Agar m.R.Qu'est-ce que la fondation, la préparation, utilise

Il Agar m.R.S. Il s'agit d'un milieu de culture solide sélectif, utilisé pour l'isolation et le comptage des bactéries lactiques, en particulier du genre Lactobacillus. Cette gélose a été créée en 1960 par Man, Rogosa et Sharpe, portant le médium du même nom, mais en raison de sa complexité, l'abréviation M est souvent utilisée.R.S.

Il est composé de protéine peptone, d'extrait de viande, d'extrait de levure, de glucose, de sorbitan monolato, de phosphate de dipbotassium, d'acétate de sodium, de citrate d'ammonium, de sulfate de magnésium, de sulfate de manganèse et d'agar.

Han et Sharpe Man Agar (M.R.S.) semé avec Lactobacillus sp. Source: Photo donnée pour cet article par les auteurs: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Photo prise lors de l'enquête intitulée: Évaluation des bactéries lactiques et des bifidobactéries avec un potentiel probiotique dans le lait maternel et les excréments pour nourrissons.

Cette composition permet le bon développement de bactéries lactiques à partir d'échantillons cliniques, tels que les excréments, la sécrétion vaginale, les échantillons oraux et le lait maternel, ainsi que les produits laitiers et les aliments de viande.

Il n'est pas utilisé régulièrement dans les laboratoires cliniques, car les bactéries lactiques sont rarement impliquées dans les processus pathologiques. Cependant, dans la zone de microbiologie alimentaire, l'utilisation de l'agar M est plus fréquente.R.S.

D'un autre côté, ce milieu est utilisé par certains centres de recherche dont l'objectif est l'étude des bactéries lactiques.

Base

L'homme, Rogosa et Sharpe, ont une composition assez complexe. En déchirant la fonction que chacun de ses composants remplit, vous pouvez expliquer sa fondation.

La protéine peptone, l'extrait de viande, l'extrait de levure et le glucose, sont des nutriments qui fournissent la source de carbone, d'azote, de vitamines et de minéraux nécessaires à la croissance bactérienne. De plus, le glucose est la source d'énergie universelle utilisée dans la plupart des médias de culture.

D'un autre côté, pour favoriser la croissance des bactéries lactiques, la présence de cofacteurs indispensables (cations) est nécessaire dans le métabolisme de Lactobacillus et des bactéries apparentées; Ces composés sont des sels de sodium, de magnésium et de manganèse.

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De même, le sorbitan ou le polysorbate monoléoate 80 sont une source importante d'acides gras lorsqu'ils sont absorbés sous forme de nutriments.

De plus, la loi sur le citrate de sorbitan monoléoate et d'ammonium inhibant le développement de la flore qui l'accompagne, en particulier les bactéries gram négatives, fournissant le caractère sélectif de cette gélose.

Enfin, l'agar -agar est celui qui fournit la cohérence solide à l'environnement.

Il existe d'autres variantes de l'agar Rogosa Sharpe; L'un d'eux est le complété en cystéine (M.R.S.c), très utile pour l'isolement des bifidobactéries, entre autres micro-organismes. D'un autre côté, il y a le MRS complété avec de la néomycine, de la paromomycine, de l'acide culaire et du chlorure de lithium, spécial pour le nombre sélectif de bifidobactéries dans les produits laitiers.

préparation

Peser 68,25 grammes du milieu déshydraté et se dissoudre dans un litre d'eau distillée. Laisser reposer 5 minutes. Pour se dissoudre dans son intégralité, entraîner une source de chaleur agitant fréquemment et bouillir pendant 1 à 2 minutes. Stériliser en autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

Lorsque vous quittez l'autoclave, laissez reposer quelques minutes et distribuez encore chaud sur des plaques stériles de Petri.

Laisser solidifier et investir les plaques, commander dans des plaquettes et économiser au réfrigérateur jusqu'à utiliser. Laissez les assiettes prendre la température ambiante avant de les utiliser.

Le pH moyen doit être de 6,4 ± 0,2. Certaines maisons commerciales recommandent un pH entre 5,5 et 5,9.

Le milieu déshydraté est beige et préparé est de l'ambre noir.

Les plaques de milieu déshydraté et préparées doivent être stockées de 2 à 8 ° C.

Applications

Les plaques d'agar m.R.S. Ils peuvent être semés à la surface (épuisement ou avec spatule Drigalski). Il peut également être semé par profondeur. Les plaques doivent être incubées à 37 ° C en microaérophilie (4% de OR₂ et 5-10% CO₂) Pendant 24 à 72 heures.

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La méthode semée est choisie en fonction de l'objectif poursuivi (isolement ou comptage).

