Müller Hinton Agar Qu'est-ce que la fondation, la préparation, utilise

Il Gélose Müller Hinton Il s'agit d'un milieu nutritionnel solide et non sélectif, qui est composé de perfusion de viande, d'acide à peptone de caséine, d'amidon, d'adhérence et d'eau distillée. Ce milieu permet un excellent développement microbien des bactéries de croissance la plus rapide.

Il a été créé à l'origine par John Howard Müller et Jane Hinton pour isoler les bactéries exigeantes du point de vue nutritionnel, telles que Neisseria gonorrhoeae et Neisseria Meningitidis. Cependant, en raison de ses caractéristiques, il s'est avéré idéal pour l'étude de la sensibilité aux antibiotiques, fournissant des résultats fiables et reproductibles.

Par conséquent, l'agar Müller Hinton est le support de culture accepté par l'Institut clinique et de laboratoire des normes (CLSI) et le Comité européen sur les tests de sensibilité aux antimicrobiens, pour l'exécution du test de sensibilité aux antimicrobiens par la méthode de diffusion de Kirby et Bauer.

Base

Parce qu'il s'agit d'un milieu nutritionnel non sélectif, il est excellent pour la croissance de la plupart des bactéries pathogènes.

D'un autre côté, sa composition simple fait que les substances se répandent facilement, étant une caractéristique essentielle du test de sensibilité par la méthode de diffusion du disque.

Une autre de ses caractéristiques est qu'elle contient un faible nombre d'inhibiteurs, ce qui permet à l'évaluation efficace de sulfonamide, de trimétoprime et de tétracyclines.

Cependant, il convient de garder à l'esprit que le support doit remplir certaines conditions pour garantir son bon fonctionnement, notamment:

L'ajustement du pH, la profondeur de l'agar et la concentration appropriée de Timina, Timidina, CA⁺⁺, Mg⁺⁺ et Zn⁺⁺.

Vous devez également savoir que la méthodologie est standardisée et donc tous les paramètres, tels que:

La concentration de l'inoculum, la concentration et la conservation des disques antibiotiques, le placement du nombre approprié de disques sur l'agar, la distance entre un disque et l'autre, le placement stratégique de certains antibiotiques, l'atmosphère, la température et le temps d'incubation.

préparation

Peser 37 GR du milieu Müller hinton déshydraté et se dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Chauffer l'environnement tout en remuant pour aider votre dissolution. Faire bouillir pendant 1 minute.

Apporter à l'autoclave pour stériliser à 121 ° C pendant 15 minutes. Lors du retrait de l'autoclave, le fixola doit être placé dans une salle de bain de María à 50 ° C pour refroidir. Versez 25 à 30 ml dans des plaques de sterri stériles de 10 cm de diamètre.

Les plaques doivent être laissées avec une épaisseur moyenne de 4 mm (idéal), une plage de 3 à 5 mm étant autorisée.

Si vous voulez préparer du sang à l'aide de Müeller Hinton, le sang d'agneau stérile à 5% est versé comme base.

Peut vous servir: Glycéraldéhyde 3-phosphate (G3P): Structure, fonctions

Le pH final du milieu doit être compris entre 7,2 et 7,4.

Investissez et économisez dans le réfrigérateur, jusqu'à utiliser. Laissez la plaque prendre une température ambiante avant d'utiliser.

La couleur du milieu préparé est beige clair.

Applications

Il est utilisé pour effectuer l'antibiogramme ou le test de sensibilité aux antibiotiques aux agents pathogènes de croissance les plus rapides.

Si l'agar est complétée par du sang, sert à effectuer l'antibiogramme des micro-organismes exigeants tels que: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus SP, Neisseria meningitidis, entre autres. Il a également été utilisé pour isoler Pneumophila légionen.

Technique des antibiogrammes

Avant d'effectuer l'antibiogramme, une solution bactérienne équivalente à 1,5 x 10 doit être préparée⁸ Cellules.

Pour ce faire, 3 à 4 colonies de cultures pures sont prises et suspendues dans un bouillon de soja triptyque ou dans le bouillon de Müller Hinton, incubent pendant 2 à 6 heures et la concentration avec une solution saline stérile est ajustée, la comparant à un motif Mac Farland Mac Farland de 0,5%.

S'ils exigent des micro-organismes, les colonies peuvent être suspendues directement jusqu'à la concentration de Mac Farland à 0,5%. Par la suite, la plaque Hinton Müller est semée avec un écouvillon imprégné de la solution bactérienne préparée.

Pour ce faire, l'écouvillon est immergé dans la solution, puis l'excès de fluide est éliminé par pression contre les murs du tube. Immédiatement après que l'écouvillon passe à travers toute la surface, sans partir sans toucher, puis la plaque est légèrement tournée et semez à nouveau. L'opération est répétée 2 fois plus.

Laisser reposer 10 minutes, puis placer les disques antibiotiques avec une pince stérile, laissant un espace de 24 mm entre l'un et l'autre. Après avoir placé chaque album sur l'agar, appuyez sur chacun avec la pince pour vous assurer qu'ils sont bien attachés.

Après le processus, la plaque est investie et 35 à 37 ° C est incubée dans une aérobiose pendant 16 à 18 heures. S'il s'agit d'un micro-organisme exigeant, il peut mériter une microaérophilie et si l'antibiogramme contient des disques d'oxacilline, il doit être lu à 24 heures.

Pour mesurer le diamètre de chaque halo, une règle est utilisée. Les résultats doivent être enregistrés en mm. Par la suite, les valeurs obtenues avec les tableaux de points de coupe publiés par le manuel CLSI actuel sont corrélés.

