald-Giemsa, O Pappenheim, est une technique de coloration différentielle qui mélange les réactifs giemsa et peut Grünwald. Il est utilisé pour la différenciation des cellules sanguines normales et anormales dans le frottis sanguin périphérique et la moelle osseuse, ainsi que pour la coloration des coupes histologiques et des échantillons cytologiques.

Les réactifs -giemsa et May Grünwald- sont dérivés de la coloration Romanowsky, une technique basée sur la combinaison d'acide et de colorants de base.

Giemsa a amélioré la technique en stabilisant le mélange d'éosine, de bleu de méthylène et de ses dérivés, avec du glycérol. Au lieu de cela, peut Grünwald a utilisé l'éosine et le bleu de méthylène, en utilisant le méthanol comme solvant. Cette combinaison stratégique a donné d'excellents résultats.

Alors qu'en termes de morphologie cellulaire, l'observation agit similaire aux colorations de Giemsa et Wright, cette technique améliore le raffinage ci-dessus de la coloration des parasites qui provoquent le paludisme, le mal de Chagas, la leishmaniose et la trichomoniase.

De plus, il s'est avéré très utile pour l'étude cytologique du liquide spermatique. Non seulement il a été mis en évidence en montrant les caractéristiques morphologiques du sperme, mais permet également aux leucocytes, aux cellules épithéliales et aux cellules de spermatogenèse.

Base

La technique suit les bases de la coloration de Romanowsky, dans laquelle les colorants acides ont une affinité sélective pour les composants cellulaires de base et les composants acides attirent les colorants de base.

En d'autres termes, les structures cellulaires et les colorants ont des charges électriques positives ou négatives, les charges égales sont repoussées et différentes charges attirent.

Par exemple, les colorants de base, tels que le bleu de méthylène, sont chargés positivement et attirés par des structures chargées négativement. C'est pourquoi ce colorant se teint les noyaux riches en ADN et à l'ARN qui ont chargé des groupes phosphatés négativement.

Les granules du segmenté basophile et les cytoplasmes des globules blancs mononucléaires contenant de l'ARN sont également colorés.

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De plus, le colorant acide a une charge négative, il se lie donc à des structures chargées positivement telles que les érythrocytes et les granules des éosinophiles segmentés. Quant aux granules des neutrophiles segmentés, les deux colorants fixent.

Variété de colorants

Dans cette technique, une combinaison de réactions entre coloriage orthochromatique et métacromatique coexiste. Ortochromatique (éosine et bleu de méthylène) est fixé à la structure cellulaire à laquelle ils sont liés et fournissent une couleur stable qui ne varie pas.

D'un autre côté, métacromatique (ceux dérivés du bleu de méthylène, de l'azur et de l'azur b), leur couleur d'origine varie une fois unie à la structure spécifique, il peut même y avoir une variété de nuances.

Enfin, l'étape qui prend la solution de May Grünwald a besoin de la présence d'eau, car sans cela, le colorant pénètrera les structures, mais elle ne sera pas fixe. Pour se produire, le colorant doit devenir polaire ou ionize, et ainsi pouvoir précipiter et regarder les structures connexes.

Technique

Matériaux

• Feuilles de diaporama.
• Ponts de coloration.
• Solution de Grünwald.
• Talage Giemsa.
• Eau distillée.

Concentré May Grünwald Dye

0,25 GR de méthylène éosine bleu (colorant selon May Grünwald) et se dissoudre dans 100 ml de méthanol doit être pondéré. Ensuite, la préparation est mélangée pendant 1 heure et laissez reposer pendant 24 heures. Après le temps, il est filtré.

Pour appliquer la technique, le colorant de May Grünwald est dilué comme suit: pour 200 ml de colorant dilué, 30 ml de la solution concentrée sont mesurées, 20 ml de solution tampon et 150 ml d'eau distillée ajusté à pH 7.2-7.3. Par la suite, il est mélangé et filtré.

Coloriage de giemsa concentré

0,5 GR d'Azur-Eosin Peak de méthylène (colorant selon Giemsa), se dissolvent dans 50 ml de méthanol et ajouter 50 ml de glycérine.

Pour exécuter la technique, 1:10 est dilué avec une solution tampon et laisser reposer 10 minutes. Il peut être filtré si nécessaire.

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Préparation de la solution tampon à pH 7,2

Ils doivent être pesés:

• 40 mg de phosphate de potassium Di-hydrogène (KH2PO4).
• 151 mg de phosphate d'hydrogène di-syphotique 12-hydrate (Na2HPO4).

