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Il Gélose endo ou l'endo moyenne est une culture différentielle solide et avec un certain degré de sélectivité. La formule originale a été créée par Endo en 1904 pour différencier les bactéries fermentaires du lactose non fermentant. Initial Salmonella typhi, Mais plus tard, l'objectif du support s'est tourné vers la recherche de coliformes.

Le début de l'agar Endo est resté, mais sa formulation a subi d'innombrables changements au fil des ans. Actuellement, le milieu est composé de tissu animal peptique, de lactose, d'hydrogène bouffeur, de sulfite de sodium, de fuchsin de base et d'agar et d'agar.

L'utilisation principale du milieu a été liée à l'isolement et à la différenciation des bacilles à Gram négatif appartenant à la famille Enterobacteriaceae et à d'autres familles voisines.

Pendant longtemps, il a été utilisé dans la détection de coliformes dans des échantillons d'eau, des produits laitiers et des aliments, mais aujourd'hui l'utilisation de ce milieu a été déplacée par d'autres de fonctions similaires. Cependant, certains laboratoires de microbiologie utilisent cette gélose à l'isolation à partir d'échantillons cliniques.

Base

L'agar Endo contient des peptones qui servent de source d'acides aminés, d'azote, de carbone et d'énergie, nécessaire à la croissance de micro-organismes peu exigeants.

D'un autre côté, le caractère légèrement sélectif de l'agar est fourni par l'agrégat du sulfite de sodium et de la fuchsine de base; Les deux composants inhibent partiellement ou totalement le développement de la plupart des bactéries grammes positives.

Le caractère différentiel est donné par la présence de glucides fermensibles, qui dans ce cas est le lactose et la fuchsin de base, qui sert également d'indicateur de pH.

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Les bactéries à Gram négatif qui poussent dans cette gélose et sont capables de fermenter le lactose formeront de fortes colonies roses; être pathognomonique de Escherichia coli La formation de colonies rouges foncées avec une brillance métallique verdâtre. Cela est dû à une production d'acide élevée à partir de la fermentation des glucides.

Il convient de noter que le milieu trouvé autour des colonies transforme également une couleur rose forte. Tandis que les bacilles à Gram négatif non fermentant lactose forment des colonies roses pâles similaires à la moyenne ou incolore.

Le phosphate d'hydrogène dopotassium équilibre le pH du milieu et l'agar est le composant qui fournit la consistance solide.

préparation

Gélose endo

Peser 41,5 gr du milieu déshydraté et se dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Chauffer le mélange en remuant fréquemment jusqu'à ce qu'il y ait une dissolution moyenne totale. Stériliser en autoclave à 121 ° C, 15 lb de pression, pendant 15 minutes.

Lorsque vous retirez de l'autoclave, laissez refroidir jusqu'à une température approximative de 45 à 50 ° C, secouez le mélange pour homogénéiser avant de servir. Versez 20 ml dans des assiettes stériles de Petri.

Laissez solidifier les plaques, investissez et économisez dans la plaque ou enveloppez avec du papier foncé avant d'économiser au réfrigérateur. Il est très important de protéger l'environnement préparé de la lumière directe. Une pratique recommandée consiste à préparer le montant exact nécessaire.

S'ils sont stockés dans un réfrigérateur, les plaques doivent être autorisées à tempérer avant d'utiliser.

Le pH moyen doit être compris entre 7,2 et 7,6 et la couleur du milieu préparé est de couleur rose pâle.

Agent M-Endo

Il existe une autre version de l'agar Endo (M-Endo) qui suit la formule McCarthy, Delaney et Grasso, qui contient plus de composés et varie sous la forme de préparation.

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Cette variante contient: lactose, triptose, enzymatique de caséine digérée, enzyme de tissus animaux, chlorure de sodium, phosphate de potassium de dibásic, sulfite de sodium, extrait de levure, lauril phosphate de potassium, fuchsine de base, disposition du sodium, sulfate de lauri.

Dans ce cas, 51 GR du milieu déshydraté pèse et sont en suspension dans 1 litre d'eau distillée contenant 20 ml d'éthanol.

Chauffer légèrement tout en remuant pour dissoudre le milieu complètement. Il ne doit pas surchauffer et être stérilisé dans l'autoclave. Une fois le mélange homogène, servez des plaques stériles de Pétri et laissez se solidifier.

Utiliser

Dans certains pays, il est toujours utilisé pour compter les coliformes totaux et fécaux dans les échantillons d'eau et d'alimentation, en particulier la présence de Escherichia coli comme indicateur principal de la contamination fécale.

L'agar M-Endo est recommandée par l'American Public Health Association (APHA) pour la surveillance et le contrôle des programmes de désinfection et de traitement des eaux usées, ainsi que dans l'évaluation de la qualité de l'eau potable.

La méthode la plus utilisée est la filtration de la membrane, enrichissement antérieur de l'échantillon avec un bouillon de sulfate de lauryle pendant 2 à 4 heures.

Il peut également être utilisé comme substitut de la gélose EMB dans l'analyse microbiologique des aliments et de l'eau par la technique de nombre la plus probable (NMP), spécifiquement dans la phase de confirmation complète pour corroborer la présence de ET. coli des bouillons EC troubles.

Contrôle de qualité

Pour évaluer la qualité du lot de fin de préparation, des contrôles connus ou certifiés sont semés.

Parmi les souches qui peuvent être utilisées à cet effet sont: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 et Enterococcus faecalis ATCC 11700.

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Les souches sont semées par épuisement et incubées à 37 ° C pendant 24 heures en aérobiose.

Les résultats attendus sont:

• Pour Escherichia coli: Colonies rouges fortes, avec brillance métallique.
• Pour ET. Cloacae et K. pneumoniae Les colonies doivent être des mucoïdes roses.
• Dans le cas de S. Typhimurium, s. Flexneri et p. Mirabilis Les colonies sont généralement du rose pâle ou incolore.
• Finalement, ET. Faecalis On s'attend à ce qu'il soit partiellement inhibé, donc sa croissance doit être pauvre avec de très petites colonies roses.

Limites

-Le milieu Endo a une puissance sélective, par conséquent, il peut faire pousser des micro-organismes à Gram positif tels que Staphylococcus, Enterococcus et même les levures.

-D'autres bacilles n'appartenaient pas à la famille Enterobacteriaceae peuvent se développer dans ce milieu, comme Pseudomonas sp et Aeromonas SP. Les caractéristiques de ces souches sont des colonies irrégulières incolores.

-Ce milieu préparé est très sensible à la lumière, par conséquent, une exposition prolongée à cette détérioration du système indicateur, endommageant irréversiblement l'environnement.

-Les composants moyens sont considérés comme cancérigènes, donc le contact direct doit être évité.

-Le milieu déshydraté est très hygroscopique et doit être maintenu dans son récipient d'origine à température ambiante, bien fermé et dans un environnement sec.

Les références

1. Laboratoires BD. Gélose endo. Disponible sur: BD.com
2. Laboratoires Neogen. Je suis de l'agar. Disponible sur: Foodsafety.Néogen.com