Agar tsi ce qui est, fondation, préparation, utilise

Il Gélose TSI o La gélose en fer à sucre triple est un milieu de culture solide qui sert de test biochimique pour guider l'identification initiale des bacilles à Gram négatif. Il est basé sur des preuves.

Sa composition et sa fondation sont très similaires au test Kigler Hierro, avec la différence que ce dernier ne contient que du glucose et du lactose. D'un autre côté, - comme le nom l'indique - La gélose en fer à sucre triple contient trois glucides fermensibles: glucose, lactose et saccharose.

De plus, le milieu TSI a quatre dérivés protéiques qui en font une gélose très nutritive: extrait de levure, extrait de viande, peptone et protéine de peptone. Il contient également du sulfate d'ammonium ferreux, du thiosulfate de sodium, du chlorure de sodium, du phénol rouge et de l'agar.

L'incapacité d'un micro-organisme dans la fermentation du glucose présent dans l'environnement l'exclut immédiatement de l'appartenance à la famille Enterobacteriaceae. Par conséquent, ce test est essentiel pour décider quelle voie d'identification doit être prise pour déterminer le sexe et les espèces.

Chaque laboratoire décide si cela fonctionne avec la gélose TSI ou avec Kligler Hierro.

Base

Chacun des composés remplit une fonction dans le milieu.

Chlorure de sodium et d'agar

Le chlorure de sodium est nécessaire pour maintenir l'équilibre osmotique du milieu. Tandis que l'agar vous donne une cohérence solide.

Indicateur de pH (phénol rouge)

Le pH moyen préparé est équilibré à 7,3 et l'indicateur de pH (phénol rouge) devient jaune en dessous de 6,8. Cela signifie que de petites quantités d'acides produites par la fermentation des sucres transformeront le milieu rouge en milieu jaune.

S'il ne se produit pas de fermentation, il y aura une alcalisation du milieu en raison de l'utilisation de peptones, passant de rouge-orange à.

Dérivés des protéines (extrait de levure, extrait de viande, protéine peptone et peptone)

Lorsque les bactéries métabolisent les protéines présentes dans la gélose TSI, des amines sont produites qui alcalisent le milieu (principalement au niveau de la lunette), car la réaction a besoin d'oxygène. Les amines transforment la lunette en rouge fort.

Mais cela dépendra de la capacité de fermenter les bactéries ou non des glucides.

Fermentation des glucides (glucose, lactose et saccharose)

L'étude de la fermentation des sucres peut donner plusieurs images et chacune est interprétée différemment. L'interprétation du test divise les micro-organismes en 3 catégories: fermenteurs non glucose, fermenteur non lactose et fermenteur lactose / saccharose.

Il convient de noter que la quantité de glucose au milieu est limitée, tandis que la concentration de lactose et de saccharose est 10 fois plus élevée.

Les bactéries de la famille des Enterobacteriaceae et d'autres micro-organismes de fermentation du glucose commenceront à fermenter ce sucre car les glucides les plus simples consistent à obtenir de l'énergie pour obtenir de l'énergie.

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D'un autre côté, le lactose et le saccharose sont des glucides complexes qui doivent être décomposés et devenir du glucose afin qu'ils puissent entrer dans le cycle d'Embden-Meyerhof.

-Micro-organismes non fermentaires

Lorsque le micro-organisme inoculé n'est pas en mesure de fermenter le glucose, encore moins peut fermenter d'autres glucides. Par conséquent, les acides ne sont pas formés ici, mais il y a une formation d'amine dans la lunette en raison de l'utilisation de peptones.

Dans ce cas, le biseau devient fort.

Interprétation: K / K signifie un concours alcalin / fond alcalin ou neutre

Dans l'image trouvée au début de l'article, voir l'image du tube D.

Ce résultat indique que le micro-organisme n'appartient pas à la famille Enterobacteriaceae.

-Micro-organismes non fermentaires du lactose / saccharose

Si les bactéries sont capables de fermenter le glucose mais pas le lactose ou le saccharose, ce qui suit se produira:

Les bactéries consomment tout le glucose présent après environ 6 à 8 heures, en mesure d'acidifier la lunette et le taco; c'est-à-dire que l'agar sera complètement devenue jaune. Mais lorsque le glucose est épuisé et que l'on comprend l'impossibilité d'utiliser du lactose et du saccharose, les bactéries commencent le métabolisme des protéines.

Cette réaction nécessite de l'oxygène, donc la dégradation des peptonas se produit à la surface (lunette). Les amines ont produit alcléinize le biseauté jaune à rouge. Cette réaction est mise en évidence de 18 à 24 heures d'incubation.

Interprétation: K / A signifie une lunette alcaline et un taco acide.

Dans l'image trouvée au début de l'article, voir l'image du tube b.

-Micro-organismes fermentaires / saccharose

Les micro-organismes capables de fermenter le lactose et le saccharose peuvent évidemment fermenter le glucose. Une fois que la quantité minimale de glucose présente dans le milieu est épuisée, le pyruvate formé commence à se métaboliser pour former des acides à travers le cycle aérobie de Krebs, et pendant la période de 8 à 12 heures, tout le milieu sera jaune.

Si les bactéries sont capables de déplier du lactose ou du saccharose, les acides continueront à être produits, et après 18 à 24 heures, le tube entier - le taco- tac- continuera jaune.

Il convient de noter que l'utilisation du glucose prend.

Interprétation: A / A signifie fond de biseau acide / acide. Peut présenter du gaz ou non.

Dans l'image trouvée au début de l'article, voir l'image du tube A.