Signaler comme sensible (s), intermédiaire (i) ou résistant (r), selon le cas.

Les antibiotiques sont sélectionnés en fonction du micro-organisme isolé et du type d'infection qui produit.

Peut vous servir: niveaux d'organisation des êtres vivants

Parfois, le placement stratégique des antibiotiques doit être gardé à l'esprit pour montrer les modèles de résistance phénotypique.

Placement stratégique des disques sur la gélose de Müeller Hinton

Pour les entérobactéries, le disque d'acide clavulanique doit être placé devant les céphalosporines de 3e et 4e génération. Un élargissement en forme d'oeuf indique que la tension est un producteur de bêta-lactamases à spectre étendu (BLEE). Cela signifie que le patient ne doit pas être traité avec une céphalosporine.

Dans Staphylococcus, c'est important.

Un halo résistant à l'érythromycine et une planéité dans le halo de la clindamycine indique que la souche a une résistance inductible à la clindamycine, la souche (RIC). Cela signifie qu'un traitement de clindamycine ne sera pas efficace.

Pour la recherche de souches AMP C inductibles dans les entérobactéries et certains bacilles à Gram négatif non fermentant, ceftazidime, céfoxitine ou pipéacide.

Un halo doré sur l'un des disques face à l'imipénème indique la présence d'ampli inductible c.

Pour la recherche d'ampli constitutif C, un égout de 500 µg avec un disque de cloxacilline. Une largeur de guérison dans l'une des céphalosporines indique la positivité.

Vous pouvez également remplacer le disque de cloxacilline par un 9 mm du papier filtre Whatman n ° 6 imprégné d'acide borique (400 µg) avec une distance de 18 mm. Il est interprété égal à la précédente.

Enfin, pour étudier la production de métalobethalactamases en particulier dans Pseudomonas aeruginosa, Un disque imprégné de 10 µl d'acide éthylindiaminteraacétique (EDTA 750 µg) et d'acide thioglycolique (SMA 300 µg) est utilisé, qui fait face aux disques imipénèmes et méropénèmes, à une distance de 15 mm.

Le test est positif s'il y a un élargissement des halos Imipenem ou Meropenem vers l'album EDTA / SMA. Ce résultat doit être confirmé par le test Hodge modifié.

Cette méthode consiste à inoculer une souche de Escherichia coli ATCC 25922 sur l'assiette Müller Hinton. Un disque imipenem au centre de la plaque est placé, puis une étape du disque est faite à la périphérie avec la tension de P. aeruginosa suspect. Vous pouvez essayer jusqu'à 4 souches par assiette.

Le test sera positif s'il y a une zone de distorsion du halo imipénème autour de la stro.

Il peut vous servir: Neolamarckismo: arrière-plan et caractéristiques

Causes de résultats erronés

-Les disques antibiotiques gravement conservés peuvent produire une fausse résistance. Par exemple, le disque oxacilline est très vulnérable aux changements de température.

-Un pH du milieu en dessous de la (acide) indiquée produit des halos plus petits dans les aminoglycosides et les macrolides (risque de fausse résistance), et des halos plus importants dans la pénicilline, la tétracycline et la novobiocine (risque de fausse sensibilité).

-Si le pH est au-dessus de l'indiqué (alcalin), les effets décrits ci-dessus sont investis.

-Les milieux avec des concentrations élevées de thymine et de thymidine influencent de manière significative la réduction de la sulfonamide et de l'inhibition du trimetoprime HALS.

-Des concentrations élevées de calcium et de magnésium produisent une fausse résistance d'aminoglycosides, de polymixine B et de tétracyclines devant les souches de Pseudomonas aeruginosa.

-De faibles concentrations de calcium et de magnésium produisent de fausses sensibilités d'aminoglycosides, de polyxine B et de tétracyclines devant les souches de Pseudomonas aeruginosa.

-La présence de zinc affecte les résultats des disques carbapénèmes (imipénème, méropénème et ertapenème).

-L'épaisseur du milieu inférieur à 3 mm produit des résultats d'une fausse sensibilité, tandis qu'une épaisseur supérieure à 5 produira une fausse résistance.

-La mobilisation des disques dans l'antibiogramme donnera des halos déformés, car la décharge d'antibiotiques est immédiate.

- Les inoculaires très faibles affectent les résultats, car il n'y aura pas de croissance uniforme ou converge de l'agar, une condition nécessaire pour mesurer les halos d'inhibition, en plus des halos peuvent donner plus.

-Les inoculos trop chargés peuvent donner des hals plus petits que normaux.

-Ne respectez pas la distance entre les disques, un halo se chevauche avec un autre et ne peut pas être lu correctement.

-Incuber avec CO₂ Augmente les halos des disques de tétracycline et de méticilline.

-Incuber à des températures inférieures à 35 ° C produit des halos plus importants.

-Les agrégats sanguins diminuent la taille du halo sulfamide.

Limitation

La sensibilité d'un antibiotique démontré dans l'antibiogramme contre un micro-organisme (In vitro) Ce n'est pas une garantie que cela fonctionnera In vivo.

Contrôle de qualité

Pour savoir si le milieu contient la bonne quantité de timina, une tension doit être semée Enterococcus faecalis ATCC 29212 et prouver la sensibilité au sulfamétoxazole du trimetoprime (SXT), il doit donner un halo égal ou> 20 mm pour être satisfaisant.

Les références

1. Cona e. Conditions d'une bonne étude de sensibilité au moyen d'un test de diffusion. Rev Chil Infecte, 2002; 19 (2): 77-81
2. Laboratoires britanniques. Gélose Müller Hinton. Disponible sur: Britanialab.com