Fondation SIM, préparation et utilisations

Il SIM MIDE Il s'agit d'une gélose semi-solide et différentielle, spécialement conçue pour aider à l'identification de certaines bactéries, principalement de la famille des Enterobacteriaceae. Il est composé de tritéine, de peptone, de sulfate de fer, de sulfate d'ammonium, de thiosulfate de sodium et d'agar.

Ce milieu permet l'exécution de trois tests importants: la production de sulfure d'hydrogène (H₂S), la formation de l'indol et de la motilité, à partir de là, l'acronyme Sim. En raison de sa grande utilité, il ne peut pas manquer dans un laboratoire de bactériologie.

POUR. Commercial de la SIM du milieu B. SIM H2S (-), INDOL (-) et motilité (+) et SIM H2S (+), Indol (-), Test de motilité (+). Source: A. Photo prise par l'auteur MSC. Marielsa Gil B. Mfloayza [cc by-sa 3.0 (https: // CreativeCommons.Org / licences / by-sa / 3.0)]

Contrairement à d'autres médias, cela doit être semi-solide pour détecter la capacité de mouvement que certaines bactéries ont. En ce sens, ce test fonctionne très bien pour les entérobactéries, mais pas dans les bacilles négatifs non fermentaires, où d'autres méthodes sont préférées à utiliser, comme la chute en attente.

Le milieu SIM permet de distinguer certaines propriétés spécifiques qui caractérisent certaines bactéries par rapport à d'autres. Par exemple Escherichia coli se distingue par le fait d'être h₂S (-), indol (+) et motilité (+), tandis que Proteus mirabilis c'est h₂S (+), indol (-), motilité (+).

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Base

C'est une culture signifie qui est considérée comme différentielle, car son utilisation parvient à distinguer les micro-organismes capables de produire du sulfure d'hydrogène de ceux qui ne le font pas; Il met également en évidence ceux qui forment l'indol du tryptophane de ceux qui ne se forment pas et qui différencie enfin les bactéries mobiles de l'immobile.

Source d'énergie

Comme tout moyen de culture, il a des éléments qui fournissent les nutriments nécessaires afin que les micro-organismes non exigeants puissent se développer. Ces éléments sont représentés par des peptones et du triptein.

Le développement du micro-organisme dans l'environnement est essentiel pour observer la présence ou l'absence des caractéristiques que cela signifie évaluer.

Production de sulfure d'hydrogène

La lettre S de l'acronyme SIM fait référence à la production de sulfure d'hydrogène (H₂S). Les bactéries capables de former du sulfure d'hydrogène prendront du sulfate de sodium.

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Une fois le H formé₂S -gas incolore-, cela réagit avec le sel de fer présent au milieu, formant du sulfure ferreux, clairement visible (précipité noir). Les bactéries qui ne forment pas h₂S, laissez le milieu de couleur d'origine (beige).

La présence de précipité noir peut entraver l'interprétation de la motilité. Cependant, il est connu que la plupart des entérobactéries productrices de HT₂S sont une motilité positive, comme Salmonella, Proteus et Citrobacter. De plus, le précipité noir qui couvre presque tout le milieu suggère une motilité positive.

Formation indol

La deuxième lettre de l'acronyme SIM est le "I", qui représente la formation d'Indol.

En ce sens, la tripeine, en plus d'être une source de nutriments, remplit une autre fonction fondamentale. Cette peptone est riche en acide aminé appelé tryptophane, par conséquent, il peut montrer des bactéries qui produisent la triptofanase.

Cette enzyme est en charge de Clivar à l'acide aminé triptophane, avec la formation conséquente de l'indol (substance incolore), de l'acide pyruvique et de l'ammonium.

C'est pourquoi, pour montrer cette réaction, c'est nécessaire. L'un des deux réagissent avec l'Indol, formant un anneau en forme de fucsia rouge à la surface de l'agar. Si l'anneau de couleur fuchsia apparaît, le test indol est interprété comme positif.

Les bactéries qui ne possèdent pas cette enzyme, ne formeront pas l'anneau et sont interprétées comme un test indole négatif.

Il est important de noter que la preuve indol doit être la dernière à être interprétée, car une fois le réactif ajouté, le support entrave la visualisation de la motilité.

Motilité

Enfin, la lettre "M" du mot SIM signifie la motilité. Afin d'évaluer la motilité, ce milieu est stratégiquement semi-solide, car cette caractéristique est essentielle pour observer s'il existe ou non un mouvement bactérien. Les bactéries qui ont des flagelles sont celles qui donnent ce test positif.

