Fondation histochimique, traitement, coloration

La Histochimie Il s'agit d'un outil très utile dans l'étude de la morphologie de divers tissus biologiques (légumes et animaux), en raison de son principe de réaction des composants tissulaires tels que les glucides, les lipides et les protéines, entre autres, avec des substances colorantes colorantes.

Cet outil précieux permet non seulement d'identifier la composition et la structure des tissus et des cellules, mais aussi les différentes réactions qui se produisent dans ces. De même, des dommages aux tissus possibles, causés par la présence de micro-organismes ou d'autres pathologies.

Coloration histochimique. Virus du Nil, bactéries gram positives et à Gram négatif (gramm), histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Source: Pixinio.com / wikipedia.org / néphron [cc by-sa 3.0 (https: // CreativeCommons.Org / licences / by-sa / 3.0)] / cdc / dr. George P. Kubica [domaine public]

L'histochimie, depuis des siècles passés, a fourni des contributions importantes, telles que la démonstration de l'existence de la barrière des cellules sanguines par Paul Ehrlich. Cela a été possible grâce au fait que le cerveau de l'expérimentation utilisé par Ehrlich n'a pas teint avec de l'aniline, qui est un colorant de base.

Cela a conduit à l'utilisation de divers colorants tels que le méthylène et le bleu de l'indophénol, afin de teindre les différents types de cellules. Cette constatation a donné lieu à la classification des cellules dans les acidophiles, basophiles et les neutrophiles, selon leur coloration spécifique.

Des études récentes ont appliqué cette technique pour démontrer la présence de divers composés, y compris les phénols, ainsi que les glucides et les lipides non structurels dans l'espèce de l'espèce Litsea glaucescens, mieux connu sous le nom de laurier. Étant ceux-ci, à la fois dans la feuille et dans le bois.

De même, Colares et al, 2016, ont identifié la plante d'intérêt médicinal Tarenaya Hassleriana, à travers des techniques histochimiques. Dans cette espèce, la présence d'amidon, de Mirosina, ainsi que des composés phénoliques et lipophiles, a été mis en évidence.

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Base

L'histochimie est basée sur la coloration des structures cellulaires ou des molécules présentes dans les tissus, grâce à leur affinité avec des colorants spécifiques. La réaction couleur de ces structures ou molécules dans leur format d'origine est ensuite visualisée au microscope optique ou au microscope électronique.

La spécificité de la coloration est due à la présence de groupes d'acceptation d'ions présents dans les cellules ou les molécules tissulaires.

Enfin, l'objectif des réactions histochimiques est de pouvoir prouver par coloration. Des plus grandes structures biologiques au plus petit des tissus et des cellules. Cela peut être réalisé grâce au fait que les colorants réagissent chimiquement avec les molécules des tissus, des cellules ou des organites.

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Poursuite

La réaction histochimique pourrait entraîner des étapes avant la réalisation de la technique, comme la fixation, l'inclusion et la coupe du tissu. Par conséquent, il convient de tenir compte du fait que dans ces étapes, vous pouvez endommager la structure que vous souhaitez identifier, jetant des résultats faux négatifs, même s'il est présent.

Malgré cela, la fixation précédente du tissu effectué correctement est importante, car elle empêche l'autolyse ou la destruction cellulaire. Pour ça.

L'inclusion du tissu est effectuée pour qu'elle maintient sa fermeté lors de la coupe et l'empêche ainsi d'être déformé. Enfin, la coupe se fait avec un microtome pour l'étude des échantillons par microscopie optique.

De plus, avant de procéder à une coloration histochimique, il est recommandé d'incorporer des contrôles positifs externes ou internes dans chaque lot de tests. Ainsi que l'utilisation de colorants spécifiques pour les structures pour étudier.

Coloration histochimique

De l'émergence de techniques histochimiques à nos jours, un large éventail de colorants ont été utilisés, parmi lesquels l'utilisation la plus fréquente telle que: Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen et Gram.

De même, d'autres colorants ont été utilisés moins fréquemment comme l'encre chinoise, l'orceine ou la coloration trichromique de Masson, entre autres.

L'acide périódique de Schiff (PAS)

Avec cette coloration, vous pouvez voir des molécules à haute teneur en glucides, comme: glycogène et mucine. Cependant, il est également utile pour l'identification de micro-organismes tels que les champignons et les parasites. En plus de certaines structures (membrane basale) dans la peau et dans d'autres tissus.

