Gélose du sang

Une approche sanguine. Avec licence

Qu'est-ce que l'agar sanguine?

Il Gélose du sang Il s'agit d'un milieu de culture solide enrichie, utilisé pour la récupération et la croissance d'une grande variété de micro-organismes à partir d'échantillons cliniques ou subjectifs.

Ce milieu de culture est essentiellement composé d'une gélose de base enrichie et de 5% de sang de mouton. La base d'agar peut varier en fonction des besoins, mais sera principalement composé de peptonas, d'acides aminés, de vitamines, d'extrait de viande, de chlorure de sodium, d'agar, entre autres. Quant au sang, le sang humain est parfois utilisé.

La collecte de sang peut être préparée en laboratoire ou peut déjà être achetée, à des entreprises qui y sont dédiées. La préparation de ce médium est très délicate, toute négligence dans son élaboration entraînera un lot contaminé.

Par conséquent, toutes les précautions possibles doivent être prises et, à la fin, effectuer une plaque de contrôle de la qualité incubant 37 ° C 1 pour 100 préparé.

Base

Staphylococcus aureus cultivé dans une gélose sanguine. Source: Nathan Lire sur Flickr Nathan R. Sur Twitter, Wikimedia Commons

L'agar sanguine est un milieu enrichi, différentiel et non sélectif. 

• C'est un milieu enrichi car il transporte comme un additif principal de 5 à 10% de sang sur une base d'agar. Les deux composés contiennent de nombreux nutriments qui permettent à la plupart des bactéries cultivables de se développer dedans.
• Cette croissance se produit sans restriction, elle n'est donc pas sélective. Cependant, si des composés sont ajoutés qui empêchent la croissance de certains micro-organismes et favorisent celui des autres, il devient sélectif. Par exemple, si certains types d'antibiotiques ou d'antifongiques sont ajoutés.
• Il est différentiel, car il permet de distinguer 3 types de bactéries: bêta-hémolytique, alpha-hémolithique et gamma-hémolytique.
• Les bêta-hémolytiques sont ceux qui ont la capacité de Lisar ou de compléter. Des exemples de bactéries ß-hémolytiques sont Streptococcus pyogenes et Streptococcus agalactiae.
• Les alpha-hémolytiques sont ceux qui effectuent une hémolyse partielle, où l'hémoglobine est oxydée en méthémoglobine, générant une coloration verdâtre autour des colonies. Ce phénomène est connu sous le nom d'hémolyse α ou α-hémolyse, et les bactéries sont classées comme α-hémytique. Exemple de bactéries α-hémolytiques Streptococcus pneumoniae et Streptocoque du groupe Viridans.
• Les bactéries gamma-hémolytiques ou non hémolytiques se développent sur une gélose sans générer de changements, un effet connu sous le nom d'hémolyse γ, et le micro-organisme sont γ-hémolithiques. Exemple de bactéries γ-hémolytiques: quelques souches de Streptocoque du groupe D (Streptococcus bovis et Enterococcus faecalis).

Applications

• Ce milieu de culture est l'un des plus couramment utilisés dans le laboratoire de microbiologie. Parmi les micro-organismes capables de se développer dans ce milieu figurent: stricts, facultatifs, microaérophiles, anaérobies, grammes positifs ou à Gram, bactéries, bactéries de croissance rapide ou croissance lente ou croissance lente.
• Certaines bactéries exigeantes ou ennuyeuses se développent également du point de vue nutritionnel, ainsi que des champignons et des levures. Il est utile pour les souches subjectives ou réactivantes qui sont métaboliquement très faibles.

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Cependant, le choix de l'agence de sang et de base variera en fonction du micro-organisme susceptible de récupérer et de l'utilisation qui sera donnée à la plaque (culture ou antibiogramme).

Choix de groupe sanguin

Le sang peut être d'agneau, de lapin, de cheval ou humain.

Le plus recommandé est le sang d'agneau, à l'exception de quelques exceptions. Par exemple, pour isoler les espèces de Haemophilus, où le sang recommandé est un cheval ou un lapin, car le sang d'agneau a des enzymes qui inhibent le facteur V.