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Un test positif sera mis en évidence lorsque la turbidité sera observée, à la fois dans l'inoculum initial, et autour de cela. Tandis que les bactéries non mobiliques ne se développent que lors du parcours initial de l'inoculum.

préparation

SIM MIDE

Peser 30 gr de milieu déshydraté et se dissoudre dans un litre d'eau distillée. Le mélange est laissé au repos pendant 5 minutes puis chauffé jusqu'à ébullition, en remuant fréquemment jusqu'à sa dissolution complète.

Distribuez le mélange dans des tubes à essai avec un couvercle de coton et autoclavate à 121 ° C pendant 15 minutes. Retirez le rack des tubes d'autoclave et laissez se solidifier en position verticale, afin que le milieu soit sous la forme d'un taco.

Pour sa conservation, il est sauvé au réfrigérateur jusqu'à son utilisation. Le milieu préparé doit avoir un pH final de 7,3 ± 0,2.

Lors de l'inoculation du milieu, cela doit être à température ambiante. La couleur du médium est beige.

Le réactif de Kovac

Mesure 150 ml d'alcool amyl ou isoamyl ou butyle. (Utilisez l'un des trois mentionnés).

Dissoudre 10 gr de p-diméthylaminobenzaldéhyde. Puis, ajoutez lentement 50 ml d'acide chlorhydrique concentré.

Le réactif prêt à l'usage est incolore ou jaune transparent. Il doit être conservé dans une bouteille ambrée et stocké dans un réfrigérateur. N'utilisez pas si vous prenez une couleur brun foncé; Qui indique qu'il est endommagé. Ce réactif est préféré en matière d'entérobactéries.

Réactif erlich

Peser 2 GR de p-diméthylaminobenzaldéhyde et se dissoudre dans 190 ml d'alcool éthylique absolue et se mélanger lentement avec 40 ml d'acide chlorhydrique concentré. Gardez le réactif de Kovac de la même manière. Le réactif d'Ehrlich est davantage utilisé pour les bactéries non fermentantes et anaérobies.

Applications

Le milieu SIM est très utilisé dans les laboratoires de bactériologie. Il a un avantage que trois caractéristiques essentielles peuvent être observées dans l'identification des entérobactéries.

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Semé

La bonne façon de semer ce médium utilise l'aiguille, avec laquelle une partie de la colonie pure à étudier est prise et insérée au centre du milieu verticalement. Une seule fente doit être effectuée. La crevaison ne doit pas atteindre le bas du tube, la bonne chose est de couvrir seulement deux tiers.

Il n'est pas conseillé de répéter l'inoculum, car cela peut porter de fausses interprétations de la motilité positive. Le milieu inoculé est incubé dans une aérobiose à 37 ° C pendant 24 heures.

Une fois le temps terminé, il est observé qu'il y avait ou non une production de H₂S et lire la motilité. Enfin, l'Indol est révélé, ajoutant 3 à 4 gouttes du réactif d'Ehrlich ou de Kovac, mélangée doucement et interprétée.

Source: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e ed. Pan -American Editorial S.POUR. Argentine.

Contrôle de qualité

Comme contrôle de la stérilité, un ou deux tubes sans inoculation à 37 ° C par 24 heures sont incubés. Il est prévu qu'après cette période, il n'y a pas de croissance ou de changement de couleur.

En tant que contrôle qualité, vous pouvez utiliser des souches connues certifiées, comme: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter Aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella Sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Les résultats attendus sont: Escherichia coli H₂S négatif, indol et motilité positive, Enterobacter Aerogenes Seulement la motilité positive, Salmonella typhimurium H₂S et motilité positive, avec indole négatif. Proteus vulgaris Tout positif, tant que Klebsiella pneumoniae et Shigella Sonnei Tout négatif.

Limites

-Quelques souches de Morganella Morganii, Parmi les autres souches peuvent produire un pigment brunâtre dans ce milieu en raison de la production de mélanine, cela ne doit pas être confondu avec le précipité du sulfure ferreux. Chez des professionnels inexpérimentés, cette situation peut générer de faux positifs dans l'interprétation du test H₂S.

-Les bactéries aérobies strictes ne se développent qu'à la surface du tube, ce qui entrave l'interprétation de la motilité.

Les références

1. Laboratoires BD. BBL SIM Medum. 2008. Disponible sur: BD.com
2. Laboratoires Neogen. Sim Medum. Disponible sur: Foodsafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. Sim Medum. 2009. Disponible sur: http: // f-Soria.est
4. Laboratoire de laboratoire de Brizuela.  Sim moyen. Disponible en: .Brizuela-Lab.com
5. Laboratoires britanniques. Sim moyen. 2015. Disponible sur: Studyres.C'est / doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e ed. Pan -American Editorial S.POUR. Argentine.