Coloration négative

Image de la coloration négative du virus de la grippe A. Source: Voir page pour l'auteur, Wikimedia Commons

Qu'est-ce que la coloration négative?

La coloration négative Il s'agit d'une méthode de coloration spéciale pour mettre en évidence la présence de la capsule dans certains micro-organismes - Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae et Cryptococcus neoformans-, à partir d'échantillons cliniques ou de cultures pures.

L'échantillon direct directement utilisé pour appliquer une coloration négative est le liquide céphalorachidien. Cette technique représente une alternative rapide pour le diagnostic présumé de la méningite, en particulier par Cryptococcus neoformans.

Cette coloration peut être appliquée aux expectorations stériles et aux liquides en général, ainsi que sur les souches obtenues à partir de jeunes cultures pures. La technique utilise de la nigrosine ou de l'encre chinoise pour son exécution, par conséquent, il s'agit d'une méthodologie très simple et économique à appliquer qui fournit des informations sur une grande valeur diagnostique en peu de temps.

En ce sens, tout laboratoire est dans la capacité d'effectuer cette coloration. Bien sûr, le laboratoire doit avoir un personnel compétent, capable de reconnaître les levures de la Cryptococcus neoformans isolé ou dans les gémations et les différencier des leucocytes et des artefacts que l'échantillon peut présenter.

Base

La nigrosine et l'encre chinoise agissent de manière similaire, de sorte que l'une ou l'autre substances peut être utilisée par indistinct.

Cette technique est appelée coloration négative car elle agit contrairement au reste des techniques de coloration. En cela, ce qui est sans teinture, c'est la structure qui est recherchée ou que vous voulez voir, c'est-à-dire les micro-organismes.

Par conséquent, la coloration est basée sur la teinture du fond du frottis d'une couleur foncée. Dans ce scénario, les structures capsulées mettront en évidence dans la lumière ou.

Habituellement, les levures sont observées, entourées d'un halo clair qui correspond à la capsule. Cela se produit parce que l'encre chinoise et la nigrosine sont des substances incapables de pénétrer le polysaccharide qui forme la capsule des micro-organismes vivants.

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Il convient de noter que d'autres structures qui peuvent être présentes dans l'échantillon direct, telles que les leucocytes ou les globules rouges.

Maintenant, si les micro-organismes sont morts, la teinture peut y pénétrer, de sorte que cette coloration est également utile pour évaluer la viabilité des micro-organismes.

Technique

Matériaux

Nigrosine

Nigrosine doit son nom à la couleur noire qu'il a. Il s'agit d'une substance synthétique qui est obtenue à partir du chauffage du mélange de composés organiques - comme la nitrobenzéine, l'aniline et l'hydrochlorite d'aniline -, en utilisant dans cette réaction un catalyseur (fer ou cuivre).

Encre Chine

L'encre chinoise est une substance utilisée principalement par les Asiatiques pour l'écriture, l'élaboration d'œuvres d'art et de peinture monochromatique. C'est très populaire dans la culture chinoise.

Il est obtenu à partir de l'encre de calmar mélangée avec du charbon en poudre, le produit de la combustion de petits arbres résineux.

Il est également possible de le préparer à partir de la suie de l'incinération des hydrocarbures (huiles végétales), ainsi qu'une gelée protéique qui lui donne la consistance appropriée pour éviter la précipitation des particules de charbon.

Spécifications pour l'échantillonnage

• Il ne nécessite pas de jeûne.
• L'échantillon d'échantillon, les expectorations ou le liquide stérile doit contenir au moins 1 ml de volume et doit être transféré au laboratoire à température ambiante.
• Des échantillons de LCR et des liquides stériles doivent être prélevés par un médecin spécialisé.
• Il peut également s'agir d'une récolte pure d'une souche suspecte liée aux agents pathogènes susmentionnés.

Exécution de la technique avec des échantillons directs

• Les échantillons doivent être centrifugés, puis le surnageant est jeté et les sédiments sont prélevés.
• Une goutte de matériel centrifugé (sédiment) et une goutte d'encre chinoise ou nigrosine est placée.
• Il doit être bien mélangé et couvre avec une couverture, laissant la goutte s'étendre comme un beau film sans dépasser les bords.
• Par la suite, la préparation du microscope est montée.
• Si la préparation est très sombre, elle peut être diluée avec de l'eau.

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Exécution de la technique avec des souches de la culture

• Une très petite partie d'une jeune récolte est prise avec une aiguille semée et se dissout dans une goutte d'encre chinoise précédemment placée sur une lame propre.
• Une couverture est placée sur le dessus.
• Il est observé au microscope 10x puis à 40X.

Vous pouvez également dissoudre une partie de la colonie dans l'eau distillée, et à partir de là, prenez une goutte et mélangez-la avec l'encre chinoise. De cette façon, la préparation ne sera pas aussi épaisse, ce qui permet à l'observation des structures de manière isolée. S'il y a des agglomérations, il ne sera pas bien observé.

Une autre méthodologie est la suivante:

• Placez une goutte de suspension à une extrémité de la diapositive.
• Placer une goutte de nigrosine au même bout et mélanger.
• À l'aide d'une autre diapositive, étendez l'échantillon comme s'il faisait un frottis hématologique.
• Laisser sécher et observer au microscope.

Observation au microscope

Il doit d'abord être concentré avec 10x cible pour avoir une vision large du champ. Par la suite, vous devez rechercher s'il y a des espaces clairs. S'il y en a, concentrez-vous avec 40X pour voir les détails.

avantage

• Il est facile à exécuter.
• C'est une technique économique.
• Cette méthode ne nécessite pas que le frottis soit fixé pour chauffer ou avec des produits chimiques, par conséquent, les micro-organismes sont observés sans distorsions.
• La préparation de la fresque n'a pas besoin d'être sèche, il peut donc être observé immédiatement, générant des résultats rapidement.

Désavantage

• Une fois montés, de nouvelles préparations doivent être observées immédiatement. S'ils sont autorisés à sécher, il n'est plus possible de les observer et un nouveau.

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Enveloppe de tissus à l'encre chinoise

Une autre fonction qui peut remplir l'encre chinoise est dans les laboratoires de pathologie. Ceci est appliqué dans des échantillons d'extraction chirurgicalement dans le but de marquer les marges de résection tumorale.

Le tissu marqué est pulvérisé d'acide acétique. Cela agit comme un mordant et empêche l'encre de sortir lorsque le tissu est soumis à un traitement de routine pour la préparation de la biopsie.

La procédure consiste à baigner le tissu dans l'alcool et le xylène, puis intégrés dans de la cire de paraffine. Ce marquage guide le pathologiste lors de l'observation du tissu, indiquant où la marge de résection chirurgicale ou un autre point d'intérêt est.

Les références

1. Nigrosine. Récupéré de es.Wikipédia.org.
2. Forbes, B., Sahm, D., Weissfeld, un. Diagnostic microbiologique de Bailey & Scott. Pan -American Editorial S.POUR.