Le moins recommandé est l'humain, bien qu'il soit le plus utilisé, peut-être parce qu'il est le plus facile à obtenir. 

Le sang doit être défibiné, obtenu sans aucun additif et d'animaux en bonne santé. Pour l'utilisation du sang humain, plusieurs facteurs doivent être gardés à l'esprit:

• Si le sang provient d'individus qui ont subi des infections bactériennes, elles posséderont des anticorps spécifiques. Dans ces conditions, il est probable que la croissance de certaines bactéries sera inhibée.
• S'il est obtenu à la banque de sang, il contient du citrate et il est possible que certaines bactéries ne se développent pas en sa présence.
• Si le sang provient de patients qui prennent des antibiotiques, la croissance des bactéries sensibles peut être inhibée.
• Et si le sang provient d'une personne diabétique, l'excès de glucose interfère avec les schémas d'hémolyse en développement correct.

Choix du taux de base

La gélose de base utilisée pour la préparation de la gélose sanguine peut être très large. Parmi eux: la gélose nutritive, la perfusion cardiaque Cerebro, le soja triptyque, Müller Hinton, Thayer Martin, Columbia Agar, Brucella Agar, Campylobacter Agar, etc.

Utilisations de la gélose sanguine selon le milieu de base utilisé pour la préparation

Gélose nutritive

Cette base est la moins utilisée, car ils développeront principalement des bactéries non exigeantes, comme les bacilles entériques, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, entre autres. Il n'est pas recommandé d'isoler Streptocoque.

Perfusion cardiaque Cerebro (BHI)

C'est l'un des plus utilisés comme base, car il a les nutriments nécessaires à la croissance de la plupart des bactéries, y compris Streptococcus sp et d'autres bactéries exigeantes. Bien qu'il ne soit pas approprié d'observer les modèles d'hémolyse.

Avec cette base, le sang d'agneau est utilisé.

Vous pouvez également préparer des variantes de gélose de sang, où d'autres composés sont ajoutés pour isoler certains micro-organismes. Par exemple, la perfusion Cerebro Heart complétée par du sang de lapin, de la cystine et du glucose, sert à isoler Francisella tularensis.

Tandis qu'avec Cistina Telurito, il est utile d'isoler Corynebacterium diphteriae. Le sang humain ou d'agneau peut être utilisé.

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Avec le premier, la bêta-trimolyse sera considérée comme un halo étroit, tandis qu'avec la seconde, le halo sera beaucoup plus large.

Cette base, ainsi que la bacitracine, l'amidon de maïs, le sang de cheval et d'autres suppléments d'enrichissement (Isovalex), est utilisé pour l'isolement des sexes Haemophilus sp Des échantillons respiratoires.

Si la combinaison d'antibiotiques de chloramphénicol-gentamycine ou de pénicilline avec du sang de cheval est ajouté, il sert à isoler les champignons pathogènes exigeants, même avec une performance plus élevée à l'agar du glucose Sabouraud. Est particulièrement utile isolément de Histoplasme capsulatum.

Gélose de soja triptyse

Cette base est la plus recommandée pour mieux observer le modèle d'hémolyse et la réalisation des tests de diagnostic, tels que les taxes opto-corner et bacitracine. C'est la gélose sanguine classique utilisée par la routine.

Avec cette base, vous pouvez également préparer la gélose du sang spéciale pour Corynebacterium diphteriae, Avec Télurito Cistina et sang d'agneau.

La combinaison de ce sang d'agar, plus de kanamycine-vancomycine, est idéale pour la croissance anaérobie, en particulier Bacteroides sp.

Gélose Müller Hinton

Cette base complétée dans le sang est utilisée pour effectuer l'antibiogramme des micro-organismes exigeants, tels que Streptococcus sp. Il est également utile pour isoler les bactéries telles que Pneumophila légionen.

Thayer Martin Agar

Ce milieu est idéal comme base d'agar sanguine lors de la suspicion du genre Neisseria, spécialement Neisseria Meningitidis, car N. gonorrhoeae Il ne grandit pas dans la gélose du sang. Il sert également à effectuer des tests de sensibilité à Neisseria Meningitidis.

