La moitié de la fondation, de la préparation, des utilisations et des limitations

Il Moitié de ou la fermentation du glucose est une gélose semi-solide spécialement conçue pour l'étude du métabolisme oxydatif et fermentatif des glucides dans un groupe important de micro-organismes différents des entérobactéries, appelées bacilles négatifs non-entérés.

Il a été créé par Hugh et Leifson; Ces chercheurs ont réalisé que les milieux conventionnels pour l'étude de la production d'acide à partir de glucides n'étaient pas adaptés à ce groupe spécifique de bactéries.

POUR. Middle of Basal Commercial. B. Tubes avec la moitié de la semée. Source: Photos A et B prises par l'auteur MSC. Marielsa Gil.

En effet.

En ce sens, le milieu des caractéristiques spéciales qui peuvent détecter les petites quantités d'acide formées, à la fois par oxydative et fermentative. Ces différences sont liées à la quantité de peptones, de glucides et d'agar.

Ce milieu contient moins de peptonas et une plus grande concentration de glucides, de cette manière, les produits qui alkheat du milieu sont réduits en raison du métabolisme des protéines et de la production d'acides sont augmentés par l'utilisation de glucides.

En revanche, la diminution de la quantité d'agar favorise la diffusion de l'acide produit par tout le milieu, en plus de l'observation de la motilité.

Le milieu de est composé de peptone, de chlorure de sodium, de bleu bromotimol, de phosphate de dipotassium, d'agar et d'un glucides. Le glucose le plus courant est le glucose mais d'autres peuvent être utilisés selon celui que vous souhaitez étudier, comme le lactose, le maltose, le xylose, entre autres.

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Base

Comme tout moyen de culture, l'environnement doit contenir des substances nutritionnelles qui garantissent la croissance bactérienne; Ces substances sont des peptones.

Pour sa part, les glucides fournissent de l'énergie et sert en même temps à étudier le comportement du micro-organisme contre lui, c'est-à-dire qu'il permet de classer les bactéries comme un organisme oxydatif, fermentatif ou non acré.

Le milieu de contient un rapport peptone / glucides de 1: 5 contrairement aux milieux conventionnels de 2: 1. Cela garantit que la quantité d'amines alcalines formées à partir de la dégradation des peptones ne neutralise pas la formation d'acides faibles.

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D'un autre côté, le milieu contient du chlorure de sodium et du phosphate de dipotassium. Ces composés se stabilisent osmotiquement au milieu et régulent respectivement le pH. Bromootimol Blue est l'indicateur de pH, ce qui fait la couleur du vert jaune avec la production d'acide.

Certains micro-organismes peuvent utiliser des glucides par oxydatif ou par voie fermentative, tandis que d'autres ne prennent pas dans les deux sens.

Cela dépend de la caractéristique de chaque micro-organisme. Par exemple, certains micro-organismes aérobies stricts peuvent oxyder certains glucides, et les anaérobies facultatifs peuvent s'oxyder et fermenter en fonction de l'environnement qui les entoure, tandis que d'autres ne s'oxydent pas ou ne ferment pas les glucides (ascarolitique).

Enfin, il y a une modification du support de recommandé par le CDC qui contient une base spéciale avec le phénol rouge comme indicateur.

Processus d'oxydation

Le processus d'oxydation du glucose ne nécessite pas de phosphorylation de glucose, comme cela se produit dans le processus de fermentation. Dans ce cas, le groupe aldéhyde est oxydé en un groupe carboxyle, entraînant l'acide gluconique. Ceci est à son tour oxydé en 2-zo-glyconique.

Ces derniers ou deux molécules d'acide pyruvique s'accumulent ou se dégradent. Ce système a besoin de la présence d'oxygène ou d'un composé inorganique en tant qu'accepteur d'électrons final.

La production d'acides par cette route est plus faible que celle obtenue par la route fermentative.

Processus de fermentation

Pour faire la fermentation du glucose par l'une des routes disponibles, elle doit d'abord être phosphorylée, devenant du glucose-6-phosphate.

La fermentation du glucose peut prendre plusieurs routes, la principale est le chemin d'Embden-Meyerhof-Parna de la dégradation du pentose.

Le chemin choisi dépendra du système enzymatique qui possède le micro-organisme.

Via de l'embden-meyerhof- parna

Dans la fermentation du glucose par Embden-Meyerhof-parna. À partir de là, une substance intermédiaire provient, qui est l'acide pyruvique.

