BHI Agar Qu'est-ce que la fondation, la préparation, utilise

Il Gélose BHI o Infusion cardiaque du cerveau. C'est un milieu de culture solide nutritive. En espagnol, nous le désignons comme une perfusion pour le cœur de cerveau. Il s'agit d'un milieu de culture non sélectif, ce qui signifie que toutes sortes de bactéries à Gram positif et à Gram négatif peuvent être développées, ainsi que des levures et des champignons filamenteux.

Il est composé de perfusion de cerveau et de cœur de veau, hydrolyz peptique de la tissue animale.

Il convient de noter que l'agar BHI est l'un des milieux de culture les plus fréquents dans les laboratoires de bactériologie. Il peut être utilisé sans suppléments comme primaire, subjectif des colonies obtenues dans d'autres milieux sélectifs ou pour le maintien des souches en laboratoire.

D'un autre côté, c'est un moyen idéal d'être utilisé comme base dans la préparation de milieux enrichis, comme la gélose sanguine et la gélose au chocolat. Les deux idéaux pour isoler les micro-organismes exigeants du point de vue nutritionnel. Cependant, il convient de prendre en compte que, comme il contient du glucose, il ne convient pas à l'observation des modèles d'hémolyse.

De même, l'agar BHI peut être utilisée pour la préparation de moyens spéciaux pour l'isolement des micro-organismes pathogènes d'une croissance difficile dans les milieux communs, notamment: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae et histoplasma capsulatum.

Avec l'additif antibiotique, l'agar BHI devient un médium sélectif pour l'isolation fongique.

Base

C'est un moyen de culture nutritif pour isoler les micro-organismes modérément exigeants, pouvoir augmenter son enrichissement avec l'ajout de sang et d'autres suppléments nutritifs.

Il s'agit d'un milieu de culture non sélectif, permet donc la croissance des bactéries les plus positives et à Gram négatif, ainsi que certains champignons. Cependant, il peut devenir sélectif avec l'ajout d'antibiotiques.

Le milieu contient une perfusion de cerveau et de cœur de veau, de tissu animal hydrolysé et de tissu de caséine pancréatique hydrolysée; Tous ces composés agissent comme des sources de vitamines, d'acides aminés, d'azote et de carbone.

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Le glucose est un glucides qui fournit de l'énergie aux micro-organismes une fois qu'ils l'ont fermenté. Tandis que le chlorure de sodium et le phosphate disodique maintiennent l'équilibre osmotique et fournissent un pH proche de la neutralité. Enfin, l'agar donne une cohérence solide à l'environnement.

préparation

Peser 52 grammes de milieu déshydraté et se dissoudre dans un litre d'eau distillée. Emmenez le mélange à une source de chaleur jusqu'à bouillonne, agitant fréquemment pendant le processus de dissolution.

Vous pouvez préparer des coins ou des plaques d'agar BHI sans additifs.

Quartiers

Pour la préparation du coin, servez la préparation jusqu'à ce qu'ils remplissent la moitié de chaque tube, couvrent et stérilisent en autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes, lorsqu'ils se coudent sur une base jusqu'à ce qu'ils se solidifient. Restez par la suite au réfrigérateur jusqu'à utiliser.

Cales BHI pour bacteroteca. Source: Photo prise par l'auteur MSC. Marielsa Gil.

Assiettes

Le mélange dissous est autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes, lorsqu'il quitte, il est laissé refroidir jusqu'à 50 ° C et est servi 20 ml de milieu dans des plaques stériles de Petri. Ils sont autorisés à se solidifier, à être investis et stockés dans un réfrigérateur jusqu'à ce qu'ils utilisent. Laissez les plaques prendre une température ambiante avant de semer.

Le pH moyen doit être de 7,4 ± 0,2.

Le milieu non préparé est beige et préparé est de l'ambre léger.

Gélose du sang

Après stérilisation du milieu, refroidir jusqu'à une température approximative de 45 à 50 ° C, à ce moment-là, ajoutez le sang (50 ml), mélangez doucement pour homogénéiser et servir 20 ml sur chaque plaque de Pétri. Si des bulles se forment sur la plaque, la flamme plus légère sur les bulles pour les retirer doit être passé rapidement.

