Caractéristiques de coloration à l'hématoxyline-éosine, utilisations, techniques

La Coloration de l'hématoxyline - Eosin Il s'agit d'une technique de coloration qui utilise la combinaison d'hématoxyline et de colorants d'éosine. Cette paire de colorants fait un duo parfait, car l'hématoxyline agit comme un colorant de base et l'éosine est un colorant acide.

La désignation de colorants de base ou acide ne fait pas référence au pH qu'ils obtiennent en solution, mais parle plutôt de la proportion qui prévaut en termes de charges anioniques ou cationiques qu'ils possèdent ou par l'emplacement du chromophore.

Épithélium cylindrique coloré à l'hématoxyline - Eosin (He) Source: Todd Straus et Vladimir Osipov [CC par 3.0 (https: // CreativeCommons.Org / licences / par / 3.0)]

En ce sens, l'hématoxyline est considérée comme un colorant de base (cationique) et a donc une affinité pour les structures acides, telles que le noyau des cellules. Alors que l'éosine étant un colorant acide (anionique) a une affinité pour les structures alcalines ou de base, comme le cytoplasme cellulaire.

Pour cette raison, cette combinaison de colorants est largement utilisée pour tacher. Les noyaux sont teintes en bleu foncé ou violet et le cytoplasme rose.

La coloration à l'hématoxyline-éosine est l'une des techniques de coloration les plus utilisées dans le domaine de l'histologie et de la cytologie, en raison de sa manipulation facile et de son faible coût. Il est utilisé pour la visualisation des cellules, des fibres nerveuses épaisses et la présence de certains micro-organismes tissulaires, tels que: parasites, champignons et bactéries, entre autres.

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Caractéristiques

Hématoxyline

L'hématoxyline est un colorant neutre. Cependant, le composant qui fournit de la couleur (chromophore) est situé dans le centre cationique ou basique de la molécule. D'où son affinité pour les structures acides. Sa formule chimique est C₁₆H₁₄SOIT₆ et son nom scientifique 7.11b-dihydroindeno [2,1-c] Chromene-3, 4.6a, 9,10 (6H) -Pentol.

Gardez principalement les centres des cellules, car ceux-ci sont très riches en acides nucléiques. Vous pouvez également teindre les inclusions cytoplasmiques d'origine virale.

De sorte que l'hématoxyline peut teinture doit être dans un état oxydé et attaché à un métal. Ce dernier servira à regarder le tissu, c'est-à-dire qu'il agira comme un mordant.

Lorsque l'hématoxyline est oxydée, l'hémateine ​​est appelée. L'oxydation est obtenue par l'exposition à l'oxygène (vieillissement) du réactif ou par des substances qui aident son oxydation (oxydation chimique).

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Eosina

Eosina est une teinture rouge ou rose. Il est insoluble dans l'eau bien qu'il existe une version hydrosoluble. Généralement, Eosina prépare la dissolution de l'alcool (éthanol à 95).

Colorer les cytoplasmes, les fibres musculaires, les organites cytoplasmiques et le collagène, mais ne teinture pas les centres de cellules. En effet, il est chargé négativement, il a donc une affinité pour les structures chargées positivement.

Il existe deux types d'Eosina le "Y" et le "B". Eosina "Y" est connue sous le nom d'Eosina jaune. Son nom scientifique est la fl uorescéine tétrabrome et sa formule chimique est C_vingtH₈BR₄SOIT₅.

D'un autre côté, l'éosine "B" est parfois appelée érythrosine B bleue. Son nom scientifique est la fl uorescéine dibromodinitro et la formule est C_vingtH₈BR₂N₂SOIT₉. Les deux sont très similaires et la différence d'utilisation de l'une ou de l'autre n'est pas vraiment perceptible. Cependant, le plus populaire est Eosina "Y".

Eosin a la propriété de distinguer une cellule vivante et morte, car elle n'est capable de traverser la membrane pour teindre son cytoplasme lorsque les cellules sont mortes, laissant le cytoplasme de la cellule incolore si elle reste vivante.

Applications

Coloration aux fibres nerveuses

Avec l'hématoxyline-éosine, les fibres nerveuses épaisses peuvent être teintes et identifiées. Cependant, il n'est pas utile de colorer les fibres nerveuses minces, car pour visualiser ce dernier, une coloration en argent est nécessaire.

Tinons de coupes de peau histologique

Dans les entenons de la couche cornéenne de la peau, le colorant qui agit est l'éosine, car à ce niveau, les cellules n'ont pas de noyau.

Dans la couche de granulose de la peau, l'hématoxyline tache fortement les granules de kératohiale qui se trouvent à l'intérieur des cellules granulaires. Au contraire, la couche épineuse de la peau est faiblement teinte avec l'hématoxyline, tandis que la couche basale ou germinale si elle est assez tachée.

L'éosine tache le cytoplasme de toutes les cellules et l'intensité des couleurs peut varier entre une couche et une autre.

