Boutage de soja tripticaseína Qu'est-ce que, Fondation, préparation, utilisation

Il Tripticaseína Soja C'est un milieu de culture liquide, très nutritif et non sélectif. En raison de sa grande polyvalence, c'est l'un des médias de culture liquide les plus couramment utilisés dans le laboratoire de microbiologie.

Il est également connu sous le nom du soja triptique Tryptique je suis Bouillon ou CST). Ses utilisations sont très variées en raison de leur composition. Il est composé de tritéine, de peptone du soja, de chlorure de sodium, de dipotassium et de phosphate de glucose.

Le soja tripticaseína semé avec une souche de Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 où la production de pigments est observée. Source: Photo prise par l'auteur MSC. Marielsa Gil.

Il est capable de reproduire les bactéries pathogènes cliniquement importantes, y compris celles qui exigent du point de vue nutritionnel et des bactéries anaérobies. Certains champignons opportunistes et polluants peuvent également se développer dans ce support.

En raison de son pouvoir nutritionnel élevé, il a une sensibilité élevée pour détecter la contamination microbienne, pour cette raison, elle a été choisie par le service d'inspection de la santé animale et végétale de l'USDA pour l'analyse microbiologique des vaccins.

De même, le bouillon de soja tripticaseína répond aux exigences des différentes pharmacopéens (EP européen, JP japonais et USP nord-américain) pour l'étude microbiologique des produits au niveau industriel, comme le cosmétique et les aliments.

D'un autre côté, il convient de mentionner que malgré sa grande utilisation, ce support est relativement économique, il est donc abordable pour la plupart des laboratoires de microbiologie. De plus, il est très facile de préparer.

Base

La tritéine, la peptone et le glucose offrent des propriétés nutritionnelles essentielles pour en faire un milieu idéal pour le développement microbien rapide.

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Environ 6 à 8 heures d'incubation, vous pouvez déjà apprécier la croissance de la plupart des micro-organismes. Cependant, il existe des souches de croissance lente qui peuvent durer les jours pour se développer.

Le chlorure de sodium et le phosphate dipotasique agissent respectivement en tant qu'équilibre osmotique et régulateur de pH. La présence de la croissance est mise en évidence par l'apparition de la turbidité au milieu; S'il n'y a pas de croissance, le milieu reste translucide.

En raison de sa couleur claire, il est possible d'observer la production de pigments, comme celui montré dans l'image située au début de l'article, qui correspond au pigment produit par Pseudomonas aeruginosa. 

préparation

-Tripticaseína Soja

Pour préparer le bouillon de soja triptyque, 30 GR de support commercial déshydraté doivent être pesés dans un équilibre numérique. Se dissout ensuite dans un litre d'eau distillée contenue dans un fixola.

Le mélange est laissé au repos pendant 5 minutes et prend par la suite une source de chaleur pour aider la dissolution moyenne. Il doit être agité fréquemment en faisant bouillir par 1 minute.

Une fois dissous, il est distribué dans des tubes de la taille appropriés au besoin. Vous pouvez utiliser des tubes avec un capuchon en coton ou des tapas à baquelita. Par la suite, les tubes sont stérilisés dans l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

Le pH moyen doit être de 7,3 ± 0,2

Il convient de tenir compte du fait que la couleur de la culture déshydratée est claire beige et doit être stockée entre 10 et 35 ° C, dans un endroit sec. Tandis que le bouillon préparé est de l'ambre léger et doit être stocké au réfrigérateur (2 à 8 ° C).

-Variants de bouillon de soja tripticaseína

Le bouillon de soja modifié de la tripticasein peut être préparé en ajoutant des sels biliaires et de la novobiocine afin de le faire sélectif pour l'isolement de ET. coli. Une autre option dans le même but est de préparer le bouillon de soja de soja complété par de la vancomycine, du céphixime et du télérito (2,5 µg / ml).

