Fondation Hektoen, préparation et utilisations

Il Agar Haktoen O Agar Hektoen Enteric est un milieu de culture solide, sélectif et différentiel. Il a été créé à l'Institut Hektoen par King et Metzger pour l'isolement des bactéries entéropathogènes des genres Shigella et Salmonella.

Le milieu est composé de protéine peptone, d'extrait de levure, de sels biliaires, de lactose, de saccharose, de salicine, de thiosulfate de sodium, de chlorure de sodium, de citrate de fer, de citrate d'ammonium, bleu bromool, fuchsin acide et agar et agar. Cette formulation permet de différencier les genres Shigella et Salmonella du reste des bactéries capables de grandir dans ce milieu.

POUR. Hektoen Virgen B ague b. Haktoen Agar semé. Source: Flickr.com / Le uploader original était Philippinjl au Wikipedia français. [CC BY-SA 2.0 fr (https: // CreativeCommons.Org / licences / by-sa / 2.0 / fr / acte.dans)]

Bien qu'il existe d'autres médias avec la même fonction que l'agar Hektoen, cela a un plus grand avantage par rapport aux autres médias, surtout lorsqu'ils veulent récupérer les espèces de Shigella.

Les espèces des deux genres produisent des problèmes gastro-intestinaux graves dans l'être humain en raison de la consommation d'aliments contaminés; Par conséquent, la transmission est fécale - orale. C'est pourquoi l'utilisation de l'agar Hektoen est principalement indiquée dans l'analyse microbiologique des excréments et des échantillons de nourriture.

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Base

L'agar Hektoen contient des peptones et de l'extrait de levure comme source de nutriments, fournissant les éléments essentiels pour le développement microbien.

Cependant, il contient également des sels biliaires qui agissent inhibant la croissance de certaines bactéries, en particulier à Gram positif et à certains grammes négatifs. C'est pour cette raison qu'il est considéré comme un support sélectif.

D'un autre côté, l'agar Hektoen est un médium différentiel. Cette propriété est conférée par la présence de glucides fermensibles tels que le lactose, le dessin et la salicyine, à côté du système d'indicateur de pH, représenté par du bleu bromotimol et de la fuchsin acide.

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Toutes les bactéries capables de se développer dans ce milieu qui n'appartiennent pas au genre Salmonella et Shigella développeront des colonies de saumon ou d'orange à l'exception du genre Proteus. Cela est dû à la fermentation d'un ou plusieurs des glucides présents, qui acidifie le milieu, ce qui fait tourner l'indicateur de pH.

D'un autre côté, le genre Shigella et Salmonella ne sont en mesure de fermenter aucun des glucides présents, en utilisant uniquement des peptones comme source d'énergie, qui alcalise le milieu et donc leurs colonies sont bleu vert.

Également dans ce milieu, les bactéries capables de former du sulfure d'hydrogène (gaz incolore) peuvent être distinguées dans ce milieu. Le thiosulfate de sodium agit comme une source de sulfure tandis que le citrate de fer est l'agent révélateur. Les deux composés permettent la formation d'un précipité noir de sulfure de fer qui montre la réaction.

Le précipité noir au centre de la colonie avec un halo transparent autour donne une apparence de Fish Eye. Cette caractéristique suggère la présence du genre Salmonella.

Enfin, le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique et l'agar assure une cohérence solide à l'environnement.

préparation

Peser 76 GR de milieu déshydraté et se dissoudre dans un litre d'eau distillée. Surveillez le mélange puis partez au repos pendant 10 à 15 minutes. Il peut être chauffé et bouillant, donnant des mouvements rotatifs jusqu'à sa dissolution totale. Ce milieu n'est pas stérilisé en autoclave.

Lorsque le milieu atteint une température approximative de 45 ° C, un volume de 20 ml dans les plaques stériles de Petri est directement versée.

