Fondation Peptonada, préparation et utilisations

Il eau de peptonada C'est un moyen d'enrichissement liquide, pas sélectif, principalement utilisé comme diluant d'échantillons d'aliments ou d'autres matériaux. Cela signifie que du point de vue chimique est très simple, il contient la peptone de la viande, du chlorure de sodium et de l'eau.

Il a une certaine valeur nutritionnelle, permettant d'enrichir l'échantillon. S'il y a des bactéries battues, ce milieu a la puissance de réparer la viabilité. Il est particulièrement utile dans la récupération des bactéries appartenant à la famille Enterobacteriaceae.

Eau peptonada dans les bocaux. Source: MSC. Marielsa Gil

Dans le cas de la récupération de Salmonellas, l'utilisation de la variante d'eau de Peptonada tamponnée est recommandée; Cela sert de moyen de pré-enrichissement de l'échantillon, dans ce cas, il contient d'autres éléments tels que le phosphate de dysótique et le phosphate de dipotassium.

Normalement, l'eau de Peptonada prépare le pH neutre, mais il existe d'autres variantes où le pH est nécessaire pour être de 8,5 ± 0,2 (alcalin), car les bactéries qui sont destinées à isoler est l'alcalophil Vibrio cholerae.

D'un autre côté, ce milieu peut être utilisé comme milieu de base pour les tests de fermentation des glucides.

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Base

Les peptonas fournissent les nutriments nécessaires au développement bactérien, en particulier l'azote et les acides aminés à chaîne courte, tandis que le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique.

De plus, le milieu permet de disperser, homogénéiser et réparer les cellules bactériennes qui ont été endommagées par la soumission aux processus industriels.

Comme le diluant est idéal, en remplaçant efficacement la solution physiologique (SSF) ou la solution d'amortissement du phosphate (PBS).

La croissance bactérienne devient évidente par l'observation de la turbidité.

préparation

Préparation maison (non commerciale)

Peser 1 gr de peptone et 8,5 gr de chlorure de sodium, se dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Le pH doit être ajusté à 7.0. Pour cela, vous pouvez utiliser du chlorure de sodium 1 n.

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Préparation à l'aide d'un support commercial

Peser 15 gr de milieu déshydraté et se dissoudre dans un litre d'eau distillée. Homogénéiser le mélange. Si nécessaire, le mélange est bouilli pendant 1 minute pour aider la solution totale. Servir dans des bocaux de 100 ml ou des tubes 10 ml si nécessaire. Autoclavar à 121 ° C pendant 15 minutes.

Refroidir et utiliser au réfrigérateur. Le pH final du milieu est de 7,2 ± 0,2.

La couleur du milieu déshydraté est légère et beige préparée est de l'ambre clair.

Préparation des tests de fermentation

À la préparation précédente - après stérilisation - les glucides doivent être ajoutés à une concentration finale de 1%, plus l'indicateur Andrade (fuchsin acide) ou le phénol rouge (0.018 g / l). Les tubes doivent être placés une cloche Durham pour l'observation de la formation de gaz.

Autres variantes d'eau Peptonada

-Eau peptonada tamponnée

Cela contient une caséine enzymatique hydrolysée, du chlorure de sodium, du phosphate dihydrogénique du potassium et de l'hydrogène sodium dodécahydrate de phosphate de sodium. Le pH final est de 7,0 ± 0,2.

Pour préparer, peser 20 gr du milieu déshydraté et se dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Partir pendant environ 5 minutes. Chauffer par 1 minute jusqu'à dissolution complètement.

Verser sur des pots adéquats en fonction du besoin. Stériliser en utilisant l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

-Eau de peptonada alcaline

Peser 25 gr du milieu déshydraté et se dissoudre dans 1 litre d'eau. Procéder comme décrit ci-dessus. Le pH varie de 8,3 à 8,7.

Utiliser

L'inoculum est effectué en plaçant directement l'échantillon.

Il est utilisé pour diluer les échantillons, surtout lorsqu'il est soupçonné qu'il peut y avoir des bactéries endommagées. En général, les dilutions sont 1:10 et 1: 100.

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Il est incubé pendant 24 heures en aérobiose à 35-37 ° C.

