Bouillon de malonate, préparation et utilisations

Il Bouillon de malonato C'est le milieu de culture liquide utilisé pour le test de diagnostic (test Malonato), utilisé pour différencier certains genres de la famille Enterobacteriace. Il a été créé par Leifson en 1.933 et par la suite modifié par Ewing, qui a ajouté une petite quantité de dextrose et d'extrait de levure à la formule d'origine.

Le milieu est actuellement composé d'extrait de levure, de sulfate d'ammonium, de phosphate de dipotassium, de phosphate monopotonique, de chlorure de sodium, de malonate de sodium, de dextrose et de bleu bromotimol. Ce test est généralement inclus dans la batterie d'identification biochimique pour les entérobactéries, aidant à différencier certains genres et espèces.

Représentation graphique du test malonato. POUR. Test négatif, b. (Acidification) test négatif, c. (Alcalinisation moyenne) Test positif. Source: Public DomainPicures Colored Tubes.filet

Le test de Malonato est principalement basé sur la capacité de certains micro-organismes à utiliser du malonato de sodium comme source de carbone unique et comme source d'azote en sulfate d'ammonium.

Le test de Malonato donne généralement positif dans certaines espèces des genres Enterobacter, Klebsiella et Citrobacter. Alors que la plupart des espèces des genres Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus et Providencia, donnent une réaction négative.

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Base

Le test du malonate est constitué en preuve.

La plupart des entérobactéries qui n'utilisent pas de malonato sont capables de grandir dans ce milieu, en prenant comme nutriments le dextrose et l'extrait de levure.

Dans ce cas, toute tentative d'alcalisation due à l'utilisation de peptones sera contrecarrée par la production d'acides générés par la fermentation du dextrose. De même, le dipotassium et les phosphates monopotasiques agissent comme un tampon gardant le pH à 6,7.

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C'est pourquoi, lorsque le test est négatif, le bouillon est la même couleur d'origine (vert). Rarement, le milieu pouvait être acidifié en raison de la fermentation du dextrose; Sans l'utilisation de peptonas et l'indicateur de pH transformerait la couleur du milieu à jaune. Pour cela, le pH doit descendre à 6.

Maintenant, lorsque ce test est positif que le micro-organisme a utilisé respectivement le sulfate de malonato et d'ammonium comme sources de carbone et d'azote, sans utiliser les autres composants.

Dans ce cas, le milieu est alcalisé en raison de la libération du sodium et de la formation de NaOH qui en résulte. En ce sens, l'indicateur de pH (bleu bromotimol) tourne la couleur du milieu du vert au bleu lorsque le pH est égal ou supérieur à 7,6. Le bleu peut être clair ou intense (Blue de Prusse).

Enfin, le chlorure de sodium maintient l'osmolarité du milieu et l'eau est la dilue de tous les composants.

Interprétation

Boutage de la même couleur (vert): test négatif

Bouillon jaune: test négatif

Bouillon bleu clair ou intense: test positif

Il existe une variante appelée bouillon malonato phénylalanine, également appelée Shaw et Clarke Medium. Dans ce cas, deux tests peuvent être analysés, l'utilisation de malonato comme source de carbone et la production d'acide pyruvique de la phénylalanine.

préparation

Bouillon de malonato

La quantité de grammes spécifiées par l'insert de la maison commerciale choisie est pesante (elle peut varier de l'une à l'autre). Les grammes lourds sont suspendus dans un litre d'eau distillée. Chauffer légèrement jusqu'à sa dissolution complète. Distribuez 3 ml du milieu dans des tubes à essai 13/100 avec couvercle de coton.

Stériliser en autoclave à 121 ° C pendant 15 ou 20 minutes.

Cool. S'ils ne seront pas utilisés immédiatement, économisez au réfrigérateur jusqu'à utiliser. Tempéter les bouillons à température ambiante avant de les inoculer.

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Le pH moyen doit être de 6,7 ± 0,2. La couleur du milieu préparé est vert bouteille.

Bouillon malonato phénylalanine

Peser 11 gr du milieu déshydraté et se dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Le reste de la préparation égale à celle décrite ci-dessus.

