Bouillon d'urée Qu'est-ce que la fondation, la préparation, utilise

Il Bouillon d'urée C'est un milieu de culture liquide, utilisé pour démontrer la présence de l'enzyme d'Ureasa dans certains micro-organismes. L'Ureasa est une enzyme microbienne qui se produit de manière constitutive, c'est-à-dire qu'elle est synthétisée indépendamment ou non en étant le substrat sur lequel il agit.

La fonction de l'ureasa est liée à la décomposition des composés organiques. Tous les micro-organismes ne sont pas capables de synthétiser cette enzyme, donc sa détermination en laboratoire vous permet d'identifier certaines souches bactériennes et même de différencier les espèces du même sexe.

Il existe deux types de test d'urée: Stuart et Christensen. Ils diffèrent dans leur composition et leur sensibilité. Le premier est spécial pour montrer une grande quantité d'Ureasa produite par les espèces du genre protéique.

Le second est plus sensible et peut détecter de petites quantités d'Ureasa ces derniers temps par d'autres genres bactériens, tels que Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter et Mycobacterium.

Le bouillon d'urée de Stuart est composé d'urée, de chlorure de sodium, de phosphat dipotassium.

Alors que le bouillon ou l'emprise d'urée de Christensen est composé de peptonas, de chlorure de sodium, de phosphate de monopotásique, de glucose, d'urée, de rouge phénol, d'eau distillée et d'agar. Ce dernier seulement si c'est le milieu solide.

Base

L'enzyme d'Ureasa hydrolyse l'urée pour former l'anhydride carbonique, l'eau et deux molécules d'ammoniac. Ces composés réagissent pour former le produit final appelé carbonate d'ammonium.

Urée de Stuart

Le bouillon d'urée de Stuart est plus tamponné avec un pH de 6,8. Par conséquent, le micro-organisme doit être capable de former de grandes quantités d'ammonium pour tourner le rouge de Fenol. Le pH doit s'élever au-dessus de 8.

Par conséquent, le bouillon d'urée de Stuart est sélectif pour les espèces de Proteus, donnant des résultats positifs dans 24 à 48 heures d'incubation, et n'est pas efficace pour les bactéries qui produisent peu d'ureasa ou qui hydrolysent lentement l'urée.

En effet, les espèces de Proteus sont capables d'utiliser l'urée comme source d'azote. D'un autre côté, d'autres bactéries productrices d'Ureasa ont besoin d'une source supplémentaire.

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Cependant, Pérez et al. (2002) ont déterminé que le bouillon d'urée de Stuart était aussi efficace que l'agar urée de Christensen, pour déterminer l'ureasa dans les souches de levure du candide.

Les auteurs de l'étude prétendent avoir atteint une coïncidence à 100% avec les deux médias (Stuart et Christensen) en incubant pendant 24 et 48 heures; Faire l'exception que les souches qui ont réussi à transformer les médias en une couleur rose forte rose ont pris des choses positives.

Cette explication est nécessaire, car Bodder (1970) a déclaré que presque toutes. En effet. Cela ne doit pas être interprété comme positif.

Le bouillon ou l'agar de l'urée de Christensen

Le bouillon ou l'agar de l'urée de Christensen est moins tamponné, pouvoir détecter de petites quantités d'ammonium. De plus, ce milieu est enrichi de peptonas et de glucose. Ces composés font que d'autres micro-organismes producteurs d'Ureasa qui ne se développent pas dans le bouillon Stuart se développent.

De même, le test d'urée de Christensen offre des résultats plus rapides, en particulier pour Proteus, en mesure de donner fortement positif en seulement 30 minutes en tant que temps minimum et jusqu'à 6 heures en tant que temps maximum.

Le reste des micro-organismes producteurs d'Ureasa parvient à tourner légèrement la couleur de l'environnement après 6 heures, et fortement après 24, 48, 72 heures ou plus, et même certaines souches peuvent donner de faibles réactions après 5 ou 6 jours.

Interprétation des deux médias (Stuart et Christensen)

Le milieu est à l'origine jaune-orange et une réaction positive transformera la couleur du milieu à la fucsia rose. L'intensité des couleurs est directement proportionnelle à la quantité d'ammonium produite.

Une réaction négative laissera la couleur d'origine à l'exception des levures, qui peuvent donner un rose pâle avec le milieu urée de Christensen.

préparation

Urée de Stuart

Peser les grammes nécessaires en fonction des indications de la maison commerciale. Se dissoudre dans l'eau distillée de préférence stérile.  N'utilisez pas de chaleur pour se dissoudre, car l'urée est sensible à la chaleur.

