Kinyoun Tacherie

Cryptosporidium parvum teint avec une tache de kinyoun. Source: Punlop Anusonpornperm, Wiikimedia Commons

Qu'est-ce que la tache de Kinyoun?

La Kinyoun Tacherie Il s'agit d'une technique de coloration utilisée pour teindre les bactéries et les parasites résistants à l'alcool acide. Il est né de la modification de la coloration de Ziehl-Neelsen. Les deux techniques sont interprétées de la même manière, mais elles diffèrent en deux éléments: dans la préparation du réactif principal et dans lequel la technique du kinyoun n'utilise pas la chaleur.

Pour cette raison, il est également connu sous le nom de ziehl-neelsen dans le froid modifié, ou la coloration froide de Kinyoun. Est indiqué pour la couleur de Mycobacterium tuberculosis, Leprae mycobacterium, Mycobactéries atypiques, Nocardias SP, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris et Cyclosporras cayetanensis.

Il est à noter que Nocardias Ils sont teints faiblement avec cette technique car ils sont des alcools partiellement acides, donc pour ce genre, il y a une modification de la méthodologie.

À son tour, la technique de Kinyoun a été combinée avec la technique trichromique modifiée par Didier pour la détection de coccidios (Cryptosporidium parvum et Isospora Belli) et des spores microsporidaires (Entérocytozoon bieneusi et Enchelitozoon intestinalis).

Base

Le principal réactif de la coloration est la carbolfucsin ou la fenicada fuchsin, qui a la propriété de rejoindre les acides carboliques existants à l'intérieur de la paroi cellulaire de Knight, riche en lipides (acides mycoliques) des mycobactéries et certains parasites.

Cette union n'est pas contrecarrée par le décolorant acide, par conséquent, les micro-organismes sont définis comme des acides d'alcool résistants.

Contrairement à la technique Ziehl-Neelsen - qui fixe le colorant par la chaleur - dans la technique du kinyoun, cette étape n'est pas nécessaire, car la solution de Fucada Fuchsin qui est préparée contient une forte concentration de phénol.

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Le phénol dissout le matériau lipidique de la paroi cellulaire, qui permet l'entrée du colorant carbolfucsin. Une fois le colorant qui a pénétré, il est fixé malgré le lavage avec l'acide alcoolique.

De cette façon, les micro-organismes résistants à l'acide alcoolique prennent la couleur rouge caractéristique, tandis que tout ce qui n'est pas de l'alcool acide est décoloré et teint en bleu.

Technique

Matériaux

• Fuchsin phoeniqué modifié.
• Acide alcoolique.
• Bleu de méthylène.

Kinyoun Préparation de la Fuchsina au Kinyoun

• Fuchsina de base: 4 gr.
• Phénol: 8 ml.
• Alcool (95%): 20 ml.
• Eau distillée: 100 ml.

La fuchsin de base dans l'alcool doit être lentement dissoute, se mélangeant constamment. Par la suite, le phénol cristallisé fond dans une salle de bain à 56 ° C. Une fois dissous, 8 ml sont ajoutés à la solution de fuchsin précédemment préparée.

Préparation de l'acide alcool

• Acide chlorhydrique concentré: 3 ml.
• Éthanol (95%): 97 ml.

Vous devez mesurer, rejoindre et mélanger.

Préparation du colorant de contraste bleu de méthylène

• Bleu méthylène: 0.3 g.
• Eau distillée: 100 ml.

Il pèse et se dissout.

Technique de coloration de Kinyoun

• Préparez un frottis directement à partir de l'échantillon, qui peut être des expectorations, du liquide pulmonaire, des sédiments d'urine, du liquide céphalo ou des excréments, entre autres, ou d'une suspension de micro-organismes obtenus à partir de colonies pures développées dans les milieux.
• Fixez le frottis de chaleur.
• Placer le frottis sur le pont de coloration et couvrir avec le réactif Fenicada Fuchsin de Kinyoun préparé. Laisser reposer pendant 3 ou 5 minutes.
• Laver à l'eau distillée.
• Décorer avec de l'alcool acide pendant 3 minutes et laver à nouveau avec de l'eau distillée.
• Décorez à nouveau avec de l'alcool acide pendant 1 ou 2 minutes jusqu'à ce qu'il soit plus colorant.
• Laver à l'eau distillée et laisser s'écouler, en plaçant la diapositive en position verticale.
• Couvrir la préparation avec du bleu de méthylène et partir pendant 4 minutes.
• Laver à l'eau distillée et laisser sécher l'air.
• Examiner 40X puis 100X.