Il peut également être préparé en ajoutant 2 gr / L de phénylalanine au milieu du bouillon malonato avant d'être stérilisé.

Utiliser

Il est utilisé dans le cadre de la batterie de test biochimique qui est montée pour l'identification des bactéries de la famille Enterobacteriaceae.

Aide à la distinction entre:

-Le genre Klebsiella et Enterobacter (+) du genre Escherichia et Serratia (-).

-L'espèce de SSP Arizonae Entrico Salinselella SSP, SSP SSP Salame Salmonella Salmonella enterica ssp diarizonae (+), de l'espèce Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Du genre Klebsiella généralement (+) du genre ActioBacillus (-).

-Parfois, cela peut aider la différenciation des genres et des espèces de bactéries n'appartenant pas à la famille des entérobactéries, comme parmi les bacilles à Gram négatif non fermentant Alcaligenes faecalis (+) Acinetobacter sp (-).

Source: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e ed. Pan -American Editorial S.POUR. Argentine.

Procédure

Sous un briquet, une partie d'une colonie pure est prise, en utilisant une poignée de platine correctement stérilisée et refroidie. L'échantillon prélevé (inoculum léger) se dissout dans le bouillon malonato. Il est incubé avec le couvercle paresseux en aérobiose à 35 ° C ± 0,2 pendant 24 à 48 heures.

Vous pouvez également inoculer le bouillon malonato d'une récolte de 18 à 24 heures dans un bouillon de soja triple. Dans ce cas, 0,01 ml est pris avec une pipette stérile et le bouillon malonato est inoculé. Il est incubé avec le couvercle paresseux en aérobiose à 35 ° C ± 0,2 pendant 24 à 48 heures.

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Terminé le temps où les résultats sont interprétés. Tout vestige de couleur bleue terminée 48 heures d'incubation doit être considéré comme positif. Le test ne doit pas être interprété comme négatif avant que le temps d'incubation de 48 heures n'ait été réalisé.

Dans le cas de l'utilisation de la variante du bouillon de phénylalanine malonato, le malonato est d'abord interprété, puis 5 gouttes de HCL 1N et 3-5 gouttes de chlorure ferrique à 8% sont ajoutées. Une couleur vert foncé est interprétée comme un test positif pour la phénylalanine. Si au contraire, le milieu devient bleu pâle, le test est négatif pour la phénylalanine.

Contrôle de qualité

Pour effectuer le contrôle de stérilité du milieu, un ou deux bouillons doivent être incubés à 35 ° C ± 0,2 pendant 24 heures d'incubation. Après cette période, il ne devrait pas y avoir de turbidité ou de changement de couleur.

Pour un contrôle qualité, vous pouvez utiliser des souches connues ou certifiées, telles que: Enterobacter Aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, SSP Arizonae Entrico Salinselella SSP ATCC 13314 et Escherichia coli ATCC 25922.

Les résultats attendus sont:

• Enterobacter Aerogenes, Klebsiella pneumoniae et SSP Arizonae Entrico Salinselella SSP Ils donnent une réaction positive (demi-bleu).
• Pour Escherichia coli Le résultat doit donner négatif, c'est-à-dire qu'il est prévu qu'il n'y a pas de changement de couleur (vert) ou qu'il deviendra jaune en raison de la fermentation du glucose.

Limites

N'utilisez pas de bouillon qui montre la turbidité, les précipités, le changement de couleur ou tout signe de détérioration.

Les références

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Isolation microbiologique de Salmonella spp. et outils moléculaires pour la détection. Santé non inférieure. Barranquilla (col.) 2014; 30 (1): 73-94. Disponible sur: SCIELO.org.co
2. Bbl. Boulet malonate, Ewing modifié. 2007. Disponible sur: BD.com
3. Laboratoires de séné. Bouillon de malonato. Disponible sur: scientifique.com
4. Renylab. Bouillon de malonato. 2013. Disponible sur: ceci.Renylab.Indiana.BR
5. Diagnostics de mbiologie. Bouillon de malonato. Disponible sur: Mbiology.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. 5e ed. Pan -American Editorial S.POUR. Argentine.
7. Conda pronadisa Laboratories. Bouillon malonato phénylalanine. Disponible sur: condalab.com