Fondation et préparation Orceína

La Orceine Il s'agit d'un colorant violet naturel, extrait de divers lichens tels que: orchilla ou urchilla, lichen fructueux, Rocella Tincoria et Parella Lecanora principalement. La Rocella Tincoria Il se trouve dans le continent africain et américain, bien qu'il puisse être remplacé par d'autres espèces situées en Europe.

Ce colorant est largement utilisé dans les études cytogénétiques depuis les temps anciens. En ce sens, la préparation de l'orcéine qui comprend de l'acide acétique a été introduite par Lacourt en 1941, il a donc été initialement appelé la technique de Lacourt.

Structure chimique de la solution d'orcéine et d'orcéine. Source: Wikipedia.Org / oguenther à de.Wikipedia (Dr. Guenther) [domaine public]

De même, en raison de sa simplicité et de son faible coût, il a été utilisé pour la fabrication de la tourbière (coloration extraite des lichens) et dans des études histologiques (coloration cellulaire et tissulaire).

Plusieurs études ont utilisé cette coloration combinée à d'autres produits chimiques, tels que le picrocarminat ammoniacal et l'acide acétique, pour teindre respectivement les fibres élastiques et les chromosomes. À l'heure actuelle, l'orcéine reste utilisée dans les études cytogénétiques des animaux et des légumes.

Récemment, Silva et al. 2017 a utilisé avec succès cette coloration pour observer les différents changements qui se produisent dans les fibres élastiques de la peau du pouce chez les personnes âgées chiliennes. Cette étude a révélé comment les fibres du pouce sont modifiées avec le vieillissement.

En ce sens, les fibres élastiques ont été observées de couleur brun-negruzco chez les individus sur 80 ans; Tandis que dans le plus jeune (à partir de 60 ans), ils peuvent être vus avec du brun rougeâtre. Le cytoplasme et d'autres structures cellulaires deviennent vert jaunâtre.

Cela a permis de corroborer la présence et l'état des fibres élastiques, en termes de disposition, de quantité et d'intégrité. D'un autre côté, il a également été souligné que l'orcéine est utile pour identifier les anévrismes et diagnostiquer l'artérite, entre autres conditions.

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Base

L'orcéine fait partie du groupe d'oxazine de colorants et la coloration est basée sur son affinité pour l'ADN. Le colorant rejoint la charge négative de cette molécule, représentée par le groupe phosphate. C'est pourquoi les chromosomes sont teints pourpre.

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Cependant, le reste des structures cellulaires prend une autre couleur. Plus précisément, dans le cas des fibres élastiques, celles-ci sont colorées d'une couleur brun rougeâtre, les noyaux cellulaires d'un bleu violet bleu, tandis que le collagène n'est pas teint.

Par conséquent, l'orcéine est utilisée pour teindre la chromatine et différencier le sexe dans certaines mouches de mouches. De même, les noyaux et certaines inclusions hépatiques produites par les antigènes de l'hépatite B peuvent être de couleur.

Les solutions d'orcein ont des fonctions spécifiques dans la coloration. Orcein A, a la fonction d'adoucir les membranes cellulaires, provoquant leur mort et paralysant le processus de division. Pendant ce temps, l'orceine B est chargée de compléter la couleur de son adhérence aux chromosomes.

préparation

1% de solution d'acéto-orceine

Pour préparer une solution à 1%.

Ensuite, il est constamment mélangé pour homogénéiser la solution, pour laisser par la suite jusqu'à ce qu'il refroidisse. Enfin, 4ºC est stocké dans des bocaux sombres. Cette préparation a été utilisée par Flores 2012, pour l'observation des phases de maturation des ovocytes de vache.

Dans ce cas, par exemple, la solution d'acéto-orceine sur le tissu précédemment fixé dans de l'acide acétique pendant 24 heures est placée. Ce processus de coloration est effectué pendant 30 minutes et par la suite le tissu est soumis à une décoloration.

De même, cela peut être utilisé dans l'identification des organites dans les tissus multicellulaires. Dans ce cas, un frottis de la muqueuse buccale avec une goutte de la solution d'acéto-orcein est teinte, le revêtement est placé sur la feuille et immédiatement le noyau cellulaire peut être observé avec ses sous-structures.

Solution de proportion lacto-proportion 1%

De plus, l'orcéine peut être préparée avec d'autres produits chimiques tels que l'acide lactique et l'acide propionique. Pour ce faire, un gramme d'orcéine se dissout dans un pré-environnement à température ambiante de 23 ml d'acide lactique et 23 ml d'acide propionique; terminer le volume avec de l'eau distillée jusqu'à 100 ml.

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Avec cette solution lacto-propionique orceína, vous pouvez voir les différentes phases de la division méiotique des cellules végétales. Dans ce cas, l'échantillon précédemment préféré et hydrolysé est placé pendant 15 minutes dans la solution d'orcéine lacto-propionique, puis étend le tissu en tranches de diapositives.

Dans l'étude Duke 2016 sur les chromosomes polythéniques, il a utilisé une préparation de 2 grammes d'orcéine dilués dans de l'acide acétique et de 85% d'acide lactique, diluant avec une solution acide acétique à 65%. Enfin, il a observé les chromosomes dans les glandes salivaires du Drosophila Melanogaster.

Orcein A et Orcein B

Il est important de garder à l'esprit que selon l'échantillon et ce que vous souhaitez évaluer, la solution d'orceine appropriée est préparée. Ainsi, par exemple, la solution d'orcéine A est ajoutée d'acide chlorhydrique 1N pour l'observation des cellules de division.

Alors que la solution de l'orcéine B, finit par se dissoudre dans 45% d'acide acétique. Cette technique constitue une méthode de coloration abrégée et, en général, est utilisée comme complément aux structures chromosomiques de couleur.

Considérations finales

Depuis les derniers siècles, dans les pays du continent américain en tant qu'Argentine, vous pouvez obtenir des lichens tels que: Lecanora, Parmelia et Ombilicaria, qui sont de grandes sources d'orceine. Les zones européennes telles que les îles Canaries étaient également de grands producteurs de l'orchille à l'époque.

Cela a été exporté vers d'autres villes de ce même continent comme Gênes et des pays comme l'Angleterre, tandis que la Hollande. Ce lichen a donc été réduit par la suite jusqu'à ce qu'il soit sur le point d'éteindre.

Cela a conduit à l'orchille a été remplacée par d'autres plantes par des propriétés de teinture. Cependant, l'émergence de colorants synthétiques a contribué à l'achèvement de cette source d'orceine de licenine.

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Cela a été possible grâce à Cocq, qui en 1812 a décrit la synthèse de l'orceine, sachant que cela est synthétisé par un composé phénolique appelé orcinol. Cependant, malgré cela, l'orceine naturelle est toujours la préférée.

Cela peut être dû au fait que l'orcinol est un composé d'odeur très forte et dont l'exposition prolongée pourrait entraîner des risques pour la santé, tels que la perte de la capacité de détecter les odeurs. Ces dommages à l'hypophyse pourraient passer de temporaire à permanent, plus l'exposition est élevée.

Les références

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