Fondation de réaction xantoprotéique, procédure, utilisation

La Réaction xantoprotéique Il s'agit d'une procédure chimique utilisée pour déterminer la présence ou l'absence d'acides aminés aromatiques, tels que la tyrosine et le tryptophane, qui peuvent être libres ou constituant des protéines solubles, des peptides ou des polypeptides.

Il a également été utilisé pour détecter les substances toxiques au niveau du sang qui contiennent un groupe de haricot dans sa structure. Ce test est également connu sous le nom de réaction de Becher xantoprotéique.

Réaction xantoprotéique positive Source: tirée de la vidéo: https: // youtu.Be / gzgmbw5w4wo

La réaction xantoprotéique utilise de l'acide nitrique concentré, de la chaleur et un alcali neutralisant. Si, lors de la neutralisation de la réaction, la solution de solution jaune à orange est considérée comme positive. La coloration observée est due à la formation de composés d'azote dérivés de la nitrification des groupes benzéniques.

Si vous devez quantifier la quantité de protéines totales, il est nécessaire d'utiliser d'autres méthodes de détermination des protéines, telles que Biuret.

La réaction xantoprotéique est principalement utilisée lorsque des substances sont analysées à laquelle sa composition chimique n'est pas connue. En général, cette réaction fait partie d'un ensemble de tests qui aideront à déterminer la composition chimique d'une substance ou d'extrait spécifique. C'est pourquoi, il est largement utilisé par les chercheurs.

D'un autre côté, la réaction xantoprotéique de Becher est utilisée pour détecter les substances phénoliques et indoliques dans le sang, étant possibles pour prédire l'apparition de la néphropathie, avant que d'autres paramètres supplémentaires ne soient augmentés.

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Base

La réaction détecte essentiellement la présence du groupe benzénique, à la fois dans les acides aminés, comme dans les protéines et les peptides. L'acide nitrique agit sur l'anneau bencénique d'acide aminé qui le possède, formant des nitrocompositions phénoliques.

La réaction a besoin que de la chaleur soit effectuée, un précipité se forme généralement qui boude le milieu, le faisant laiteux. Le précipité peut être blanc ou jaune. Enfin, cela nécessite une étape d'alcalisation qui accentue la couleur. Pour cela, une base à 40% ou hydroxyde de sodium d'ammoniac est utilisée.

La réaction sera interprétée comme positive si une forte coloration jaune est observée pendant le chauffage sombre ou le processus orange en alcalisant la réaction. Les acides aminés détectés sont principalement la tyrosine et le tryptophane.

Réaction xantoprotéique. Source: http: // Estéroisomeras.Blogspot.com / 2013/06 / caractérisation des protéines.Html

Dans le cas de la phénylalanine, bien qu'il s'agisse d'un acides aminés aromatiques, le noyau benzène de cet acide aminé est difficile à nitatiser dans une réaction simple, il émettra donc ou une réaction négative ou faiblement positive.

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En général, le test xantoprotéique peut être complété par le test Hopkins-Cole, qui sert à identifier spécifiquement le triptophane. Si le test xantoprotéique est positif et celui de Hopkins-Cole est négatif, la présence de tryptophane est rejetée dans cette solution, conduisant à la présence principalement de tyrosine. De même, il peut également être complété par la réaction de Millon pour la détection de la tyrosine, entre autres choses.

Cette réaction peut également être utilisée sur des échantillons de sang, du plasma ou du sérum inchangé pour le diagnostic d'urémie ou d'insuffisance rénale. Dans ce cas, ce qui est recherché, c'est la détection de substances toxiques (phénoliques et indoliques) produites à partir de la pourriture intestinale.

Ces substances possèdent le groupe benzénique et donnent donc une réaction xantoprotéique positive, bien que les substances réactionnaires ne soient ni un acide aminé, ni une protéine.

Procédure

- Réaction xantoprotéique pour la détection des acides aminés avec des groupes aromatiques

Placer 1 ml de l'échantillon de problème dans un tube à essai propre et sec.

-Ajouter 0,5 ml d'acide nitrique concentré.

-Incuber le mélange dans une salle de bain à 70 ° C pendant 2 minutes. Préparez précédemment le bain Maria à la température susmentionnée.

-Lorsque vous prenez le tube du bain Maria, il est possible d'observer que la solution est devenue laiteuse et a pris une coloration blanche jaunâtre.

-La solution est refroidie en laissant tomber de l'eau froide à la base du tube.

-La préparation est alléguée par lentement (goutte par goutte) une solution d'hydroxyde de sodium à 40% jusqu'à ce qu'il y ait un choc de couleur.

-Si le test est positif, un anneau orange foncé sera formé dans l'interface liquide.

-Si la réaction est négative, il n'y aura pas de formation de couleurs.

- Réaction xantoprotéique pour détecter les substances phénoliques et indoliques dans le sang

-Dispense 5 cc d'acide trichloroacétique à 20% sur 5 cc de sang veineux, de plasma ou de sérum, ce dernier étant le plus indiqué. Bien mélanger et filtrer.

