Fondation d'agar xld, préparation et utilisations

Il Agar XLD o Acho xilosa lysine Desoxicate est une culture solide sélective et différentielle pour l'isolation entéropathogène. Taylor a conçu la formule de gélose XL (xylose, lysine) afin d'améliorer l'isolement du genre Shigella.

Il a noté que ce genre était inhibé dans la plupart des médias destinés à l'isolement entéropathogène. Par la suite, il a été ajouté de déicolate de sodium, de thiosulfate de sodium et de citrate d'amonie ferrique pour augmenter sa sélectivité. Cette formule s'est avérée utile à la fois pour le shigella et l'isolement de Salmonella.

Différences par rapport aux colonies de Shigella, de Salmonella et de coliformes dans l'agar XLD. POUR. Shigella SP, B. Salmonella SP, C. Coliformes. Sources: A. Par: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, courtoisie: bibliothèque d'images de santé publique B. https: // télécharger.Wikimedia.org / wikipedia / commons / 1/1f / salmonella_species_growing_on_xld_agar _-_ affiche_h2s_production _-_.Jpg c. Par: CDC / DR. J. J. Agriculteur, courtoisie: bibliothèque d'images de santé publique

La gélose XLD est composée d'extrait de levure, de sodium, de xylose, de lysine, de lactose, de saccharose, de thiosulfate de sodium, de citrate d'ammonium ferrique, de chlorure de sodium, de phénol rouge et d'agar et d'agar. Dans la plupart des laboratoires de bactériologie, le duo d'agar Agar XLD et SS est utilisé pour l'étude des échantillons fécaux à la recherche de Shigella et Salmonella.

D'autres laboratoires préfèrent la combinaison de Chromagar Salmonella et d'agar XLD, entre autres options disponibles. Ces duos peuvent être préparés dans des assiettes doubles Petrie. D'un côté, ils placent l'agar xld et de l'autre côté de l'autre milieu choisi.

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Base

-Pouvoir nutritionnel

L'agar XLD a l'extrait de levure, qui sert de source de nutriments aux micro-organismes qui se développent dans cette gélose. De plus, la présence de glucides (xylose, saccharose et lactose) donne de l'énergie aux bactéries qui peuvent les fermenter.

-Sélectivité moyenne

En tant que substance inhibitrice, il présente une disposition de sodium; Cela empêche la croissance des bactéries gram positives, donnant le caractère sélectif moyen.

-Puissance différentielle

Colonies de shigella typiques

Comme déjà mentionné, la gélose XLD contient du xylose; Ce glucides est fermenté par toutes les bactéries qui se développent dans ce milieu à l'exception du genre Shigella.

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C'est l'une des caractéristiques que son caractère différentiel offre, car les colonies de Shigella distinguent le reste en développant des colonies rouges, tandis que les autres bactéries produisent des colonies jaunes.

Colonies typiques de Salmonella

La Salmonella de genre fermente également le xylose, générant initialement des colonies jaunes. Cependant, après avoir épuisé les glucides de xylose, attaque la lysine par son enzyme lysine décarboxylase. La décarboxylation de la lysine génère des alcalis qui font la couleur de la colonie et le rouge d'origine au rouge d'origine.

Ce comportement n'est effectué que par Salmonella, car les coliformes qui décarboxyle. En effet, les coliformes ferment également le lactose et le saccharose présents; Par conséquent, la production d'acide est très élevée, laissant la colonie jaune dans ces bactéries.

Il convient de noter que la Salmonella de genre ne fermente pas le saccharose, ni le lactose.

H₂S

La gélose XLD permet également de détecter les espèces de producteurs de Salmonella de H₂S; Pour ce faire, il a la source de sulfure représentée par le thiosulfate de sodium et un développeur de réaction qui est le citrate d'ammonium ferrique.

Ce dernier réagit avec H₂S (gaz incolore) et forme un précipité en noir visible sulfate de fer insoluble. En ce sens, les caractéristiques des colonies de Salmonella seront rouges avec un centre noir.

Il convient de noter que pour la réaction de H₂S, un pH alcalin est nécessaire. C'est pourquoi d'autres entérobactéries qui forment h₂Ils ne peuvent pas le faire ou le faire mal dans cet environnement, car la forte acidité qu'ils produisent lors de la fermentation des glucides présents inhibent ou entravent la réaction.

