VOGES-PROSKAUER TEST QU'EST-ISS

Il Test de Voges-Proskauer Il s'agit d'un test biochimique qui est utilisé pour aider à l'identification des bactéries appartenant à la famille Enterobacteriaceae. Est particulièrement utile pour différencier les souches de Escherichia coli de Klebsiella et Enterobacter, entre autres.

Le test est effectué dans le milieu de culture liquide appelée Red Methyl-Voges Proskauer, mieux connu avec l'acronyme RM / VP. Ce milieu est composé de polypeptone tamponnée, de glucose, de phosphate de dipotassium et d'eau distillée.

Metil rouge de Metilo-Voges Proskauer (RM / VP) / test VP positif et négatif respectivement. Source: Photo prise par l'auteur MSC. Marielsa Gil / Sudipta.Nov15 [cc by-sa 3.0 (https: // CreativeCommons.Org / licences / by-sa / 3.0)], de Wikimedia Commons

Le milieu RM / VP actuel est une modification du milieu Clark et Lubs, qui contenait à l'origine moins de concentration de peptones et de glucose. Par conséquent, il y avait moins d'ions hydrogène, requis pour la réaction positive de Voges-Proskauer.

Le test est basé sur la capacité du micro-organisme de l'utilisation du glucose par l'itinéraire butylén-glycolique, et forment un produit final neutre appelé acétoine, en présence d'oxygène et d'un pH alcalin.

Dans le milieu RM / VP, en plus de pouvoir révéler le test Voges-Proskauer, vous pouvez également révéler le test rouge metillian.

Base

Fondation du test Voges-Proskauer

Les pluripeptons présents au milieu fournissent les besoins nutritionnels indispensables pour la croissance bactérienne. Pour sa part, le glucose est le composé principal. De nombreuses bactéries ont la capacité de métaboliser le glucose et de former de l'acide pyruvique.

L'acide pyruvique est un point médian du métabolisme du glucose et à partir de là, chaque micro-organisme peut prendre des voies différentes. Certains formeront des acides mixtes, tels que l'acide lactique, l'acide acétique, l'acide formique et l'acide succinique, et d'autres formeront des produits neutres tels que 2,3-butnediol.

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Le test de Voges-Proskauer révèle la capacité du micro-organisme de la formation de l'acétyl méthyl carbinol (acétoine), un produit intermédiaire de 2,3-butnediol dans des conditions d'aérobiose.

L'acétoine est réduite et la forme de 2,3-butnediol, mais cette réaction est réversible, donc si le 2,3-butnediol est oxydé. Par conséquent, l'oxygène est indispensable.

Le phosphate de dipotassium est le tampon qui coussins le mélange à un pH 6,9 ± 0,2.

Fondation pour le développement des preuves et de l'interprétation

Pour montrer la réaction, une révélation doit être réalisée en utilisant deux réactifs (réactifs Barrit), connu sous le nom de Voges A et Voges B.

Voges A est une solution α-naftol à 5%, et Voges B est une préparation d'hydroxyde de potassium à 40%. Si l'hydroxyde de potassium n'est pas disponible, il peut être remplacé par l'hydroxyde de sodium à 40%.

Α-naftol est un catalyseur qui augmentera l'intensité de la couleur de la réaction, ce qui fait le test le plus sensible. L'α-naftol doit toujours être ajouté en premier, en remuant le tube de sorte que le milieu entre en contact avec de l'oxygène. De cette façon, l'acétoine actuelle est oxydée en diacétyle, et le 2,3-butnediol est oxydé pour former de l'acétoine, le transmettant au diacétyle.

C'est ainsi que α-naftol rejoindra le diacétyle, qui à son tour a rejoint le noyau de guanidine présente dans l'acide aminé d'arginine, ce dernier des multipartiques.

Pour sa part, l'hydroxyde de potassium ou de sodium est responsable de l'absorption du CO₂ Et pour réagir avec les peptones. Cette réaction provient de la formation d'une couleur rose-salmon, clairement visible après avoir très bien remué le tube.

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Pour que la coloration se produise instantanément, les quantités correctes de diacétyle, de peptone et d'α-naftol doivent être mélangées. Si cela ne se produit pas, le tube est autorisé à reposer 15 minutes avant d'interpréter.

Le test est généralement positif après 2 à 5 minutes, lorsque vous pouvez voir une couleur rose faible. S'il est laissé au repos pendant 30 min à 1 heure, l'intensité de la couleur sera maximale (rouge intense).

Un test négatif sera mis en évidence lorsque le bouillon est jaune. Après 1 heure, si le test est négatif, un produit de couleur cuivrée de la réaction de l'hydroxyde de potassium sur α-naftol peut être formé.

préparation

RM / VP moyen

Peser 17 GR de la culture déshydratée et se dissoudre dans un litre d'eau distillée. Laisser reposer 5 minutes. Chauffer à bouillir pour se dissoudre complètement. Servir 3 à 4 ml dans des tubes et stériliser en autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

Le milieu de culture déshydraté est beige et le milieu préparé est de l'ambre léger.

Le pH final du milieu est de 6,9 ​​± 0,2.

Réactif Voges a

Peser 5 GR de α-naftol et se dissoudre dans 50 ml d'alcool éthylique (absolu). Par la suite, l'ajout d'alcool éthylique même enrasar à 100 ml.

Réactif Voges B

Peser 40 gr d'hydroxyde de potassium et se dissoudre dans 50 ml d'eau distillée dans un bécher. Le verre doit être placé dans un bain d'eau froide pour contrôler la température, car au moment de la dissolution de la préparation, il augmente fortement de température.

Une fois la solution froide, il est transféré sur une boule hachée et rincez à 100 ml avec de l'eau distillée.

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Procédure de test de Voges-Proskauer

Pour effectuer le test de Voges-Proskauer, un bouillon RM / VP est inoculé avec le micro-organisme à l'étude, d'une culture pure de 18 à 24 heures.

L'inoculum ne doit pas être très dense. 35-37 ° C sont incuba pendant 24 à 48 heures, bien que l'incubation pendant plusieurs jours soit parfois nécessaire. Cowan et Steel croient que 5 jours est le temps d'incubation minimum nécessaire pour détecter toutes les espèces positives de Voges-Proskauer (VP) de la famille Enterobacteriae.

Test révélé

Séparez une aliquote de 1 ml dans un tube et faites le développement comme suit: Placez 12 gouttes (0,6 ml) des voches A et 4 gouttes (0,2 ml) de voges b. Mélanger à l'air et laisser reposer 5 à 10 minutes avant d'interpréter. Cependant, si le test est toujours négatif, laissez reposer et observez le tube après 30 minutes à 1 heure.

L'apparition d'une couleur rouge rose indique que la réaction de Voges-Proskauer est positive. Si le milieu reste jaune, la réaction est négative.

L'ajout de la révélation dans l'ordre et la quantité indiquée est essentiel pour éviter les faux négatifs.

Utiliser

Le test de Voges-Proskauer est utile pour différencier les souches de ET. coli qui sont des VP négatifs, des genres Klebsiella, Enterobacter, Serratia, entre autres, qui sont un VP positif.

Source: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e ed. Pan -American Editorial S.POUR. Argentine.

Contrôle de qualité

Pour tester la qualité du support préparé, vous pouvez utiliser les commandes de commandes, notamment Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium et Enterobacter ATCC 13047.

Les résultats attendus sont des réactions positives de voges-proskauer uniquement pour K. pneumoniae et ET. Cloacae. Le reste donne des réactions négatives.

Les références

1. Laboratoires britanniques. Moyenne MR-VP. Disponible sur: www.Britanialab.com