Peut vous servir: acide nitrique (HNO3)

-2 cc du filtrage sont pris et mélangés avec 0,5 cc d'acide nitrique. Ensuite, il est chauffé à bouillir, car le tube est placé directement sur la flamme du briquet pendant 30 secondes. Refroidisse avec de l'eau et ajouter 1,5 de chlorure de sodium à 33%.

Il est interprété comme suit:

-Résultat négatif: couleur jaunâtre.

-Résultat positif (+) jaune citron.

-(++) jaune or.

-(+++) jaune foncé à brun

Il peut également être interprété à l'aide d'une échelle colorimétrique référentielle de Auenrieth, constituée par diverses concentrations de bicromato de potassium. Ceci est préparé en dilutions de 10 sur 10 à partir d'une solution mère de 0,03874%. Chaque tube représente un pourcentage.

Échelles d'interprétation

Il y a deux échelles d'interprétation appelées anciennes et modernes. Les valeurs normales sont:

Ancienne table: entre 75 et 85%

Tableau moderne: entre 15 et 25%

Si la couleur du tube à problèmes est au milieu de deux tubes de motifs, une moyenne est effectuée entre les deux mesures.

La solution de modèle de dichromate de potassium est préparée comme suit: 7 est mesuré.9 ml de dichromate de potassium à 10 N et s'étend jusqu'à 100 ml dans une balle aggorado. Pour les dilutions, il est suivi comme il est montré dans la table colorimétrique d'Autenrieth.

Tableau colorimétrique d'Autenrieth. Source: Vásquez A. Réaction xantoprotéique. Magazine clinique espagnol. 1949; 35 (5): 326-327. Disponible sur: Elsevier

Utiliser

L'utilisation de la réaction xantoprotéique fait partie d'un ensemble de tests biochimiques qui aident à connaître la composition chimique d'une substance inconnue. Ce test contribue à l'analyse chimique la détection de protéines contenant des groupes benzéniques dans leur structure.

Cette réaction est largement utilisée par les chercheurs dans diverses études de substances.

En ce sens, Vásquez-Jorge et les collaborateurs ont utilisé cette réaction et d'autres pour étudier la teneur en protéines des fluides extraits de l'ostion de mangrove (Crassostrea rhizophorae).

De même, Rojas et Collaborateurs (2009), ont utilisé une série de tests, parmi lesquels est la réaction xantoprotéique, pour analyser les glycomacropétides dans les précipités de Lactosueros de Ricotta.

D'un autre côté, la réaction xantoprotéique de Becher a été modifiée par Volhard pour être utilisée à d'autres fins. Dans ce cas, pour la détection de substances phénoliques et indoliques qui peuvent être soulevées beaucoup plus tôt (semaines ou mois) que les niveaux d'urée et d'azote résiduel dans le sang augmentent.

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Ces déchets toxiques sont formés à partir de la pourriture intestinale des aliments.

Ces substances s'accumulent dans le sang lorsqu'elles ne sont pas correctement éliminées, par conséquent, un test xantoprotéique positif peut prédire l'établissement rapide d'une insuffisance rénale elle-même ou un état d'urémie.

Selon l'intensité des couleurs, vous pouvez déterminer à quel point il est avancé. Dans ce cas, le test est quantitatif.

Chez les personnes en bonne santé, ce test donne une légère couleur jaune, correspondant aux niveaux normaux de tryptophane et de tyrosine qui peuvent être dans le sang.

Tandis que chez les patients rénaux, la réaction xantoprotéique donne fortement positif en raison de la présence des substances suivantes: phénol, indol, paracresol, acides oxy aromatiques, entre autres.

Précautions

Ce test doit être effectué par des professionnels formés. Toutes les normes de biosécurité doivent être prises en compte, car les réactifs utilisés sont les acides et les bases corrosives.

Si, par accident, quelques gouttes d'acide nitrique sur la peau ou les ongles tombent, elles deviendront jaunes, car les deux structures contiennent des protéines. De plus, sur la peau et les muqueurs, il provoque des brûlures graves.

Si un contact avec la peau se produit, le protocole doit suivre doit être pour laver la zone immédiatement avec du savon et de l'eau pendant environ 20 minutes.

Si vous éclaboussez les yeux, vous devez vous laver avec beaucoup d'eau fraîche, essayer de garder les yeux ouverts.

Les références

1. "Réaction Xantoproteica" Wikipedia, encyclopédie gratuite. 2 septembre 2019, 17:49 UTC. 21 octobre 2019, 20:31 Wikipedia.org /
2. Vásquez-Jorge et, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge et. Caractérisation physicochimique et teneur en protéines des extraits de liquide d'ostion de mangrove (Crassostrea Rhizophorae). Chimie cubaine, 2014; 26 (1): 66-74. Disponible en redcalyc.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Isolement et performance du GMP par les précipitations de Lactosuero avec l'acide tricloroacétique. Scientifique. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Disponible sur: ve.SciElo.
4. Vásquez a. Réaction xantoprotéique. Magazine clinique espagnol. 1949; 35 (5): 326-327. Disponible sur: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate ou. Réactions de Becher et Andrewes en chirurgie urinaire. Service d'urologie de l'hôpital espagnol. Magazine argentin d'urologie 395-404