-Chlorure de sodium, gélose et rouge phénol

Enfin, le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique; L'agar est l'agent de solidification et le rouge du phénol détecte les changements de pH, tournant la couleur des colonies et le milieu.

préparation

Peser 55 gr de XLD déshydraté et se dissoudre dans 1 litre d'eau. Chauffer et secouer le mélange jusqu'à ce qu'il atteigne le point d'ébullition. Ne surchauffez pas, car la chaleur endommage le milieu et crée un précipité qui modifie la morphologie des colonies typiques.

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Ce médium ne doit pas être automatiquement autoclavé. Lors de la dissolution, vous devez passer à une salle de bain à partir de 50 ° C. Lorsque le refroidissement doit être servi directement sur des assiettes stériles de Petri. Ils peuvent être dégustés dans des plaques simples ou des plaques doubles. Ils sont autorisés à se solidifier et à rester au réfrigérateur jusqu'à utiliser.

Tempérer avant d'utiliser. Comme c'est un support non stérilisé, il est recommandé de le préparer à proximité de la date d'utilisation.

Le pH final du milieu doit être à 7,4 ± 0,2. La couleur de la préparation est rouge orange, translucide, sans précipité.

S'il y a une gélose de lysine xylose (XL), du sodium, du thiosulfate de sodium et du citrate de fer amonique peut être ajouté. De cette façon, la formule de gélose XLD est obtenue.

Applications

L'agar XLD est utilisée pour la récupération des entéropathogènes, principalement du genre Shigella et secondairement de la Salmonella de genre. Il est utile pour évaluer les tabourets, l'eau et les échantillons de nourriture.

Types d'échantillons

Tabouret

Les échantillons de selles peuvent être semées directement dans la gélose XLD, ce qui fait une bonne distribution du matériau pour obtenir des colonies isolées.

Pour améliorer la récupération de Salmonella, le XLD convenu des moyens d'enrichissement pour Salmonella peut être semé.

Nourriture

Dans le cas de la nourriture, des bouillons d'enrichissement peuvent être utilisés pour Salmonella et Shigella. Pour Salmonella, vous pouvez utiliser la cystine du bouillon de sélénito, un bouillon de tétration en vert vif, entre autres.

Dans le cas de Shigella, il peut être enrichi avec le bouillon de shigella avec 0,5 µ / ml de novobiocina, incubé à 42 ° ± 1 ° C pendant 16-20 heures.

Eau

Dans l'analyse de l'eau, la technique de filtration membranaire et l'utilisation de la gélose XLD, entre autres, sont recommandées.

Conditions semées et d'identification

Le milieu semé est incubé en aérobiose à 35 ° C pendant 24 à 48 heures.

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Les colonies typiques de chaque genre sont observées, les colonies suspectes doivent être effectuées des tests biochimiques d'identification.

Contrôle de qualité

Pour évaluer le contrôle de qualité moyen, les souches bactériennes suivantes peuvent être utilisées: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Abonie de Salmonella DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella Sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Le genre Salmonella est caractérisé par une présentation dans ces colonies rouges moyennes avec un centre noir ou des colonies complètement noires. Alors que dans le genre Shigella, les colonies doivent être rouges, c'est-à-dire la couleur du médium.

Dans le cas d Escherichia coli Il devrait être totalement ou partiellement inhibé; Si les colonies grandissent sont jaunes. Pour Proteus mirabilis Une croissance rare est attendue avec des colonies roses avec ou sans centre noir. Enfin, le genre Klebsiella se développera sous forme de colonies jaunes.

Considérations finales

La gélose XLD est très utilisée dans les laboratoires de bactériologie pour sa grande efficacité pour la récupération de Shigella et a également une bonne récupération du genre Salmonella.

Rall et collaborateurs (2005) dans leur travail intitulé "L'évaluation de trois bouillons d'enrichissement et de cinq médias solides pour la détection de Salmonella dans la volaille" a montré que sur les 3 médias classiques éprouvés (Agar vert vif, agar SS et Agar XLD), Agar XLD obtenu le meilleur taux de récupération.

Les pourcentages de récupération étaient les suivants: 13.8% pour la gélose vert vif, 27.6% pour SS et 34.5% pour xld. Il n'a été dépassé que par la gélose chromogène Rambach avec 48% de récupération et Chromagar avec 79.3%.

Les références

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