Agar TCBS ce qui est, fondation, préparation, utilisation

Il Agar TCBS Il s'agit d'une culture solide hautement sélective et différentielle, utilisée pour l'isolement et la culture des bactéries du genre Vibrio, en particulier Vibrio cholerae, V. Vulnificus et V. parahaemolyticus En tant que principaux agents pathogènes de ce genre.

L'acronyme TCBS signifie Thiosulfate Bile Bile Citrate. Cette gélose est également connue comme un milieu sélectif pour les vibries. La formule originale a été créée par Nakanishi puis modifiée par Kobayashi.

Il est composé d'extrait de levure, de peptone de viande, de tritéine, de citrate de sodium, de thiosulfate de sodium, de bile de bœuf, de saccharose, de chlorure de sodium, de citrate ferrique, bleu bromool, bleu thymol et agar.

Cette composition permet un développement adéquat d'espèces de vibrium à partir d'échantillons d'eau, de nourriture et de excréments; A l'exception de Vibrio hollisae, qui ne pousse pas dans ce milieu. De plus, le milieu TCBS est capable d'inhiber la croissance d'autres bactéries d'accompagnement, en particulier les coliformes.

En raison des graves problèmes gastro-intestinaux et extra-intestinaux que certaines espèces du genre Vibrio produisent, leur diagnostic est très important. L'humain est principalement infecté par la consommation d'aliments crus ou peu cuits de la mer ou des eaux contaminées, mais aussi par une infection des plaies.

Pour cette raison, les laboratoires cliniques doivent inclure la gélose TCBS dans l'étude des copoules des échantillons de selles liquides, en particulier avec l'apparence de l'eau de riz. Surtout si le patient se réfère à avoir été en contact avec l'eau de mer ou avoir consommé des crustacés ou des poissons.

Base

L'extrait de levures, les peptones de la viande et le tripteína, sont la source nutritive de ce milieu. Cependant, l'agar TCBS est un milieu inhospitalier pour la plupart des bactéries.

Sa sélectivité élevée est donnée par l'agrégat du citrate de sodium et de la bile de bœuf; Les deux sont des agents inhibiteurs qui fournissent également un pH alcalin au milieu, restreignant la croissance de la flore qui l'accompagne et favorisant la croissance de V. Cholérae, entre autres espèces. Notamment Vibrio cholerae est très sensible à l'acidité.

Pour sa part, le chlorure de sodium équilibre les équilibres osmotiquement à l'environnement. De plus, comme sa concentration est élevée, elle agit également comme un agent inhibiteur, favorisant la croissance des bactéries halophiles.

Tarks est le sucre fermentable qui, avec les indicateurs bleu-bromotimol bleu et pH bleu, donnent le caractère différentiel moyen. Pour cette raison, avec ce milieu, il est possible de différencier les souches de fermentation de la non-fermentation.

Les colonies des souches fermentaires de saccharose se développent en couleur et transtiendront le milieu du vert au jaune par la production d'acides. Des grandes translucides non fermentantes et les restes moyens de la couleur d'origine (vert).

De même, ce milieu contient du thiosulfate de sodium comme source de soufre et de citrate ferrique en tant qu'agent révélateur. Les deux montrent des bactéries capables de produire du sulfure d'hydrogène (gaz incolore). Le H₂S est formé à partir du thiosulfate puis réagissant avec le citrate ferrique, un précipité noir visible est formé.

Enfin, l'agar est celle qui fournit la cohérence solide à l'environnement.

préparation

Peser 89 gr du milieu déshydraté et se dissoudre dans un litre d'eau distillée. Aide à la dissolution pour le chauffage et l'agitation fréquents. Le mélange peut être bouilli jusqu'à 2 minutes.

Ce support ne s'autoclave pas. Après sa solution, il est servi directement sur des plaques stériles. En se solidifiant, ils sont commandés de manière inversée dans les plaquettes et sont stockées au réfrigérateur (2-8 ° C) jusqu'à utiliser.

Le milieu après préparé doit être à pH 8,6 ± 0,2.

La couleur du milieu déshydraté est beige clair ou beige-vert, et la couleur du milieu est la forêt verte ou le vert bleu.

Il est important de laisser les plaques se tempérer avant de semer les échantillons.

Utiliser

L'échantillon le plus courant pour l'isolement vibulaire est les excréments diarrhéiques.

Les échantillons de selles ne peuvent pas être semés immédiatement dans l'environnement sélectif, ils doivent être transportés au milieu de Cary Blair.

Pour augmenter la sensibilité de la culture, les excréments peuvent être transmis par l'eau de Peptonada à pH 8,4 comme moyen d'enrichissement pendant 8 heures maximum, à partir de là, il est subjectif au milieu TCBS.

Il convient également de garder à l'esprit que certaines souches vives peuvent provoquer une septicémie chez les patients immunodéprimés, ils peuvent donc être isolés des hémocultures. De même, les échantillons de nourriture et de nourriture de la mer peuvent être analysés lorsqu'il y a des épidémies épidémiques de la maladie du choléra.

Semé

L'inoculum de l'échantillon à l'étude doit être proéminent, celui semé est réalisé par la méthode de brassage d'épuisement. Les plaques sont incubées à 37 ° C pendant 24 heures en aérobiose.

Les colonies présumées de Vibrio cholerae Ce sont des bords moyens, lisses, opaques, minces et jaunes car ils ferment le saccharose.

Cultiver également des espèces V. Alginolytique, V. rivière, V. Hareyi, V. Cincinnatiensis, V. Furnissii, V. Metschnikovii et certaines V. Vulnificus. D'autres espèces cliniquement importantes telles que V. parahaemolyticus Ils ne fermentent pas de saccharose, se développant comme des colonies vertes olive.

D'un autre côté, il faut garder à l'esprit que certaines souches d'aéromones et de plésiomones qui sont oxydase (+) peuvent se développer dans ce milieu, en développant des colonies jaunes qui peuvent confondre le clinicien. Tandis que certaines souches de pseudomonas oxydase (+) se développent comme des colonies vertes ainsi que V. parahaemolyticus.

Limitation

Le test oxydase positif pour le genre Vibrio ne doit jamais être effectué à partir de colonies obtenues à partir de l'agar TCBS, car le résultat obtenu sera un faux négatif. Les composés du milieu interfèrent fortement dans ce test. Par conséquent, cela doit être fait à partir de sujets en gélose sanguine.

Contrôle de qualité

Pour prouver que le médium est en bon état, il est conseillé.

Pour cela, vous pouvez utiliser des souches de:

-Vibrio cholerae - croissance satisfaisante (colonies jaunes, bord translucide).

-Vibrio parahaemolyticus - croissance satisfaisante (colonie avec centre vert et bord translucide).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - Croissance satisfaisante (colonies jaunes avec des halos de la même couleur autour de la colonie).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - Inhibition totale ou partielle (petites colonies jaunes ou translucides).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- inhibition partielle ou totale (colonies bleues).

-Escherichia coli ATCC 25922 - complètement inhibé.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Inhibition totale ou partielle. (Petites colonies Green Edge Translucent Edge).

L'incubation d'un médium sans inoculation ne devrait pas avoir de changement.

Les références

1. Laboratoire de BD. Bd. Agar TCBS. Disponible sur: BD.com
2. Laboratoires britanniques. TCBS moyen. Disponible sur: Britanialab.com