Gélose au chocolat

Yersinia pestis bactéries sur une plaque d'agar au chocolat. Source: Département de la santé et des services sociaux, Wikimedia Commons

Qu'est-ce que l'agar au chocolat?

Il Gélose au chocolat C'est un moyen d'une culture solide, enrichie, non sélective et non différentielle. Il est principalement utilisé pour l'isolement des micro-organismes exigeants du point de vue nutritionnel, bien que tout type de bactérie puisse y développer.

C'est pourquoi son utilité augmente en particulier dans les échantillons d'échantillonnage qui sont normalement stériles, comme le LCR et le liquide articulaire. Bien qu'il soit également inclus dans les milieux choisis pour la plantation d'échantillons polymicrobiens, mais dans ces cas, il est nécessaire d'ajouter des antibiotiques qui inhibent la flore concomitante.

Ce milieu a une couleur brune caractéristique très similaire au chocolat, d'où son nom. La préparation est très similaire à celle de l'agar sanguine, seulement dans ce cas le sang doit être chauffé de sorte que les globules rouges se cassent.

Sa préparation, comme l'agar sanguine, est très délicate, car elle est facilement contaminable. Par conséquent, de nombreux laboratoires préfèrent acquérir ce support déjà préparé par des maisons commerciales qui garantissent leur qualité.

Base

Il est composé d'une base d'agar riche en nutriments et de sang chauffé. L'hémolyse des globules rouges fournit le facteur moyen X (hémina) et le facteur V (NAD), nécessaire à la croissance de certains micro-organismes, tels que le sexe Haemophilus. Il est également très utile pour isoler Neisserias SP.

Comme l'agar sanguine, différents médias peuvent être utilisés comme agence de base, selon le besoin. Parmi les médias utilisés figurent la perfusion Cerebro Heart and Crush Soybean, bien que les plus recommandées soient Columbia Agar, Müller Hinton, GC Agar et Thayer Martin Agar.

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Certaines variantes d'agar au chocolat comprennent un supplément enrichi, disponible dans le commerce, appelé isovalex ou polyvitex.

Ces suppléments contiennent de la vitamine B₁₂, L-glutamine, adénine, chlorhydrate de guanine, acide p-aminobenzoïque, nicotinamide adénine dinucléotide (NAD), thiamine pyrophosphate, nitrate ferrique, chlucide de thiamine, cystéine Hydrochlorure, L-cistine et glucose.

Il est important de souligner que la gélose au chocolat est plus enrichie que la gélose sanguine, mais ne permet pas les schémas d'hémolyse.

Applications

• Agar au chocolat avec gélose Columbia: Contient de la caséine pancréatique et du cœur, la peptique digérée de la viande, le chlorure de sodium, l'agar, l'extrait de levure et l'amidon de maïs. De plus, il est riche en vitamines, minéraux et acides aminés essentiels. Cette base avec du sang chauffé est idéale pour isoler les bactéries du genre Neisseria. D'un autre côté, si un supplément est ajouté à Brucella, Le micro-organisme susmentionné peut être isolé. Les résultats sont améliorés à l'aide de sang de cheval.
• Agar au chocolat avec gélose de base GC (pour gonocoques): Contient des peptones, de l'amidon de maïs, des tampons monobasiques et dibasiques, du chlorure de sodium et de la gélose. La plupart des présentations de débit de chocolat préparées commercialement sont livrées avec cette base et ne contiennent pas de sang chauffé, mais un mélange synthétique d'hémina et un supplément chimique de facteurs de croissance, de vitamines, de minéraux, d'acides aminés, de facteur V et de glucose.
• Agar au chocolat préparé avec la gélose Müller Hinton: Il est utilisé pour effectuer le test de sensibilité aux antimicrobiens de micro-organismes exigeants, tels que Streptococcus pneumoniae, En utilisant 5% de sang de bélier chauffé. Il sert également à l'isolement principal de Neisseries et Haemophilus, mais dans le cas particulier de l'isolement de Haemophilus L'utilisation du sang de cheval est préférée, pour être riche en facteurs X et V. D'un autre côté, si l'échantillon à planter provient d'une zone non sérite, l'ajout d'antibiotiques est recommandé pour inhiber la flore normale de la zone. Exemple: pour des échantillons respiratoires où la présence de bactéries de genre est suspectée Haemophilus la bacitracine est utilisée pour inhiber la croissance de Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus et Neisseries saprophytes. 
• Agar au chocolat avec gélose Thayer Martin: Il est spécial d'isoler Neisseria gonorrhoeae. Il doit contenir des antibiotiques pour inhiber la flore qui l'accompagne. Le sang d'agneau est utilisé.