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Si vous souhaitez améliorer et accélérer la coloration des micro-organismes d'acide d'alcool résistant, 1 goutte d'un agent hydratant est ajoutée (comme la grenouille n ° 7) à 30 ou 40 ml de fenick.

Certains laboratoires changent le colorant de contraste de méthylène bleu en raison du vert vif ou de l'acide picrique. Le premier donne une couleur verte à l'arrière-plan et le second génère une couleur jaune.

Technique spéciale du kinyoun pour Nocardias

Pour améliorer la coloration des bactéries de genre Nocardia Une modification de la coloration de Kinyoun est utilisée. La technique est la suivante:

• Couvrir le frottis de Fenicada Fuchsina de Kinyoun pendant 3 minutes.
• Laver à l'eau distillée.
• Décolorer brièvement avec de l'alcool préparé à 3% jusqu'à ce qu'il soit plus colorant.
• Laver à nouveau avec de l'eau distillée.
• Couvrir la préparation avec du bleu de méthylène et laisser ACT pendant 30 secondes.
• Laver à l'eau distillée et laisser sécher l'air.

Technique combinée de Fuchsina phoeniquée et trichromique modifiée par Didier

Cette technique est recommandée pour l'analyse des échantillons de selles à la recherche de coccidios et de spores de Microsporidium sp en même temps. La procédure à suivre est la suivante:

• Couvrir le frottis de Fenicada Fuchsina de Kinyoun pendant 10 minutes.
• Retirez le colorant et lavez avec de l'eau distillée.
• Décorer pendant 30 secondes avec de l'alcool d'acide chlorhydrique.
• Laver à nouveau avec de l'eau distillée.
• Couvrir le frottis d'une solution trichromique pendant 30 minutes à 37 ° C.
• Laver à l'eau distillée.
• Décorer pendant 10 secondes avec de l'alcool acide acétique.
• Lavez l'odeur pendant 30 secondes en utilisant de l'éthanol à 95%.

Contrôle de qualité

En tant que contrôle positif, les frottis sont préparés avec des souches de Mycobacterium tuberculosis et ils sont teints avec les réactifs prêts à vérifier que les bactéries prennent la bonne couleur (rouge-fucsia).

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Des contrôles négatifs peuvent également être utilisés en préparant le frottis avec toute contrainte qui n'est pas d'acide d'alcool résistant, vérifiant ainsi que l'ensemble de l'échantillon prend la couleur de contraste.

Technique Kinyoun par rapport à la technique Ziehl-Neelsen

La technique de Kinyoun est plus simple car il élimine le passage du chauffage, mais son principal avantage est qu'il évite l'émission de vapeurs, très toxique et provoque un cancer à long terme. Par conséquent, la coloration de Kinyoun est plus sûre pour le personnel chargé de l'exécution de la coloration.

Il est important de prendre en compte que vous devez faire attention que les réactifs ne sont pas en contact direct avec la peau, car ils sont corrosifs et que la décoloration est inflammable.

Quant aux inconvénients, un frottis négatif n'indique pas nécessairement que le micro-organisme n'est pas présent. De plus, la présence de détritus cellulaires peut provoquer de faux positifs, ce qui génère de la confusion dans le diagnostic.

Référence

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2. Orozco-Rico, M. Kinyoun Tacherie et deux coccidios en VIH. Magazine MD Medical. 
3. Forbes, B., Sahm, D., Weissfeld, un. Diagnostic microbiologique de Bailey & Scott. Pan -American Editorial S.POUR.