Tincion of Capsula Foundation and Techniques

La coloration à la capsule Il s'agit d'une technique de coloration différentielle qui possède la propriété de mettre en évidence la structure polysaccharide qui entoure certaines bactéries et levures appelées capsule. Il est utilisé dans les laboratoires cliniques pour aider le diagnostic de certaines pathologies causées par des micro-organismes à capsulation.

Il est également utilisé dans les laboratoires d'enseignement pour la démonstration de cette structure morphologique aux étudiants de carrières en sciences de la santé, comme: la médecine, la bioanalyse, les soins infirmiers ou la cytotechnologie, entre autres.

Klebsiella pneumoniae frottis teint avec une coloration à la capsule. Méthode de l'encre indienne avec safranine. Source:.À.В [Domaine public]

Il existe plusieurs techniques simples pour démontrer la présence de la capsule dans les micro-organismes qui le possèdent, ce sont: la coloration négative, la coloration d'Anthony et une variante qui combine les deux précédents.

La coloration négative est principalement utilisée dans des échantillons de LCR lorsque la présence de levure est suspectée Cryptococcus neoformans. Cette levure est une cause fréquente de méningite.

Cette technique utilise de la nigrosine ou de l'encre chinoise et est basée sur la création d'un contraste entre le fond de préparation et la capsule impénétrable du micro-organisme. Le fond est teint foncé et la capsule est incolore. De cette façon, cette structure est mise en évidence.

Quant à la technique Anthony, on peut dire qu'elle est principalement utilisée dans les laboratoires d'enseignement pour démontrer la structure polysaccharide dans les bactéries telles que Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae et Neisseria Meningitidis.

L'utilisation de cette technique à des fins de diagnostic est très rare, car il existe d'autres tests de routine qui permettent d'identifier ces micro-organismes.

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Base

La capsule est une forte structure de nature polysaccharide. Cela protège les micro-organismes de phagocytose et est donc une structure difficile à pénétrer.

C'est pourquoi les capsules Les entenons sont basés sur le contraste. Les colorants colorent le fond de la préparation tandis que la capsule est incolore.

Par conséquent, avec ces techniques, la capsule est facilement reconnaissable. Si le micro-organisme n'a pas de capsule, il ne se distinguera pas avec ce type de coloration, car tout sera teint à partir de la même couleur.

Il peut vous servir: structures homologues et analogues (avec des exemples)

Toutes les techniques utilisées pour colorer la capsule ont le même fond de teint même si elles utilisent différentes couleurs et procédures.

Techniques parà la coloration de la capsule

-Tachette Anthony

La coloration d'Anthony utilise le verre violet comme colorant. Cela va teindre le corps bactérien et le fond de couleur violette.

D'un autre côté, 20% de sulfate de cuivre sont utilisés. Cela sert de solution de lave.

Matériaux

- Lait à court terme.

- Lame portable.

- 1% de verre violet.

- 20% de sulfate de cuivre.

- Microscope optique.

- Huile d'immersion.

Procédure

Cette technique se compose de:

1. Cultivez le micro-organisme dans le lait en ligne pendant 36 heures.
2. Placez une goutte de la récolte à la fin d'une feuille de support d'objet et à côté pour placer une goutte de verre violet, mélanger et s'étendre à la fin d'une autre diapositive.
3. Extérieur et ne pas réparer la chaleur.
4. Lavez avec une solution de sulfate de cuivre à 20%, laissez sortir à l'extérieur.
5. Observer le microscope avec un objectif d'immersion. Rechercher vers les extrêmes des étendus.

Il est important de ne pas utiliser de chaleur ou de fixation, ou de sécher, car cela endommage la capsule. Ni laver à l'eau.

Interprétation

Le lait court-circuité est un excellent milieu de culture car il fournit les nutriments nécessaires au micro-organisme pour développer une capsule proéminente.

D'un autre côté, le lait litier formera un fond épais et compact qui sera teint violet avec le corps bactérien, mais la capsule qui entoure le micro-organisme est incolore. Par conséquent, un halo clair est observé autour du corps bactérien.

