Bouillon de lactosado

Bails de lactage turbide. Source: Photo prise par l'auteur MSC. Marielsa Gil

Qu'est-ce que le bouillon de lactosado?

Il Bouillon de lactosado Il s'agit d'une culture liquide, non sélective, principalement utilisée comme moyen de pré-enrichissement dans l'isolation des souches de Salmonelle, de l'analyse microbiologique faite aux aliments transformés, produits laitiers ou eau. Ceci est recommandé par la Commission internationale sur les spécifications microbiologiques des aliments (ICMPF).

Le milieu contient de la gélatine enzymatique, de l'extrait de chair et de lactose, substances nécessaires à la croissance bactérienne. De plus, le lactose est un glucides fermensible, par conséquent, certains coliformes sont capables de le dépasser avec la production de gaz.

Par conséquent, le bouillon de Lactosado est recommandé par l'American Public Health Association (APHA) pour l'étude présumée des bactéries coliformes totales et fécales. Il est décrit comme une excellente alternative pour remplacer le bouillon de triptose au sulfate Lauril dans la technique standard du nombre le plus probable (NMP), utilisé pour l'analyse microbiologique des échantillons d'aliments, des eaux de lait et de surface, des résidus souterrains, récréatifs, domestiques et industriels.

Base

Pour l'analyse microbiologique de certains échantillons, le passage de pré-enrichissement est essentiel pour récupérer un micro-organisme spécifique qui peut être en très faible quantité ou dans des conditions non favorables qui violent ou minimisent sa viabilité. 

C'est le cas des aliments secs et transformés, peut-être contaminés par Salmonellas SP. Dans ces cas, si des bactéries sont présentes, ils ont subi des abus physiques et chimiques pendant le processus de production de produits.

De telle manière que les micro-organismes sont exposés à des facteurs négatifs tels que la déshydratation, l'exposition à des produits inhibiteurs ou toxiques, et le chevauchement généré par la présence d'autres bactéries en plus grande quantité, entre autres.

En ce sens, le bouillon de lactosado a un effet de réparation des structures endommagées du micro-organisme, ce qui le fait récupérer et se reproduire, de telle manière qu'il peut être détecté.

De même, le bouillon de lactosado a la capacité de diluer des substances inhibiteurs qui peuvent affecter sa viabilité, permettant son développement. De plus, la composition nutritionnelle du bouillon lactique est stratégique pour favoriser la croissance de Salmonella SP au-dessus des autres micro-organismes.

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Pour l'identification finale, elle doit être sous-culturel envers d'autres cultures définitives.

D'un autre côté, la composition du milieu permet également de détecter les micro-organismes fermentaires en lactose qui produisent du gaz.

préparation

Pour préparer un litre de bouillon de lactose, 13 grammes de milieu déshydraté doivent être pesés et dissous dans 1.000 ml d'eau distillée.

Pour aider la dissolution du milieu dans l'eau, vous pouvez chauffer un peu la solution, mais pas trop.

Une fois homogène, la solution est préparée comme suit: si le bouillon sera utilisé pour la recherche de coliformes, un choc avec des tubes à essai est préparé, qui est introduit un tube de fermentation Durham vers le bas.

Le tube de Durham est un détail très important, car il permettra la formation de gaz, les données d'une grande valeur dans la recherche de coliformes.

Préparé les tubes, 10 ml du bouillon de lactosado sont distribués, une quantité qui doit être suffisante pour couvrir l'ensemble du tube Durham.

Si le bouillon de Lactosado va être utilisé comme bouillon pré-enrique, il n'est pas nécessaire de placer le tube de fermentation de Durham. Dans ce cas, plus moyen (225 ml) est nécessaire, qui sera servi dans des pots de 500 ml, une bouche large et avec un couvercle de filetage résistant thermique.

Par la suite, les tubes ou les bouteilles sont emmenés à l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

Le médium doit être à un pH final de 6.9 ± 0.2 à 25 ° C.

Les bouillons sont stockés au réfrigérateur jusqu'à utilisation. Avant d'être utilisés, ils doivent tremper à température ambiante.

