Bouillon de tétrationate ce qui est, fondation, préparation, utilisation

Il Bouillon de tétration O TT Broth est un milieu de culture liquide sélectif pour l'enrichissement et la récupération des souches du genre Salmonella. Il a été créé par Müeller et modifié plus tard par Kauffmann, donc il y a ceux qui l'appellent Müller-Kauffmann Broth.

Le milieu d'origine contenait la protéine Peptonas, le carbonate de calcium et le thiosulfate de sodium. Kauffmann a ajouté des sels biliaires et a créé une autre modalité avec un vert vif. Ces substances inhibent la croissance des coliformes, laissant le milieu libre pour le développement de bactéries pathogènes, en l'occurrence Salmonella.

Agrégat de la solution d'iodure d'iodure au bouillon de tétration. Source: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https: // CreativeCommons.Org / licences / by-sa / 4.0)]

La modification a été très réussie car la sensibilité du milieu a augmenté de manière significative. Par conséquent, il est actuellement utile pour la recherche de salmonellas dans tout type d'échantillon, mais en particulier pour les excréments solides ou liquides et les aliments.

Sa préparation se compose de deux phases; Le milieu commercial est une base pour préparer le bouillon de tétration, et plus tard afin que la tétration puisse être formé une solution d'iodure qui complète le milieu.

L'American Public Health Association (APHA) recommande l'utilisation du bouillon de tétratation complétée en vert vif pour l'enrichissement des échantillons à la recherche de salmonelles, car il est plus sélectif que le bouillon de tétration et le bouillon de sélénito.

En général, le bouillon de tétration est idéal lorsque la présence de bactéries du genre Salmonella est suspectée en petites quantités ou qui sont maltraitées par l'exposition à des substances inhibiteurs ou par des processus industriels qui minimisent leur viabilité.

Base

Les peptones présents correspondent à la caséine digréatique et à la peptique digreal digréal peptique. Ceux-ci fournissent la source de carbone, d'azote et de nutriments en général pour la croissance bactérienne.

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Pour sa part, le thiosulfate de sodium réagit avec la solution d'iodure pour former une tétration. Cela inhibe la croissance des coliformes et favorise le développement de bactéries qui contiennent l'enzyme tétrationato réductase, parmi lesquelles sont la salmonelle de genre, mais aussi Proteus.

Les sels biliaires agissent également comme une substance inhibitrice de la plupart des bactéries grammes positives et de certains grammes négatifs (coliformes).

Le carbonate de calcium absorbe les substances toxiques générées par la décomposition de la tétration, qui forme de l'acide sulfurique. En ce sens, le carbonate de calcium neutralise l'acidité en gardant le pH du milieu stable.

Dans le cas de la modalité avec un vert brillant, cette substance augmente la puissance sélective du bouillon de tétratation en inhibant d'autres micro-organismes autres que les Salmonella de genre.

préparation

-Bouillon de tétration

Solution d'iode iodurada

Peser:

• 6 gr d'iode.
• 5 GR d'iodure de potassium.

L'iodure de potassium se dissout dans environ 5 ml d'eau distillée stérile, puis l'iode est peu ajouté à petit pendant que le mélange est chauffé. Après avoir été complètement dissous, il est rincé avec de l'eau distillée stérile jusqu'à ce qu'elle atteigne un volume final de 20 ml.

Demi-base pour le bouillon de tétration

Peser 46 grammes de milieu déshydraté et suspendre dans 1 litre d'eau distillée stérile. Mélanger et chauffer jusqu'à sa dissolution totale, ne peut conduire que pendant quelques minutes. Ne stérilisez pas en autoclave. La base du milieu peut refroidir jusqu'à 45 ° C environ et à ce moment-là, 20 ml de la solution d'iodure sont ajoutés.