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Pour stériliser la méthode de filtration de la membrane est utilisée. Pour cela, un filtre de millipor est utilisé avec des pores de 0,45 µ de diamètre. N'utilisez pas l'autoclave. Une fois la solution filtrée, elle est distribuée dans des tubes stériles. Pour obtenir des résultats fiables, entre 1,5 ml doit être transféré en quantité minimale à 3 ml en quantité maximale par tube.

Gardez au réfrigérateur et à la température avant d'utiliser.

Si la méthode de filtration n'est pas disponible, le support doit être utilisé immédiatement pour obtenir des résultats fiables.

Une autre façon de préparer le bouillon d'urée de Stuart est la suivante:

Certaines maisons commerciales vendent le support de base pour le test d'urée, sans compter l'urée.

Le montant indiqué par la maison commerciale pèse. Il se dissout dans de l'eau distillée et stérilisé dans l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes. Laisser reposer un peu et lorsque le milieu est chaud 100 ml d'une solution d'urée préparée à 20% et le filtrage par filtration est ajouté.

Il est distribué en tubes stériles, comme décrit ci-dessus.

Le bouillon ou l'agar de l'urée de Christensen

-Préparation de la solution d'urée

Peser 29 GR d'urée déshydratée et se dissoudre dans 100 ml d'eau distillée. Utilisez la méthode de filtration pour stériliser. Pas automatiquement.

-Agar de base de l'urée

Dissoudre 24 gr de base déshydratée dans 950 ml d'eau distillée. Stériliser en autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes. Laisser reposer jusqu'à ce qu'il atteigne une température de 50 ° C et ajouter l'urée précédemment préparée de manière aseptique.

Versez 4 à 5 ml dans des tubes stériles et inclinez jusqu'à ce qu'ils se solidifient. Un long pic de flûte doit être.

Ce milieu peut également être préparé sous forme liquide.

Applications

Le test d'urée est extrêmement efficace pour distinguer le genre Proteus des autres genres de la famille Enterobacteriaceae, compte tenu de la réaction rapide que Proteus fournit.

Si la composition de Christensen est utilisée, le test aide à différencier les espèces du même genre. Par exemple, S. Haemolyticus et S. Warneri SSUR Staphylococcus Coagulase négative et bétahemolytique, Mais ils diffèrent dans ce S. Hémolytique C'est négatif et S. Warneri C'est l'urée positive.

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D'un autre côté, McNulty a utilisé avec succès 2% du bouillon d'urée de Christensen pour étudier la présence de Helicobacter pylori Dans les échantillons de biopsie prélevés sur la muqueuse gastrique (région antral).

La présence de H. pylori Il est mis en évidence avec un test d'urée positif. La durée pour observer les résultats est directement proportionnelle à la quantité de micro-organismes présents.

Comme on peut le voir, il s'agit d'une méthode simple pour le diagnostic de Helicobacter pylori Dans les biopsies gastriques.

Enfin, ce test est également utile pour différencier les espèces des genres Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus et Mycobacteria.

Test d'urée semé

Les deux méthodes nécessitent un fort inoculum microbien pour optimiser les résultats. Les colonies bactériennes sont de préférence tirées de l'agar sanguine et des levures de l'agar Sabouraud, à l'exception de quelques exceptions. L'inoculum est émulsionné dans l'environnement liquide.

Pour le bouillon d'urée de Stuart, 37 ºC est incubé pendant 24 à 48 heures, sachant qu'il ne recherche que des souches du genre protéique lorsque la souche est une bactérie. Pour les levures, vous pouvez incuber à 37 ° C ou à température ambiante pendant 24 à 48 heures d'incubation.

Dans le cas du bouillon d'urée de Christensen, 37 ºC est incubé pendant 24 heures. Si le test est négatif, il peut être incubé jusqu'à 6 jours. Si le test donne positif avant 6 heures du matin, il indique qu'il s'agit d'une souche du genre protéique.

Dans le cas de la gélose de l'urée de Christensen, la lunette de l'agar est fortement inoculée, sans perforation. Le bouillon est incuba et interpréter de la même manière.

Contrôle de qualité

Pour tester le support, vous pouvez utiliser des commandes de commandes, telles que Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 et Salmonella typhimurium.  Les deux premiers doivent donner des résultats positifs et les deux derniers résultats négatifs.

Les références

1. Laboratoires britanniques. Christensen Media (Agar de base d'urée). Disponible sur: Britanialab.com