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De là, divers types d'acides mixtes seront formés qui peuvent varier d'une espèce à une autre.

Ce système se produit en l'absence d'oxygène et a besoin d'un composé organique en tant qu'accepteur d'électrons final.

Route d'encodoroff

Dans la fermentation du glucose par l'itinéraire intner-doucoroff, le glucose 6-phosphate va au glucone-ᵼ-lactone-6-phosphate et à partir de là, il est oxydé au phosphogluconate du 6-phosphogluvate et 2-zo-3-dexi-6, Pour enfin former de l'acide pyruvique. Ceci via a besoin d'oxygène pour qu'il y ait de la glycolyse.

Voie de dégradation du pentose ou du monophosphate de Warburg-Dikens monophosphate via

Cette route est un hybride des 2 précédents. Il commence à la voie Entner-Doudoroff, mais par la suite, la glycéraldéhyde-3-phosphate est formée comme un précurseur d'acide pyruvique, comme c'est le cas dans le chemin de l'embden-Meyerhof-Parna.

préparation

Peser:

2 GR de la peptone

5 GR de chlorure de sodium

10 GR de D-glucosa (ou glucides qui va être préparé)

0,03 gr de bleu bromotimol

3 GR de l'agar

0,30 GR de phosphate dipotasique

1 litre d'eau distillée.

Mélanger tous les composés sauf les glucides et se dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Chauffer et remuer jusqu'à la dissolution dans son intégralité.

Lors du refroidissement à 50 ° C, 100 ml de glucose sont ajoutés à 10% (filtrés).

Distribuez aseptiquement 5 ml du milieu de tubes à essai avec couvercle de coton et autoclavate à 121 ° C, 15 livres de pression pendant 15 minutes.

Laisser en position verticale.

Le pH moyen doit être 7, 1. La couleur du milieu préparé est vert.

Garder le réfrigérateur.

Applications

Le moyen de est un moyen spécial pour déterminer le comportement métabolique d'un micro-organisisme contre un glucides. Surtout pour ceux qui forment des acides de manière rare, faible ou nul.

Semé

Pour chaque micro-organisme, 2 tubes de sont nécessaires, les deux doivent être inoculés avec le micro-organisme pour étudier. La colonie est prise avec une poignée droite et une crevaison est faite au centre du tube sans atteindre le fond; Vous pouvez faire plusieurs crevaisons, tant que vous n'êtes pas intéressé à observer la motilité.

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À l'un des tubes s'ajoute une couche de vaseline liquide stérile ou de paraffine foncière stérile (environ 1 à 2 ml) et est étiquetée avec la lettre "F". L'autre tube est laissé d'origine et étiqueté avec la lettre "O". Les deux tubes sont incubés à 35 ° C et sont observés quotidiennement jusqu'à 3 à 4 jours.

Interprétation

Métabolisme du gaz et production

Tableau: Classification des micro-organismes en fonction de leur comportement dans les tubes ouverts (oxydatifs) et fermentaires (fermentatifs) (fermentatif)

Source: Fabriqué par l'auteur MSC. Marielsa Gil

Le gaz est observé avec la formation de bulles ou le déplacement de l'agar.

Il convient de noter qu'un organisme qui ne s'oxyde que le glucose mais pas le fermente ne peut pas fermenter d'autres glucides, en tout cas, il ne fera que l'oxyder. Par conséquent, dans cette situation, le tube scellé sera omis pour l'étude d'autres glucides.

Motilité

De plus, au milieu de la motilité peut être vu.

Motilité positive: Croissance qui ne se limite pas à la zone d'inoculation. Il y a une croissance vers les côtés du tube.

Motilité négative: Croissance uniquement dans l'inoculum initial.

Contrôle de qualité

En tant que commandes de qualité, vous pouvez utiliser les souches suivantes: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa et Moraxella SP. Les résultats attendus sont:

1. coli: Fermenteur de glucose (tubes jaune et gaz).
2. aeruginosa: Oxydader de glucose (tube ouvert jaune et joint vert ou bleu).
3. Moraxella SP: Non-déménagement (tube ouvert vert ou bleu, tube de scellage vert).

Limites

-Certains micro-organismes ne peuvent pas grandir dans l'environnement de. Dans ces cas, le test est répété mais au sérum moyen à 2% ou 0,1% d'extrait de levure.

-Les réactions d'oxydation sont souvent observées à proximité de la surface et le reste du milieu peut être vert, de la même manière qu'il est considéré comme positif.

Les références

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