De même, des milieux spéciaux peuvent être préparés en ajoutant les additifs correspondants lorsque le mélange atteint la température de 45 à 50 ° C.

Peut vous servir: capacités physiques

Le médium est rouge cerise.

Applications

Utiliser sans suppléments

L'agar BHI sans additifs est utile comme culture principale et semer les souches pures de micro-organismes peu ou modérément exigeants pour son identification ultérieure.

Comme il s'agit d'un milieu de couleur claire, il est idéal pour l'observation des pigments et en ne contenant pas de substances interférentes, certains tests biochimiques, tels que l'oxydase et la catalase, ou le montage d'autres tests biochimiques à partir de colonies de cette gélose.

De même, l'agar BHI est large.

Les plaques ou les quartiers plantés par une surface avec des souches bactériennes sont incubées à 37 ° C pendant 24 à 48 heures. Tandis que dans les champignons, la température et le temps d'incubation dépendra du type de champignon recherché.

Comme gélose de base pour la préparation d'autres médias

Avec cette base, vous pouvez préparer des médias enrichis et sélectifs.

Enrichi

Sa fonction principale est de servir de base dans la préparation du sang d'utilisation de routine dans les laboratoires de microbiologie. En particulier, la base BHI est propice à l'isolement des souches de Streptococcus sp. Cependant, il a la gêne de ne pas être adéquate pour l'observation des schémas d'hémolyse en contenant du glucose.

Il est également utilisé dans la préparation du lapin ou du sang de cheval Haemophilus sp. Pour de meilleurs résultats, vous pouvez ajouter un supplément d'enrichissement (Isavalex).

Si les échantillons proviennent des voies respiratoires à l'agar, la bacitracine peut être ajoutée pour inhiber la flore qui l'accompagne et augmenter la probabilité de récupération des souches des souches de Haemophilus sp.

D'un autre côté, vous pouvez préparer du sang (agneau ou humain) avec Cistina Tellurito pour isoler Corynebacterium diphtheriae. De même, il est utile pour préparer du sang de lapin, avec l'agrégat de cistine et de glucose pour l'isolation de Francisella tularensis.

Le semis de plaques de gélose sanguine est effectué par épuisement et incubé à 35-37 ° C pendant 24 à 48 heures en microaérophilie (5-10% du CO₂).

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Sélectif

Ce milieu avec l'agrégat d'antibiotiques peut remplacer l'agar Sabouraud pour l'isolation fongique.

L'agar BHI combinée avec du chloramphénicol - gentamycine ou pénicilline -, la streptomycine et le sang de cheval sont idéaux pour l'isolement de Histoplasme capsulatum.

Selon le micro-organisme cherchée à isoler l'incubation à 35-37 ° C ou à température ambiante en aérobiose. Parfois, une incubation dans les deux plages de température est nécessaire, en utilisant 2 plaques pour cela.

Certains champignons aiment Trichophyton mentagrophytes Ils doivent être incubés à température ambiante jusqu'à 7 jours.

Contrôle de qualité

De chaque lot préparé, il est recommandé d'incuber 1 plaque ou coin à 37 ° C pendant 24 heures et vérifier qu'il n'y a pas de croissance; Surtout c'est important lors de la préparation du sang, car c'est un milieu facilement contaminable.

D'un autre côté, la qualité du support peut être évaluée par des souches de motifs connus ou certifiés et observer son développement.

En ce sens, pour évaluer la gélose BHI sans additifs, vous pouvez utiliser des souches de Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 O Candida albicans ATCC 10231. 37 ° C sont incubés dans l'aérobiose pendant 24 à 48 heures. Dans tous les cas, une croissance satisfaisante est attendue.

Pour évaluer les plaques de gélose sanguine, vous pouvez semer des souches de  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ou Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Les souches bactériennes sont incubées à 37 ° C en microaérophilie pendant 24 heures, tandis que le champignon incube à température ambiante dans une chambre humide jusqu'à 7 jours. Dans tous les cas, une croissance satisfaisante est attendue.

Les références

1. Laboratoires britanniques. Gélose du cerveau de la perfusion cardiaque. Disponible sur: Britanialab.com.
2. Laboratoires BD. Agar de perfusion cardiaque du cerveau (BHI). Disponible sur: BD.com.