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D'un autre côté, plus de glucose (0,25%) peut être ajouté au bouillon de soja tripticaseína lorsque l'objectif est de stimuler la formation de biofilms.

Utiliser

Il est suffisamment nutritif pour permettre la croissance de bactéries exigeantes ou ennuyeuses telles que Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp et Brucella SP, Pas besoin de compléter avec du sang ou du sérum.

De même, certains champignons peuvent se développer dans ce bouillon, comme Complexe Candida albicans, Aspergillus sp et Histoplasme capsulatum.

De plus, ce milieu dans des conditions anaérobies est idéal pour récupérer des bactéries appartenant au sexe de sexe, ainsi que des bactéries anaérobies non sporulées d'une importance clinique.

Si 6,5% de chlorure de sodium sont ajoutés, il peut être utilisé pour la croissance de Enterococcus et d'autres streptocoques du groupe D.

Au niveau de la recherche, il a été très utile dans divers protocoles, en particulier dans l'étude des biofilms ou des biofilms formant des bactéries. Il est également utilisé pour préparer la suspension bactérienne à 0,5% Mac Farland nécessaire pour effectuer l'antibiogramme par la méthode Kirby et Bauer.

Dans ce cas, 3 à 5 colonies d'apparence similaire sont prises et émulsifiées dans 4-5 ml de soja soa tripticasein. Ensuite, il est incubé pendant 2 à 6 heures à 35-37 ° C et s'adapte par la suite à la concentration souhaitée en utilisant une solution saline stérile. Le soja tripticasein ne doit pas être utilisé de 18 à 24 heures d'incubation.

Semé

L'échantillon peut être semé directement ou des colonies pures tirées de moyens sélectifs peuvent être soumis à. L'inoculum doit être petit pour ne pas obscurcir le milieu avant l'incubation.

Normalement, il est incubé à 37 ° C en aérobiose pendant 24 heures, mais ces conditions peuvent varier en fonction du micro-organisme recherché. Il peut également être incubé dans des conditions d'anaérobiose à 37 ° C pendant plusieurs jours si nécessaire. Par exemple, dans les micro-organismes exigeants ou la croissance lente, il peut être incubé jusqu'à 7 jours.

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Dans l'analyse microbiologique des substances pharmaceutiques - comme les vaccins - les protocoles sont plus stricts. Dans ces cas, le bouillon sans croissance n'est pas exclu jusqu'à ce qu'il se rencontre avec 14 jours d'incubation continue.

Contrôle de qualité

De chaque lot préparé, 1 ou 2 tubes doivent être incubés pour démontrer sa stérilité. Doit rester sans changement.

Vous pouvez également semer des souches connues pour évaluer votre comportement. Parmi les souches qui peuvent être utilisées sont:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 ou 25923, Escherichia coli ATCC 8739,  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Dans tous les cas, la croissance doit être satisfaisante dans les conditions de l'atmosphère et une température adéquate pour chaque micro-organisme.

Limites

-La fermentation du glucose provoque la descente du pH moyen par la production d'acide. Cela peut être défavorable à la survie de certains micro-organismes sensibles à l'acidité.

-Il n'est pas recommandé pour le maintien des souches, car en plus de l'acidité, les bactéries après quelques jours d'échappement des nutriments avec l'accumulation conséquente de substances toxiques qui font l'environnement inhospitalier.

-Vous devez travailler à prendre en charge tous les protocoles de stérilité, car les bouillons sont facilement contaminables.

-Après avoir préparé les bouillons de soja tripticasein, il ne faut pas essayer de transférer du bouillon pour un autre tube stérile, car ce type de manœuvres est très vulnérable à la contamination.

Les références

1. Laboratoire britannique. Bouillon de soja tripeine. Disponible sur: Britanialab.com
2. Laboratoire MCD. Tripticaseína Soja. Disponible sur: Systèmes électroniques.com
3. Laboratoire Neogen.  Bouillon de soja triptyque. Disponible sur: Foodsafety.Néogen.com