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L'agar est solidifiée. À ce moment-là, ils sont déjà prêts à être utilisés. Il est conseillé de les utiliser immédiatement. Si ce n'est pas possible, ils sont conservés au réfrigérateur jusqu'à leur utilisation.

Les plaques doivent être retirées à l'avance du réfrigérateur avant de les semer pour prendre la température ambiante.

Le pH moyen doit être de 7,5 ± 0,2. La couleur du milieu déshydraté est violet et la couleur préparée est en vert brun.

Utiliser

L'utilisation de l'agar Hektoen est recommandée pour la recherche de bactéries du genre Shigella et Salmonella dans les échantillons de nourriture et de nourriture.

La possibilité d'isoler ces bactéries est considérablement augmentée si l'échantillon dans des bouillons spéciaux est auparavant enrichi.

L'inoculum doit être fort et la plantation se fait par strression. Les plaques sont incubées à 37 ° C pendant 24 à 48 heures en aérobiose.

L'incubation pendant 48 heures est recommandée car les caractéristiques des colonies sont plus claires pour l'interprétation et la différenciation pour le moment.

Contrôle de qualité

Pour effectuer un contrôle de qualité à ce moyen, des souches bactériennes certifiées sont utilisées, telles que: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 et Shigella Sonnei ATCC 25931.

Les résultats attendus sont les suivants: Salmonella typhimurium et  Salmonella enteritidis Ils doivent développer des colonies vert bleuâtre avec ou sans centre noir. Tandis que les espèces de Shigella se développent sous forme de colonies bleuâtre.

Vous pouvez également inclure des souches de Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 et Staphylococcus aureus ATCC 25923.

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Dans ces cas, les caractéristiques observées sont les suivantes: ET. coli et K. pneumoniae Ils se développeront dans cette couleur de colonies moyennes saumon à l'orange, avec un précipité de la même couleur autour. Tandis que Proteus développera des colonies bleu-vert avec ou sans centre noir.

Tandis que S. aureus et  ET. Faecalis Ils doivent être inhibés, parfois ET. Faecalis parvient à grandir sous forme de colonies jaunes, très petites.

D'un autre côté, parce que ce milieu n'est pas stérilisé dans l'autoclave, il est important d'évaluer la stérilité du milieu. Par conséquent, à partir de chaque lot préparé, ils doivent être incubés d'une à deux plaques sans inoculer 37 ° C pendant 24 heures en aérobiose.

De toute évidence, il n'y a aucune croissance sur la plaque.

Limites

-Les espèces de Proteus peuvent se développer dans ce milieu et les caractéristiques de leurs colonies peuvent être confondues avec les espèces de Salmonella ou de Shigella. Pour cette raison, chaque colonie suspecte doit être confirmée avec des tests biochimiques.

-Il est nécessaire d'accompagner l'utilisation de ce milieu avec d'autres âges moins sélectifs, car si le micro-organisme recherché est à faible concentration, il ne pourrait pas se développer dans ce milieu.

-Ne surchauffez pas pendant sa préparation, car une chaleur excessive modifie la composition de l'environnement.

-Des colonies inhabituellement en fermentation du lactose peuvent apparaître qui peuvent passer inaperçus.

Les références

1. Contributeurs de Wikipedia. HEKTOEN ANTERRIQUE AGAR. Wikipedia, l'encyclopédie libre. 13 mars 2019, 23:38 UTC. DISPONIBLE À: .Wikipédia.Org / accédé le 16 mars 2019.
2. Laboratoires BD. Bd hektoen enterric gang (il gank). 2013. Disponible sur: BD.com
3. Laboratoires britanniques. HEKTOEN ENTÉRICO. 2015. Disponible sur: Britanialab.com
4. Laboratoires Diffco Francisco Soria Melguizo. Agar Haktoen. Disponible sur: F-Soria.est
5. MANUEL DIFCO & BBL, HEKTOEN ENTERRIC AGAR. 2e édition. Disponible en: BD.com / Europe