Les deux composés sont dissous dans 100 ml d'eau.

Sanguine ou Bone Medol Srols Tincion Procédure

Il y a deux modalités: un classique et un rapide.

Modalité classique

• Couvrir l'odeur pendant 2 ou 3 minutes avec la solution de May Grünwald diluée.
• Laver avec de l'eau distillée tamponnée pour éliminer la solution précédente.
• Couvrir avec la même solution de lavage tamponnée et laisser 1 minute. L'idée est que le colorant antérieur est fixé aux structures et qu'en même temps, les cellules sont hydratées.
• Ajouter 12 gouttes de teinture Giemsa diluées sur de l'eau tamponnée et souffler pour mélanger et homogénéiser. Laisser reposer 15 ou 20 minutes.
• Lavez le frottis avec de l'eau distillée tamponnée et placez-la pour sécher dans l'air.
• Focus et observer dans un microscope optique les cellules sanguines de teinture en utilisant la cible 40X. Si nécessaire, 100x peut être utilisé.

Mode rapide

• Couvrir le frottis avec le colorant de May Grünwald dilué pendant 1 minute.
• Laver avec de l'eau distillée tamponnée.
• Couvrir à l'eau tamponnée et laisser reposer 1 minute.
• Placer le colorant Giemsa dilué et partir pendant 5 minutes.
• Laver à l'eau distillée tamponnée et laisser sécher l'air.

Les techniques décrites ici sont un guide de guidage, mais il faut tenir compte du fait que les procédures et les temps de coloration varient selon la maison commerciale qui vend les réactifs. Il est conseillé de suivre les étapes strictement indiquées par chaque maison commerciale.

Technique de coloration du liquide de sperme étendu

• Couvrir les étendus d'une fine couche de la solution de May Grünwald pendant 4 minutes.
• Retirez le colorant et lavez avec de l'eau distillée.
• Placer une couche Giessa diluée (1:10) dans de l'eau distillée pendant 15 minutes.
• Retirez le colorant et lavez avec de l'eau distillée.
• Laisser sécher et observer au microscope.

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Spécifications importantes

La technique indique que les réactifs et les solutions de lavage ont un pH ajusté à 7.2-7.3, de sorte que les affinités des colorants par les structures cellulaires ne sont pas déformées et que la couleur finale attendue ne varie pas.

Applications

• Cette technique est utilisée par les laboratoires cliniques pour teindre le frottement du sang périphérique et la moelle osseuse, les coupes de tissus et les cytologies.
• Dans le domaine hématologique, cette technique est d'une importance vitale dans l'étude des anomalies des cellules en termes de forme, de taille et de nombre. Il s'agit d'un outil très précieux pour le diagnostic de certaines maladies, comme la leucémie et les anémies.
• Il présente un utilitaire exceptionnel lorsqu'il a demandé des parasites dans le domaine hématologique (Plasmodium sp et Cruzi Tripaosoma) ou histologique (Leishmanias SP).
• Quant à la cytologie vaginale, cette technique est particulièrement avantageuse pour l'observation de Trichomonas vaginalis. Il s'agit d'une découverte importante, car sa présence simule les peintures de carcinome In situ qui disparaissent ensuite lorsque le parasite est éliminé.
• Il a été un outil idéal pour l'étude des échantillons de sperme, car il fournit des informations précieuses sur la qualité des spermatozoïdes. Les données qu'il propose doivent faire principalement avec le nombre et la morphologie, ainsi qu'avec des cellules concomitantes qui peuvent être présentes et qui sont d'une importance vitale, telles que les cellules germinales, les leucocytes et les cellules épithéliales. Avec cette analyse, il est possible de décrire des anomalies observées dans le sperme sur la tête, le cou, la pièce du milieu et la pièce principale. De plus, ils peuvent également aider à montrer des cas d'hosospermie (présence de globules rouges) et de leukospermie ou de piospermie (augmentation du nombre de leucocytes dans le sperme).

Les références

1. Laboratoire Merck KGAA. Peut grünwald eosina microscopie bleue méthylène.
2. May-Grünwald-Giemsa Talage. Récupéré de es.Wikipédia.org.
3. Laboratoire de produits chimiques de verre. Réactifs pour les techniques histologiques, l'hématologie et la microbiologie. Récupéré des vestiaires.com.