Peut vous servir: facteurs qui affectent l'activité enzymatique Représentation graphique sur l'observation microscopique d'un frottis de Klebsiella pneumoniae teint avec la coloration d'Anthony. Source: Fabriqué par l'auteur MSC. Marielsa Gil.

avantage

C'est une technique simple pour effectuer. Il ne nécessite pas de fixation.

De même, il convient de noter que d'autres supports de culture peuvent être utilisés, mais le milieu avec du lait est préféré car il a l'avantage qu'il fournit des capsules plus importantes.

Désavantages

C'est un peu plus de technique laborieuse que la coloration négative, et pour la visualisation, il faut attendre que la préparation sèche.

-Coloration négative

Matériaux

- Feuilles de diaporama.

- Medium de culture avec micro-organisme.

- Encre chinoise ou nigrosine.

- Microscope optique.

- Solution saline physiologique.

Procédure

Placer une goutte de solution saline physiologique sur les couvercles et dissoudre une petite partie de la culture microbienne. Il est important que la préparation ne soit pas très épaisse. Ensuite, placez une goutte d'encre chinoise ou nigrosine et mélangez.

Puis une feuille de revêtement est placée sur la préparation sans dépasser le liquide. Il est observé au microscope se concentrant d'abord sur la cible 10x, puis passe à 40X.

Cette technique peut également être utilisée directement sur des échantillons de LCR. C'est-à-dire qu'au lieu de placer une goutte de culture microbienne, une goutte est placée.

avantage

C'est une méthode simple de performance et en même temps économique. Il ne nécessite pas de fixation ou de séchage de la préparation.

Désavantages

Il a un inconvénient qu'il soit observé au microscope avant que la préparation ne sèche, car si cela se produit, les micro-organismes se contracteront, ce qui rendra la visualisation difficile.

D'un autre côté, des faux positifs peuvent se produire si l'analyste est inexpérimenté, car les leucocytes confondent généralement les levures.

L'observation des levures à capsule avec la technique chinoise ou nigrosine doit être considérée comme un diagnostic présumé de Cryptococcus neoformans Jusqu'à ce qu'il soit démontré avec la culture.

En effet, il y a d'autres levures qui pourraient être la cause de la méningite et pas seulement Cryptococcus neoformans, comme ceux du genre Candida et Rhodotorula, ainsi que d'autres espèces de Cryptococcus.

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Interprétation

S'il y a des micro-organismes à capsuler, un fond sombre sera observé, avec des corps transparents flottant dans le liquide, mettant en évidence la présence de la capsule.

Capsule cryptococcus neoformans teint à encre chinoise. Source: Crédit photo: fournisseurs de contenu (s): CDC / DR. Leanor Haley [domaine public]

-Technique de l'encre indienne

Cette technique peut également être réalisée avec la nigrosine. C'est une combinaison des techniques expliquées précédemment. Cette technique utilise du cristal violet et de l'Inde ou de l'encre nigrosine.

Le corps bactérien prend la couleur violette du verre violet car il est chargé négativement, tandis que la nigrosine colore le fond du frottis. Si la bactérie a une capsule, elle sera considérée comme un halo transparent autour du micro-organisme.

Le cristal violet peut être remplacé par l'une de ces colorations: safranine, la fuchsin de base ou le bleu de méthylène.

Matériaux

- Verre violet.

- Nigrosine ou encre indienne.

- Feuilles de diaporama.

- Microscope.

Procédure

- Cultivez le micro-organisme dans un milieu de culture.

- Placez une goutte de la récolte au bout d'une feuille de diapositives et à côté de placer une goutte d'encre indienne ou nigrosine, mélangez et étendez à la fin d'une autre diapositive.

- Sécher à l'air et ne pas réparer la chaleur.

- Couvrir d'une solution de verre violet par 1 minute, laver avec de l'eau distillée mais très délicatement (jet doux), laisser sortir à l'extérieur.

- Observer le microscope avec un objectif d'immersion. Rechercher vers les extrêmes des étendus.

Interprétation

Un corps bactérien violet et un fond sombre seront observés. La capsule, si elle est présente, sera incolore autour des bactéries.

Les références

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