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Production de gaz

Certains micro-organismes sont capables de produire du gaz pendant la fermentation des sucres. Le gaz est mis en évidence dans le tube en raison de la pression qu'elle exerce à l'intérieur de l'agar. La pression provoque la formation de bulles ou le déplacement de l'agar. Parfois, la formation de gaz peut se fracturer dans l'environnement.

Il est important que lors de l'amolement du milieu TSI, la ponction se fait proprement à travers le centre de l'agar jusqu'à atteindre le fond. Si la ponction s'écarte aux murs du tube, il peut provoquer de faux positifs dans la production de gaz, car il échappera au canal formé par erreur.

La production de gaz, ainsi que les réactions qui se produisent dans le biseau d'agar, nécessitent de l'oxygène, il est donc recommandé que le tube soit recouvert de capuchon de coton, et si le couvercle de baquelite est utilisé, il ne doit pas être complètement ajusté.

La production de gaz est signalée comme positive (+) ou négative (-).

Tiosulfate de sodium et sulfate d'ammonium ferreux (Production de sulfure d'hydrogène)

Les bactéries capables de produire du sulfure d'hydrogène (gaz incolore), prennent du soufre de thiosulfate de sodium présent dans le milieu. Une fois le H formé₂S réagit avec le sulfate d'ammonium ferreux, produisant du sulfure de fer (précipité noir clairement visible).

H₂S est rapporté comme positif (+) ou négatif (-).

Dans l'image trouvée au début de l'article, voir l'image du tube C.

préparation

Peser 62,5 gr de la mi-sucre-are.

Chaud pour dissoudre l'agar. Bouillir. Distribuez 4 ml du milieu dans des tubes à essai 13/100 avec couvercle de coton.

Stériliser en autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes. Retirer de l'autoclave et laisser rester incliné. Il faut prendre soin que la base et le biseau aient la même distance.

Stocker dans un réfrigérateur de 2-8 ° C. Laisser un tempérament avant de semer la tension bactérienne.

La couleur du milieu déshydraté est beige légère et le milieu préparé est rouge-orange

Le pH final du milieu préparé est de 7,3 ± 0,2.

Applications

Le test TSI est largement utilisé au niveau du laboratoire de microbiologie. Ce test est indispensable pour guider le type de test qui doit être appliqué pour atteindre l'identification du genre et des espèces. Votre bonne exécution et votre interprétation peuvent économiser du matériel et du travail.

Si le résultat est un TSI K / K K et le test de cytochrome oxydase donne un positif, des tests doivent être utilisés pour l'identification de bacilles Gram négatif non fermentants, tels que les pseudomonas, alcalin, achromobacter, burkholderia, entre autres genres. S'il s'agit de l'oxydase négative, il est orienté vers l'Acinetobacter, les sténotrophomonas, etc.

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D'un autre côté, si un TSI A / A ou K / A est obtenu et que le test de cytochrome oxydase est négatif, ils réduisent les nitrates aux nitrites, nous serons certains qu'il s'agit d'un micro-organisme appartenant à la famille de l'entérobactériace. Dans ce cas, l'itinéraire d'identification sera orienté vers des tests spécifiques pour ce groupe de bactéries.

D'un autre côté, si une image K / A ou A / A est obtenue et que le test de cytochrome oxydase est positif, les tests supplémentaires seront dirigés vers l'identification des souches de fermentation qui n'appartiennent pas à la famille des entérobactéries, comme: Aeromonas , Plesiomonas, Vibrio et Pasteurella.

Un TSI avec du sulfure d'hydrogène, oxydase négative, guidera les genres suivants de la famille des Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella ou Salmonella.

Un TSI avec un sulfure d'hydrogène rare ou modéré dans la lunette alcaline avec fond alcalin et une oxydase positive, guidera des tests pour l'identification de bacilles à Gram négatif non fermentant producteurs de H de H₂S, comme Shewanella putrefaciens.

Enfin, le TSI peut être utilisé pour l'étude de la production de sulfure d'hydrogène dans des bacilles à Gram positif, en particulier lorsqu'il est soupçonné de Erysipeothrix rhusiopathiae.

Semé

Le milieu TSI doit être inoculé avec des colonies pures, isolées dans les cultures primaires ou sélectives. Si la colonie est tirée de moyens sélectifs qui ont été semés avec des échantillons avec une flore mélangée, il ne faut pas prendre soin de la surface, car dans la partie inférieure de la colonie, il peut y avoir des souches viables inhibées dans ce milieu.

Par conséquent, la poignée ne doit jamais refroidir dans un milieu sélectif, puis prendre la colonie et inoculer un milieu TSI.

La semée se fera avec une aiguille droite ou. La perforation sera effectuée, prendra soin de ce qu'il se passe à travers le centre du milieu jusqu'à atteindre le fond, puis la semée est terminée inoculant la surface en forme de zigzag. Ne faites pas deux crevaisons.

Incuber à 37 ° C en aérobiose pendant 18-24 heures. Interpréter à ce moment, ni avant, ni après.

Limites

Le test TSI doit être lu entre 18 et 24 heures d'incubation. Une lecture avant cette période peut donner une fausse fermentation A / A. Tandis qu'une lecture après cette période peut conduire à une image fausse négative de non-fermenteur, en raison de la consommation de peptones qui alcalisent le support.

Les références

1. Laboratoires britanniques. Agar TSI (triple gélose en fer à sucre). 2015. Disponible sur: Britanialab.com
2. Laboratoires BD. Triple Sugar Fer Gazar (gélose TSI). 2003. Disponible sur: BD.com