Après avoir ajouté la solution iodurée au milieu, il doit être utilisé immédiatement. Si vous ne souhaitez pas utiliser l'intégralité du mélange, procédez comme suit:

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10 ml du milieu de base sont distribués dans des tubes, et seuls à ceux qui vont être inoculés avec des échantillons sont ajoutés 0,2 ml de la solution iodurée.

Ceux qui ne seront pas utilisés peuvent encore être sauvés au réfrigérateur, cependant, car le milieu n'est pas stérilisé, l'idéal est de préparer la quantité exacte nécessaire.

La couleur du milieu avant d'ajouter la solution d'iodure d'iodure est blanc laiteux avec un précipité blanc et après l'agrégat est brun avec un précipité dense. Le précipité observé est normal et correspond au carbonate de calcium qui n'est pas dissous. Le pH final du milieu est de 8,4 ± 0,2.

-Variante du bouillon de tétrationate avec vert vif

Pour préparer le bouillon de tétration avec du vert vif, toutes les étapes décrites ci-dessus sont effectuées, mais en outre, il sera ajouté au mélange de la solution verte brillante à 0,1% préparée.

Vert brillant

Cette solution est préparée comme suit:

Peser 0,1 gr de vert vif et suspendre dans 100 ml d'eau distillée. Chauffer à bouillir pour obtenir sa dissolution totale. Économisez dans Amber Bottle.

Utiliser

Pour les échantillons de fèces (coprouture), le protocole est le suivant:

Inoculer 1 GR des excréments solides ou 1 ml d'excréments liquides dans un tube avec 10 ml de bouillon de tétrationate prêt à l'emploi. Étirez fortement et incuber l'aérobiose à 43 ° C pendant 6-24 heures.

Par la suite, prenez une aliquote de 10 à 20 µl du bouillon et montez dans un milieu sélectif pour Salmonella, comme la gélose SS, l'agar XLD, la gélose vert vif, la gélose entérique Hektoen, entre autres.

En parallèle, les moyens sélectifs pour Salmonella doivent être inoculés avec l'échantillon direct (excréments) sans enrichissement. Pour les échantillons d'écouvillons rectaux, téléchargez le matériau collecté dans le tube et procédez de la manière décrite ci-dessus.

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Pour les échantillons de nourriture, pèse 10 GR d'aliments solides ou 10 ml d'aliments liquides et inoculer une bouteille avec 100 ml de bouillon de tétratation prêt à l'emploi. Procéder de la même manière que celle décrite ci-dessus mais incuber 37 ° C.

Comme on peut le voir, la relation entre l'échantillon et le bouillon sera toujours 1:10.

Contrôle de qualité

Pour tester le milieu de culture, vous pouvez utiliser des contrôles connus. Les plus utilisés sont des souches certifiées ATCC.

Les souches à utiliser sont Salmonella typhimurium ATCC 14028, Abonie de Salmonella DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 et Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Pour les souches de Salmonella, un excellent développement est attendu, tandis que Escherichia coli Il peut avoir un développement faible ou régulier, et les souches gram positives (Enterococcus et Staphylococcus) sont partiellement ou totalement inhibées.

recommandations

-Comme ce milieu n'inhibe pas la croissance de Proteus, certains laboratoires placent généralement 40 mg / L de novobiocine pour éviter le développement de cette souche microbienne. L'antibiotique doit être ajouté avant la solution d'iodo iodure.

-Après avoir préparé le médium, y compris la solution d'iode d'iode, il ne devrait pas passer plus de 2 heures pour être inoculé.

-Au moment de distribution du milieu dans les tubes, le mélange doit être homogénéisé en continu pour remettre en suspension le précipité formé.

-Dans des échantillons moins contaminés, les échantillons de 35-37 ° C sont incubés, et dans des échantillons très pollués, l'incubation à 43 ° C est recommandée.

Les références

1. Médias BBL. 2005. Préparé en tube pour la culture des espèces de Salmonella.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique de Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.POUR. Argentine.