Le fondement de cette coloration est que la coloration oxida les liaisons carbone présentent entre deux groupes hydroxils à proximité. Cela produit la sortie du groupe aldéhyde, et cela est détecté par le réactif Schiff, jetant une couleur violette.

Le réactif Schiff est composé de fuchsin de base, de métabisulfite de sodium et d'acide chlorhydrique, ces composants étant responsables de la coloration violette, lorsque les groupes aldéhyde sont présents. Sinon, un acide incolore est généré.

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L'intensité de coloration dépendra de la quantité de groupes hydroxillis présents dans les monosaccharides. Par exemple, dans les champignons, les membranes basales, les mucinas et le glycogène, la couleur peut passer du rouge au violet, tandis que les noyaux sont teints en bleu.

Grocott

C'est l'une des taches qui présente la plus grande sensibilité à l'identification des champignons dans les tissus inclus dans la paraffine. Cela permet d'identifier les différentes structures fongiques: hyphes, spores, endospores, entre autres. Par conséquent, il est considéré comme une coloration de routine pour le diagnostic de la mycose.

En particulier, il est utilisé dans le diagnostic de la mycose pulmonaire tels que la pneumocystose et l'aspergilose causés par certains genres champignons Pneumocystis et Aspergillus, respectivement.

Cette solution contient de la nitrate d'argent et d'acide chromique, ce dernier étant un fixateur et une teinture. La fondation est que cet acide produit l'oxydation des hydroxils en aldéhydos, par les mucopolys présents dans les structures cueillies, par exemple dans la paroi cellulaire des champignons.

Enfin, l'argent présent dans la solution est oxydé par les aldéhydes, provoquant une coloration noire, qui est appelée réaction argentafin. Vous pouvez également utiliser des colorants de contraste tels que le vert clair et donc les structures fongiques en noir avec un fond vert clair seront observés.

Ziehl-neelsen

Cette coloration est basée sur la présence d'une résistance à l'alcool acide, partiellement ou total, dans certains micro-organismes tels que les genres Nocardia, Legionella et mycobacterium.

L'utilisation de cette coloration est recommandée, car la paroi cellulaire des micro-organismes cités précédemment, contient des lipides complexes qui entravent la pénétration de la coloration. Surtout dans les échantillons des voies respiratoires.

Des colorants forts tels que la fenicada fuchsin (colorant de base) y sont utilisés et la chaleur est appliquée afin que le micro-organisme puisse conserver le colorant et ne pas décolorer avec les acides et les alcools. Enfin, une solution de bleu de méthylène est appliquée pour colorer les structures qui ont été décolorées.

La présence d'une résistance à l'acide-alcool est observée dans les structures rouges, tandis que les structures qui ne résistent pas à la décoloration sont teintes en bleu.

Gram et encre chinoise

Le gramme est une coloration très utile dans le diagnostic des infections bactériennes et fongiques, entre autres. Cette coloration permet de différencier les micro-organismes à Gram positif du gramme négatif, manifestant clairement les différences qui existent dans la composition de la paroi cellulaire.

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Tandis que l'encre chinoise est une coloration qui est utilisée pour contraster les structures contenant des polysaccharides (capsule). C'est parce qu'un anneau se forme dans l'environnement, étant possible dans le Cryptococcus neoformans.

Orceine

Avec cette coloration, les fibres élastiques et les chromosomes de diverses cellules sont colorés, permettant l'évaluation du processus de maturation de ce dernier. Pour cette raison, il a été très utile dans les études cytogénétiques.

Ceci est basé sur la collecte du colorant par la charge négative de molécules telles que l'ADN, présents dans les centres de la grande variété de cellules. Donc ce sont du bleu teint en violet foncé.

Trichromique de Masson

Cette coloration est utilisée dans l'identification de certains micro-organismes ou matériaux qui contiennent des pigments sucrés. C'est le cas de la mycose, causée par des champignons dématiacs, une ugohifomicose et dans l'eumicetome à grains noirs.

Considérations finales

Ces dernières années, il y a eu de nombreuses avancées dans la création de nouvelles techniques de diagnostic, où l'histochimie est impliquée mais liée à d'autres fondations ou principes. Ces techniques poursuivent un objectif différent, comme c'est le cas avec l'immunohistochimie ou l'enzymohistochimie.

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