Caractéristiques des colonies

Les colonies présumées de Lactobacillus poussent de couleur blanchâtre et ont une apparence mucoïde ou crémeuse dans cette gélose. Par la suite, ils doivent identifier.

Isolement des bactéries lactiques

Pour cela, la surface semée est utilisée. Les échantillons à poursuivre nécessitent une procédure précédente. 

Dans le cas des échantillons de lait maternel, il est recommandé de centrifuger 1 ml de l'échantillon à 14.000 RMP pendant 10 minutes, afin de retirer la couche de graisse. 900 µl sont jetés et dans les 100 µl restants, les sédiments sont suspendus et la surface de l'agar M.R.S. Alors vous devez distribuer uniformément avec une spatule Drigalski.

Dans le cas des échantillons de selles, un (1) gramme de excréments est pesé et 9 ml d'eau peptonée stérile 0,1% est homogénéisée, correspondant à une dilution 1/10. Ensuite, des dilutions en série sont effectuées jusqu'à une dilution finale de 10^-4.

Enfin 100 μl de dilutions 10 sont prises^-2, dix^-3 et 10^-4 Et chaque dilution est semée sur Mme d'agar, distribuant uniformément avec une spatule Drigalski.

Compte de bactéries à l'acide lactique

Dans ce cas, la semée est réalisée par profondeur.

Pour les échantillons de lait maternel, 1 ml est prélevé et placé dans un tube en plastique conique stérile. Agar MRS est ajouté à une température approximative de 40 ° C à un volume final de 25 ml, obtenant un mélange homogène. Par la suite, il est versé dans du Pétri stérile.

Pour les échantillons de selles, des dilutions sont effectuées, comme décrit ci-dessus. 1 ml de chaque dilution est prise et des tubes en plastique stériles. L'agar mât MRS est ajoutée à un volume de 25 ml.

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Le mélange de chaque dilution est uniformément versé dans des plaques stériles de Petri. Enfin, laissez-le reposer jusqu'à votre polymérisation.

Les colonies comptent sur l'homme et la gélose Sharpe (M.R.S.). Source: Photo donnée pour cet article. Auteurs: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Photo prise lors de l'enquête intitulée: Évaluation des bactéries lactiques et des bifidobactéries avec un potentiel probiotique dans le lait maternel et les excréments pour nourrissons.

Au niveau de la recherche

Chaque jour, l'étude des bactéries lactiques est plus intéressante; En particulier les chercheurs cherchent à connaître de nouvelles souches et leur potentiel en tant que fermentes d'initiative pour la normalisation dans la fabrication de produits laitiers, entre autres utilisations.

En ce sens, Alvarado et al. (2007) ont utilisé l'agar m.R.S. Pour réaliser une étude dans laquelle ils ont isolé, identifié et caractérisé des bactéries lactiques présentes dans un fromage artisanal Ahumado Andeen.

Dans le fromage, ils ont trouvé la présence de bactéries des genres Lactococcus et Lactobacillus, et ont conclu que les mélanges de souches isolées sont adéquates comme initiant des souches dans la fabrication de fromages à partir de lait pasteurisé.

D'un autre côté, Sánchez Y Cols. (2017) a utilisé l'agar m.R.S. Pour étudier la présence de bactéries lactiques dans le tubelet digestif, afin de les utiliser comme probiotiques indigènes qui augmentent la productivité des porcs sains.

Avec ce milieu, ils ont réussi à isoler quatre espèces: Lactobacillus Johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae et Pediococcus pentosaceus.

De même, Báez et al. (2019) ont utilisé le vieillissement m.R.S. Pour évaluer les bactéries lactiques (BAL) et les bifidobactéries avec un potentiel probiotique dans le lait maternel et les excréments pour nourrissons.

Ils ont réussi à isoler 11 Bal et 3 Bifidobacteria sp Dans le lait maternel, et 8 bal et 2 Bifidobacteria sp. Dans les excréments. Tous ont rempli certains paramètres qui les accréditent comme des bactéries avec une activité probiotique.

Les auteurs ont conclu que le lait maternel et les excréments des nourrissons allaités servent exclusivement de sources naturelles de bactéries probiotiques.

Contrôle de qualité

Pour évaluer la qualité de l'agar M.R.S. Des contrôles tels que:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli et Bacillus cereus.

Les résultats attendus sont une croissance satisfaisante pour les 6 premières bactéries, tandis que ET. coli et Bacillus cereus doit être inhibé dans son intégralité.

Les références

1. Laboratoire britannique. M.R.Géar s. Disponible sur: Britanialab.com