Agar Columbia

Cette base est excellente pour semer des échantillons de biopsies gastriques à la recherche de Helicobacter pylori.

Le milieu prépare 7% du sang d'agneau défibiné avec des antibiotiques (vancomycine, trimétoprime, amphotéricine B et Cefsulodine) pour restreindre la croissance d'autres types de bactéries qui peuvent être présentes.

Cette même base supplémentée de sang humain ou d'agneau, de nalidíxico et d'acide colistin est utile pour isoler Gardnerella Vaginalis. Il est également idéal pour évaluer la sensibilité aux antimicrobiens aux antibiotiques du même micro-organisme.

De plus, il sert à la préparation de l'agar sanguine pour la culture anaérobie, ajoutant des aminoglycosides et de la vancomycine. Cette base nous permet d'observer correctement les modèles d'hémolyse.

Gélose de brucella

Ce milieu utilisé comme base d'agence de sang, ainsi que l'ajout de vitamine K, est idéal pour la culture de bactéries anaérobies. Dans ce cas, l'utilisation de sang d'agneau est recommandée.

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Gélose Campylobacter

Agar Campylobacter supplémenté avec 5% de sang de RAM et 5 antibiotiques (céphalotine, amphotéricine B, trimetoprime Campylobacter jejuni Dans les échantillons.

préparation

Chaque maison commerciale apporte à l'inverse de l'emballage les indications pour préparer un litre de médium de culture. Les calculs correspondants peuvent être effectués pour préparer le montant souhaité, selon l'agar de base sélectionnée.

Peser et se dissoudre

L'agar de base est déshydratée (en poussière), donc elle doit être dissoute dans l'eau distillée ajustée à pH 7,3.

La quantité indiquée par la gélose de base choisie est pesée et dissoute dans la quantité d'eau correspondante dans un fixola, puis il est chauffé à feu modéré et se mélange avec des mouvements rotatifs jusqu'à la poussière entière.

Stériliser

Une fois dissous, stérilisez en autoclave à 121 ° C pendant 20 minutes.

Agrégat de sang

Lorsque vous quittez l'autoclave, le fixola sera refroidi jusqu'à ce que la température varie entre 40 et 50 ° C. C'est une température qui soutient la peau humaine, et en même temps l'agar n'a pas encore solidifié.

Pour ce faire, le Fixola est touché avec la main et si la chaleur est tolérable, c'est la température idéale pour ajouter le sang défibré correspondant (50 ml par litre d'agar). Se mélanger pour homogénéiser.

Le passage de l'agrégat du sang est crucial, car s'il est fait lorsque le milieu est très chaud, les globules rouges se briseront et le milieu ne servira pas à observer l'hémolyse.

S'il est ajouté trop froid, des grumeaux seront formés et la surface du milieu ne sera pas lisse pour pouvoir faire correctement le striatum.

Verser dans les assiettes de Petri

Servir dans des plaques de Pétri stériles immédiatement après homogénéisation du sang. Dans chaque plaque Petri, environ 20 ml sont versés. Cette procédure est effectuée dans une cloche d'écoulement laminaire ou près du briquet.

Au moment de servir du sang sur les assiettes de Petri, les bulles d'air ne doivent pas être laissées à la surface de la plaque. Si cela se produit, la flamme du briquet de Bunsen est passée rapidement sur la plaque pour les retirer.

Les plaques peuvent se solidifier et sont stockées dans le réfrigérateur (2-8 ° C) inversé jusqu'à utiliser. Avant d'utiliser des plaques de gélose sanguine, ils doivent être trempés pour pouvoir semer.

Les plaques préparées ont une durée approximative de 1 semaine.

Les références

1. Bayona, M. Conditions microbiologiques pour la culture de Helicobacter pylori. Tour. Chou. Gastroentérol. 
2. Forbes, B ,, Sahm, D., Weissfeld, un. Diagnostic microbiologique de Bailey & Scott. Pan -American Editorial S.POUR.