Échantillons de selles

Pour les échantillons de selles à la recherche de Salmonella, l'utilisation de l'eau tamponnée ou tamponnée est recommandée comme moyen de pré-enrique.

Pour ce faire, procédez comme suit:

Si les excréments sont formés pour prendre 1 gr d'échantillon. S'ils sont liquides, prenez 1 ml d'excréments et suspendez dans un tube avec 10 ml d'eau peptonada tamponnée. Dans le cas des écouvillons rectaux, téléchargez le matériau contenu dans l'écouvillon dans le tube avec de l'eau tamponnée Peptonada.

Dans tous les cas, mélanger et homogénéiser très bien l'échantillon.

Incuber à 37 ° C pendant 18 à 24 heures. Par la suite sous-culturel dans un bouillon d'enrichissement en tant que bouillon de bouillon sélénito ou bouillon de tétrationate à 37 ° C pendant 18-24 heures de plus. Enfin, grandissez dans les médias sélectifs pour Salmonella, comme Agar SS, Agar Xld, Hektoen Agar, entre autres.

Échantillons de nourriture

L'eau de peptonada est utilisée comme moyen d'enrichissement ou comme un simple diluant, mais si des espèces de salmonelles sont recherchées, il est utilisé comme moyen de pré-enrique, comme déjà décrit.

Dans la nourriture, procédez comme suit:

Pour les aliments solides, regrettez 25 GR de l'échantillon et pour les aliments liquides, mesurez 25 ml de la même. Placer cette partie dans des bocaux contenant 225 ml d'eau de peptonada. Mélanger et homogénéiser l'échantillon.

S'il est soupçonné que la charge microbienne est élevée, des dilutions en série ou décimales peuvent être effectuées pour faciliter le nombre de colonies formant des unités (UFC).

Le nombre de dilutions dépendra du type d'échantillon et de l'expérience analytique.

Si au contraire, on soupçonne que la charge microbienne est très faible, il n'est pas nécessaire d'effectuer des dilutions. Par la suite, subjectif dans les médias sélectifs.

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Dans le cas de la nourriture de la mer, comme les fruits de mer, le poisson, entre autres, à la recherche de Vibrio cholerae ou d'autres espèces de Vibrio, l'eau de peptonada ajustée à pH 8,5 (eau de peptonada alcaline) doit être utilisée (peptonada alcaline).

Contrôle de qualité

De chaque lot préparé, il faut incuber deux tubes sans inoculant pendant 24 heures en aérobiose à 37 ° C. Le temps est terminé, la turbidité ou le changement de couleur ne doit pas être observé.

Des contrôles connus peuvent également être utilisés pour évaluer son efficacité:

Pour cela, vous pouvez utiliser les souches bactériennes suivantes: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Dans tous les cas, un développement microbien satisfaisant est attendu, qui est observé par la turbidité de l'environnement.

Limites

-Le milieu déshydraté est très hygroscopique, il doit donc être tenu à l'écart de l'humidité.

-Le milieu ne doit pas être utilisé si un type de détérioration est observé.

-Le milieu de culture déshydraté doit être maintenu entre 10 et 35 ° C

-Le milieu préparé doit être conservé réfrigéré (2-8 ° C).

Les références

1. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B et Velázquez ou. Techniques d'analyse microbiologique alimentaire. 2009, 2e Ed. Faculté de chimie, Unam. Mexique. Version du manuel et des documents administratrice (AMYD) de la Faculté de chimie, UNAM 1. Disponible sur: http: // depa.Finesse.Unam.mx
2. Laboratoires britanniques. Eau peptonada tamponnée. 2015. Disponible sur: Britanialab.com
3. Laboratoires Neogen. Eau de peptonada. Disponible sur: Foodsafety.Néogen.com
4. Laboratoires britanniques. Eau de peptonada. 2015. Disponible sur: Britanialab.com
5. Merck Laboratories. Peptonada tampon. Disponible sur: Merckmillipore.com
6. Conda pronadisa Laboratories. Eau de peptonada alcaline. Disponible sur: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique de Bailey & Scott. 12 ed. Pan -American Editorial S.POUR. Argentine.