Gélose nutritive

Frottement bactérien avec e. Agar nutritive coli. Source: Martin Priestley, CC BY-SA 4.0, Wikimedia Commons

Qu'est-ce que l'agar nutritive?

Il gélose nutritive C'est un milieu de culture solide non sélectif et non diffféré. Dans cet environnement, toutes sortes de bactéries non exigeantes se développent du point de vue nutritionnel.

C'est un moyen simple et, malgré son nom, il contient une nutrition inférieure.

Son utilité en laboratoire est très variée. Principalement, il sert au subcultif des espèces, au maintien des souches, aux colonies qui comptent, comme base pour préparer le sang, entre autres.

De plus, en raison de sa couleur beige légère, la production de pigments générés par certaines souches bactériennes, comme le pigment verdâtre de Pseudomonas aeruginosa, Le pigment rouge brique produit par Serratia marcescens À température ambiante, le pigment jaune doré de Staphylococcus aureus, entre autres.

De plus, c'est l'un des médias de culture les plus économiques trouvés sur le marché.

Base

Comme mentionné ci-dessus, c'est un moyen très simple qui est basé sur la fourniture de substances nutritionnelles à la croissance bactérienne sans restriction et sans réactions complexes pour interpréter.

Comme le milieu est translucide, il est idéal pour compter les colonies par la méthode plantée en profondeur.

Composition

Il est principalement composé d'extrait de viande ou de levure, de peptonas ou de gélatine pancréatique, d'agar-gaugar, de chlorure de sodium et d'eau distillée.

L'extrait de viande ou de levure et de peptones représente les sources de carbone et de minéraux essentiels (azote, phosphore et soufre), qui sera utilisé par les bactéries comme source d'énergie et de facteurs de croissance.

De même, l'agar -agar est la base de tous les supports de culture solide, remplaçant la gélatine, qui était le premier composé de base utilisé par Robert Koch pour donner une cohérence solide à ses médias.

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L'agar est un polysaccharide composé de galactose, de galactomanano, d'agarose et d'agarpectin. Cumage à 40 ° C et fond près de 100 ° C.

Pour sa part, le chlorure de sodium fournit l'environnement nécessaire au développement bactérien.

Enfin, l'eau sert à hydrater et à dissoudre les composés lyophilisés. L'eau distillée ajustée au pH neutre doit être utilisée. L'eau actuelle ne doit pas être utilisée car elle contient du calcium et du magnésium, qui peuvent réagir avec les phosphates de l'environnement et former des sels insolubles.

préparation

Pour un litre d'agar nutritive, vous devez peser 31 GR du milieu déshydraté. Il est placé dans un fixola et se dissout dans un litre d'eau distillée. Après 5 minutes de repos, chauffer sur une source de chaleur et mélanger constamment jusqu'à ce qu'il bouillonne pendant 1 ou 2 minutes.

Ensuite, le fixola est placé dans une autoclave et stérilisé à 121 ° C pendant 20 minutes. Temps culminé, il est retiré de l'autoclave et est servi dans du Petri stérile.

Si les plaques de Pétri sont jetables (plastique), le milieu doit être distribué lorsque l'agar a une température approximative de 50 ° C, pour les empêcher de déformer une chaleur excessive.

Laisser solidifier et économiser sur un support inversé et réfrigérer dans un réfrigérateur à 2-8 ° C jusqu'à utiliser.

Les plaques doivent être tempérées avant d'être plantées. Les plaques d'agar nutritives ne doivent pas être utilisées si elles sont contaminées ou déshydratées.

Le pH moyen préparé doit être ajusté à 7,3 ± 0,2.

Applications

C'est le support de culture le plus simple utilisé dans le laboratoire de microbiologie. Sa formulation est excellente pour la croissance des bactéries non exigeantes.

Ses principales utilisations sont les suivantes:

• Comme base pour la préparation de la gélose sanguine: Parfois, il est utilisé comme base pour préparer du sang, cependant, ce n'est pas la base la plus couramment utilisée.
• Stimuler la sporulation des bactéries de spores: Il est particulièrement utile de stimuler la sporulation des bactéries qui formaient des spores, telles que Bacillus sp. Pour cela, une souche du genre est semée Bacille et incube pendant 24 heures à 37 ° C dans l'aérobiose. Une fois les colonies cultivées, la plaque est soumise à une contrainte de température, c'est-à-dire que la température du poêle à 44 ° C est augmentée et laissée pendant 24 heures de plus, ou est introduite dans un réfrigérateur pendant 24 heures. À la fin des temps, ils sont étendus de la culture et des taches avec des spores de Shaeffer-Fulton de coloration de gramme ou de coloration. Ils observeront les bacilles avec des endospores (spores à l'intérieur du bacille) et de l'exospore (spores hors du bacille).
• Entretien des souches: Certains laboratoires de recherche ou de soutien aux professeurs nécessitent des bactéries viables d'importance clinique aussi longtemps que possible, dans le but d'utiliser la Banque de bactéries (Bacterooteca) pour les travaux de recherche ou pour la préparation des pratiques pédagogiques, où les étudiants apprendront à manipuler et à les identifier micro-organismes. L'agar nutritive, ainsi que la perfusion cardiaque Cerebro, peuvent être utilisées à cet effet. L'agar est préparée, versée dans des tubes avec un couvercle de bquellite et s'appuyant sur une base, de sorte que l'agar se solidifie en formant un taco vers le bas et une lunette à la surface (pic de flûte). Chaque tube est étiqueté en plaçant le nom des bactéries qui seront semées et la date. Chacune des bactéries sera semée sur la lunette et sera incubée pendant 24 heures, une fois que les colonies se sont développées. Le Bacterooteca doit être renouvelé de 1 à 3 mois, pour éviter la contamination et la déshydratation de l'environnement, ainsi que la mort de bactéries. Seules les bactéries non exigeantes peuvent être maintenues de cette manière.
• Colonies: Bien qu'il existe des moyens spécialisés pour le nombre de colonies, comme le nombre standard, l'agar nutritive peut être utilisée à cet effet, soit par une surface semée avec une spatule Drigalski ou par profondeur. Par conséquent, il est très utile dans l'analyse microbiologique des aliments et de l'eau.
• Exécution des tests de diagnostic: Parce que c'est un moyen qui ne contient pas de sang, ni aucun autre additif, il est idéal pour prendre des colonies cultivées dans ce milieu pour effectuer le test de catalase. De plus, en raison de sa couleur lumineuse, il est indiqué qu'il fasse des tests d'oxydase directement sur une zone de la plage semée, sans interférence.
• Récupération aérobie mésophile de l'eau récréative (plages): La gélose nutritive préparée avec 10% d'eau de mer est utile pour l'évaluation des aérobies mésophiles dans les eaux de plages. De cette façon, vous pouvez voir le niveau de pollution réelle que les eaux ont avec ces micro-organismes, car dans ce type d'échantillons, les résultats se chevauchent lorsque les médias préparés de manière conventionnelle sont utilisés. Ceci est explicable en raison du changement brutal subi par les bactéries lors du passage d'un environnement hypersalisé à un environnement à faible sel, par conséquent, les micro-organismes entrent dans un état de léthargie dans lequel ils sont viables, mais pas cultivables.

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Les références

1. Forbes, B., Sahm, D., Weissfeld, un. Diagnostic microbiologique de Bailey & Scott. Pan -American Editorial S.POUR.
2. Koneman, E., Allen, S., Janda, W., Schreckenberger, P., Winn, W. Diagnostic microbiologique. Pan -American Editorial S.POUR.