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préparation

Les indications de préparation de la gélose de base qui seront utilisées doivent être vues. Généralement, ils décrivent combien vous devez peser pour préparer un litre de médium de culture. En laboratoire, vous pouvez préparer le montant exact nécessaire, qui peut être plus ou moins d'un litre.

Calculs

Une règle de trois est faite pour calculer combien vous devez peser pour préparer le volume souhaité. Exemple:

Si pour 1 litre, il est nécessaire de peser 40 GR et que le laboratoire nécessite 800 ml, il est dit:

1000 ml -40 GR

800 ml - x

La formule sera la suivante:

X = 32 gr (quantité malgré 800 ml).

Peser et se dissoudre

La quantité nécessaire est pesée et placée dans un felola avec l'eau.

Il chauffe à feu modéré et est mélangé doucement avec des mouvements rotatifs jusqu'à ce que le milieu déshydraté se dissout complètement, le laissant bouillir pendant 1 minute.

Stériliser

Le fixola est introduit dans l'autoclave pour stériliser le milieu à 121 ° C pendant 20 minutes.

Agrégat de sang

Lorsque vous quittez l'autoclave, il est autorisé à se tenir jusqu'à ce que la température du milieu soit environ entre 56 et 70 ° C pour placer le sang et mélanger jusqu'à ce que le milieu devienne la couleur brune.

Si des suppléments vont être ajoutés, c'est le moment de le faire. Par la suite, mélanger et servir 20 ml à chaque plaque de Petri stérile.

La procédure entière doit être effectuée dans une cloche d'écoulement laminaire ou autour du briquet Bunsen. Laisser reposer jusqu'à ce qu'ils se solidifient et économisent de manière inversée dans un réfrigérateur.

Une autre façon de préparer la gélose au chocolat sans utiliser de sang

Le milieu de base est préparé comme décrit ci-dessus, l'hémoglobine déshydratée obtenue commercialement et stérilisée dans l'autoclave est dissous dans l'autoclave.

Peut vous servir: Hemoolinfa

Les deux solutions peuvent refroidir à 50 ° C, le supplément est joint et ajouté. Mélanger dans des conditions aseptiques puis servir dans des plaques stériles de Pétri.

Contrôle de qualité

Il est important que le sang soit placé à la température indiquée, car il est l'idéal pour Lisar les globules rouges et en même temps maintenir le facteur V, qui est thermène.

Ils ne devraient pas être des bulles à la surface de l'agar. De chaque lot de 100 plaques, une ou deux plaques doivent être incubées dans le poêle à 37 ° C pendant 24 heures pour vérifier sa stérilité.

Pour de meilleurs résultats, la gélose au chocolat doit être utilisée peu de temps après sa préparation.

Les contrôles des souches bactériennes devraient être prises en laboratoire pour évaluer l'efficacité de l'environnement fraîchement préparé à la croissance des principaux micro-organismes exigeants d'importance clinique.

Les références

1. Garcia, P., Murs, f., Fernández del Barrio, M. Microbiologie clinique pratique. Université Cadiz. Service de publications UCA.
2. Gélose au chocolat. Récupéré de.Wikipédia.org.