Caractéristiques, préparation et applications du Congo Red

Il Congo Rouge Il s'agit d'un colorant azoïque protéique, formé par le couplage d'un sel de diazonium et un anneau aromatique actif. Cette substance est capable d'absorber le rayonnement électromagnétique dans le spectre visible, c'est pourquoi il présente une couleur intense.

Il est chargé négativement. Par conséquent, il a une affinité pour les composants cellulaires chargés positivement, comme certaines substances protéiques. Sa couleur varie en fonction du pH. En ce sens, si le milieu est acide (pH 5.2, la couleur est rouge intense.

Solution rouge déshydratée et colloïdale du Congo. Source: Pixinio.com et wikipedia.com

C'est une substance très polyvalente, car elle a plusieurs services publics. Il a été utilisé comme colorant dans l'industrie textile, ainsi que pour les cellules et les tissus.

Pour effectuer également des milieux de culture qui mesurent l'action enzymatique, en tant qu'indicateur de pH, comme substance témoin dans l'évaluation du bon fonctionnement des spectophotomètres, dans l'étude de la formation de biofiller, ou dans le diagnostic des amyloïdes.

De même, il a permis de distinguer les sérotypes bactériens et de champignons par l'identification de structures spécifiques dans sa paroi (lipopolysaccharides).

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Caractéristiques du rouge Congo

Cette substance a été découverte par Böttiger en 1884. Il s'agit d'un dérivé du diazonium formé par le bis-diazoïque de benchnine avec de l'acide naphtionique. La molécule rouge du Congo mesure 21 Armstrong et le poids moléculaire est d'environ 8000 g / mol.

Le rouge du Congo est caractérisé par le fait d'être soluble dans l'eau, et plus encore dans des solvants organiques tels que l'éthanol, la formation d'une solution colloïdale.

Il a une affinité pour la cellulose, par le tissu amyloïde et par des composants cellulaires chargés positivement.

préparation

Le rouge Congo est préparé à différentes concentrations en fonction de la technique à utiliser. La plupart utilisent le rouge Congo à 1%, 2%, 0,1%, entre autres.

Par exemple, pour préparer 2% le Congo, le Congo doit peser 2 g de colorant déshydraté et ajouter 100 ml d'eau distillée. Ensuite, il est stocké dans une bouteille ambrée.

Applications

Comme colorant dans l'industrie textile

Pendant un certain temps, il a été largement utilisé dans l'industrie du textile en raison de sa fixation dans le coton, mais il est actuellement désutilisé parce qu'il est cancérigène et aussi parce que la couleur n'est pas stable, décolorant à travers la friction.

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Détermination de la capacité de formation des biofilms

Il a été démontré que la capacité de formation des biofiller des micro-organismes est un facteur de virulence.

En ce sens, le colorant rouge du Congo est utilisé comme méthode pour déterminer la formation de biofilm. Le rouge du Congo se lie aux exopolisaccharides présents dans le biofilm. Cependant, par rapport à d'autres méthodes est la moins recommandée par les faux négatifs élevés qui se produisent.

La méthode utilise la gélose rouge du Congo, celle-ci est composée d'agar sanguine comme base, glucose (10 g / L) et le colorant rouge du Congo (0,4 g / L). Les souches à évaluer sont semées au milieu et sont incubées pendant 24 heures à 37 ° C, puis incubées pendant 48 heures à température ambiante.

Un test positif est mis en évidence si des colonies cristallines d'apparence noire et sèche sont observées.

Spectofotomètres Contrôle de la qualité

Pour évaluer si l'équipement de mesure de l'absorbance ou du traitement est conforme aux paramètres photométriques établis par les réglementations internationales, une technique simple peut être exécutée qui permet de déterminer si l'équipement émet des résultats dans les gammes d'acceptabilité.

L'une des techniques d'évaluation consiste à utiliser Congo Red, basé sur le point isosbétique.

Il est appelé point isosbétique à la longueur d'onde à laquelle le rouge Congo émet la même absorbance indépendamment du pH, de la concentration et de la température. La valeur d'absorbance est fixe et peut être utilisée comme référence.

Il est connu que le point isosbhétique théorique du rouge du Congo est de 541 nm. Si la valeur obtenue est différente, il est connu que l'équipement présente des problèmes de changement de longueur d'onde et doit être examiné par un technicien spécialisé.

Préparation des médias culturels

Ortiz et les collaborateurs décrivent un milieu de culture préparé avec la coloration rouge du Congo et la carboxyméthylcellulose appelée gélose CMC, afin de détecter les souches microbiennes de cellulite; c'est-à-dire les producteurs cellulaires (endogluconis, exoglucanase et ß-glucosidase).

Ce médium a une coloration intense. La couleur sera dissipée par l'action de l'enzyme endoglucanase qui rompt la structure de la carboxyméthylelulose. Cela suggère une réaction positive.

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La diminution de la viscosité et de l'absorbance permet la quantification de l'activité enzymatique. Par exemple, dans les souches de Streptomyces sp.

Identification des micro-organismes

Le Congo Red a une affinité pour les structures polysaccharidés de certaines souches, réalisant l'identification de ces micro-organismes. Parmi eux se trouvent le Escherichia coli, et la Shigella flexneri.

Des plaques d'agar rouge du Congo sont également utilisées pour obtenir des colonies caractéristiques, telles que  Azospirillum sp, qui donne des colonies rouges écarlates, entre autres.

Coloration des cellules et des tissus

L'une des applications les plus courantes du Congo Red est son utilité dans le diagnostic de l'amylose. Cette étrange maladie consiste en l'accumulation extracellulaire d'une protéine anormale dans divers organes. Cette protéine anormale est produite dans la moelle osseuse et est appelée amyloïde.

Congo Red a une forte affinité pour cette substance. Cette propriété a été utilisée pour démontrer sa présence dans les tissus histologiques. Le rouge du Congo est utilisé à côté de l'hématoxyline / éosine à cet effet.

L'union du tissu amyloïde et du rouge du Congo est donnée à travers les liaisons hydrogène non polaires, entre les groupes carboxyle et le groupe amino. La protéine amyloïde fournit les groupes carboxyle (COOH) et le Congo Red le groupe amino.

Le tissu amyloïde est coloré dans diverses nuances allant du rose au rouge intense vu au microscope optique. Dans les microscopes à double lumière polarisée, ces préparations sont observées avec un birrefringnce pathognomonique vert aux pommes.

C'est-à-dire qu'ils présentent le dichroïsme, car les fibres amiloïdes sont anisotropes. Cette observation confirme le diagnostic.

La coloration des tissus rouges du Congo est compatible avec d'autres méthodologies de diagnostic, telles que les méthodes immunocytochythiques, pouvant même présollir.

Comme indicateur de pH

La propriété de tourner devant les changements de pH est utilisée par la technique appelée chromoendoscopie.

Cette technique utilise des coloriages et des indicateurs de pH qui permettent de détecter certaines pathologies. Parmi eux, l'utilisation du rouge Congo, qui peut révéler les premiers projecteurs du cancer dans la muqueuse gastrique, utilisée comme marqueur d'acidité.

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La technique est basée sur le fait que le pH rouge est noir est noir. Par conséquent, après avoir placé une solution de rouge du Congo sur la muqueuse gastrique, les zones où il y a une pâleur pour prélever l'échantillon de biopsie sera choisie, c'est-à-dire où il n'y a pas de production d'acide. Cela suggère la présence d'une focalisation cancéreuse ou d'une perte de cellules pariétales.

Les références

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