Coloration à la coloration avec de l'hématoxyline-éosine

Gómez et collaborateurs, en 2005, ils ont démontré que la coloration avec l'hématoxyline -eosine était plus efficace pour identifier les cas d'amibiase par Entamoeba histolytica et Entamoeba disparate que la méthode de visualisation fraîche (solution saline et lugol) chez les patients atteints d'une maladie diarrhéique aiguë.

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Il a également été démontré qu'il a une grande sensibilité pour détecter l'érythrophagocytose (amibas qui ont des érythrocytes de phagocytes).

Coloration des coupes histologiques pour le diagnostic de l'infection

Walwyn et collaborateurs, en 2004, ils ont proposé l'utilisation de la coloration histologique pour détecter les micro-organismes provoquant des infections.

L'utilisation de la coloration de l'hématoxyline-éosine a réussi à visualiser les infections causées par Clostridium, Actinomyces, Spirile ou Candidose. Ils ont également réussi à observer la présence du parasite Sarcoptes Escabiei Dans les coupes en cuir et les inclusions virales par le cytomégalovirus et l'herpès dans des coupes de différents tissus.

Techniques

Pour les échantillons histologiques

La coloration des coupes histologiques passe par une série d'étapes. La première consiste à obtenir la coupe histologique. Cela doit être parafined puis obtenir les coupes (ultra-fin) avec un microtome. La technique se compose des étapes suivantes:

1-matel de l'excès de paraffine: Le xilol ou l'hémo -D peut être utilisé, submerger pendant 3-5 minutes.

2-relief de l'échantillon: Ceci est réalisé en immergeant l'échantillon à différentes concentrations d'alcools (éthanol) dans l'ordre décroissant (100 °, 90 °, 70 °). Dans tous les cas pendant 7 minutes.

3-élimination de l'excès d'alcool: Pour ce faire, il est immergé dans l'eau pendant 7 minutes.

4-collection avec hématoxyline: L'échantillon est submergé de 6 à 10 minutes sur un plateau contenant de l'hématoxyline. Le temps d'exposition dépend de la taille et de l'épaisseur de l'échantillon.

5-élimination de l'excès d'hématoxyline: L'eau a été lavée pendant 5 minutes, puis un passage rapide (10-20 secondes) est fabriqué par l'alcool acide. Par la suite lavé à nouveau avec de l'eau pendant 5 minutes. Puis immergé dans de l'éthanol à 96 ° par 1 minute.

6 couleurs avec Eosina: Pour ce faire, l'échantillon pendant 5 minutes dans le plateau Eosina est immergé.

7-Deshydratation de l'échantillon: Pour ce faire, les plateaux d'alcool (éthanol) sont à nouveau passés, mais cette fois dans l'ordre croissant. (70 °, 90 °, 100 °). (Pendant 5 secondes, 5 secondes, 1 minute respectivement).

Clarification de 8 échantillons: Ceci est exposé au xylol pendant 5 à 10 minutes et sèche pour sceller en permanence avec un baume canadien ou d'autres matériaux similaires.

Pour des échantillons de selles à la recherche de ET. histolytique

Dans une lamelle et étendue avec les excréments du patient et est fixé avec 80% d'alcool pendant 5 minutes. La feuille est immergée dans l'hématoxyline pendant 5 minutes et est immédiatement lavée à l'eau.

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Par la suite, il est rapidement immergé dans l'alcool acide puis dans l'eau ammoniacale. Laver à l'eau. Il est coloré pendant 5 minutes à Eosina. L'échantillon est déshydraté comme expliqué dans la technique précédente et finalement clarifié avec Xileno.

Préparation de réactif

- Hématoxyline

Dans un litre d'eau distillée, dissoudre 50 grammes de potassium ou de sulfate d'aluminium d'ammonium. Lorsque vous êtes complètement dissous, ajoutez 1 gramme d'hématoxyline cristallisée. Lors de la dissolution dans son intégralité, 1 GR d'acide citrique est ajouté avec 50 GR d'hydrate de chloral et 0,2 gr d'iodinus de sodium.

Le mélange est bouilli pendant 5 minutes, puis il est autorisé à refroidir et à filtrer pour éliminer les particules solides qui sont restées. Le réactif ainsi préparé peut être utilisé immédiatement.

- Eosina

Il peut être préparé avec une base alcoolique ou aqueuse.

Éosine alcoolique

Dans 100 ml d'éthanol à 95 °, dissolvez 0,5 gramme d'Eosina "Y". Puis ajoutez quelques gouttes d'acide acétique glaciaire.

2% eosin aqueux

En 1250 ml d'eau distillée, dissoudre 25 grammes d'éosine «Y» hydrosoluble. Puis ajoutez quelques gouttes d'acide acétique glaciaire.

Alcool acide

Mesurer 0,5 ml d'acide chlorhydrique concentré et compléter 100 ml avec de l'alcool absolu.

Eau ammoniaque

Mesure 0.5 ml d'ammoniac concentré et compléter 100 ml avec de l'eau distillée.

Les références

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