D'un autre côté, le bouillon de lactosado peut également être préparé à double concentration.

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Certains laboratoires ajoutent du Brome. Dans ce cas, le bouillon prend une couleur violette et s'il y a des changements de fermentation en jaune.

Applications

Dans les laboratoires de microbiologie, le bouillon de lactosado est largement utilisé car il s'agit d'un support relativement économique qui offre des résultats fiables et rapides (24-48 heures).

Il peut être utilisé pour l'analyse des coliformes totaux et fécaux dans l'eau et la nourriture, ou comme bouillon pré-enrique pour Salmonelle.

Pré-enrichissement

La pré-enrichissement est une étape avant l'enrichissement de l'échantillon, ce qui améliore considérablement la récupération des bactéries de genre Salmonelle Dans les aliments transformés.

Pour ce faire, l'échantillon des aliments solides (25 grammes) ou liquide (25 ml) est semé dans 225 ml de bouillon de lactosado, incubant pendant 24 à 48 heures. Par la suite, il sera sous-culturel dans un milieu enrichi comme un bouillon de sélénito cistina ou un bouillon de tétration. Ensuite, allez à Selective Media XLD et SS.

Analyse des coliformes totaux et fécaux

C'est un excellent milieu comme indicateur de la contamination fécale.

Par conséquent, le bouillon de lactosado est idéal pour la phase présumée de l'étude des coliformes par la méthode du nombre le plus probable.

Pour les échantillons dans lesquels un grand nombre de coliformes sont suspectés, une quantité inférieure de la même (1 ml) sera inoculée, tandis que pour les échantillons dans lesquels moins de coliformes sont suspectés, plus de volume d'échantillonnage est inoculé (10 ml).

Pour l'analyse, 10 sont fabriqués^-1, dix^-2, dix^-3, formant une batterie de tuyaux de 3 à 5 pour chaque concentration utilisée.

À partir de chaque dilution, le même volume est semé dans des bouillons de lactosado.

Les tubes sont incubés pendant 24 heures. Les bouillons négatifs sont incubés pendant 24 heures de plus.

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L'interprétation des résultats se fait par l'observation de deux caractéristiques: la première est la présence ou l'absence de turbidité, et comme ce milieu ne contient pas de pH indicateur, il n'y aura pas de changement de couleur.

Le second est la production de gaz. Le gaz est facilement mis en évidence dans le tube de Durham, par l'apparition d'une ou plusieurs bulles d'air à l'intérieur.

Il est considéré comme positif si les deux caractéristiques sont observées, c'est-à-dire la turbidité avec production de gaz. Les tubes positifs doivent être rejetés dans des supports de confirmation (bouillon vert biliaire brillant à 2% et bouillon EC).

Contrôle de qualité moyenne

• Dans la préparation du milieu, il est important de ne pas oublier de placer les tubes Durhams si le but de la même chose est l'étude des coliformes.
• Ne surchauffez pas le milieu avant de stériliser.
• Distribuer dans les tubes à essai avant de stériliser, jamais.
• N'utilisez pas si le support a plus de 3 mois.
• N'utilisez pas si un changement des caractéristiques habituels du milieu est observé.
• Lors de la préparation d'un lot-lactosado Broth, vous devez prouver la qualité des mêmes souches de semis appelées Escherichia coli, Enterobacter Aerogenes, Citrobacter freundii et Klebsiella pneumoniae. Ils se développent très bien, avec la production de gaz (contrôle positif).
• Il peut également inclure Pseudomonas aeruginosa, Salmonelle Typhimurium soit Enterococcus faecalis, Ils poussent bien, mais sans production de gaz (contrôle négatif).
• Il doit être en attente que la couleur d'origine du milieu déshydraté soit beige et celle du milieu préparé en jaune très clair et transparent. Si un changement de couleur ou d'apparence est observé, il peut y avoir une détérioration de la même.

Les références

1. Acevedo r., Severiche, C., Castillo, m. Biologie environnementale et microbiologie. Université de Carthagène, Colombie.
2. Conda pronadisa Laboratories. Double concentration du bouillon de lactose (pharmacie européenne).