Préparation des médias culturels

La préparation des médias de culture est une méthodologie pour développer des micro-organismes, afin de les étudier

Quelle est la préparation des médias culturels?

La Préparation des médias culturels Il s'agit d'une méthodologie de routine utilisée dans les laboratoires pour la croissance des micro-organismes souhaités. Les milieux de culture sont des préparations solides, liquides ou semi-solides que tous les nutriments nécessaires au développement d'une population microbienne ont.

En général, les moyens de cultiver les micro-organismes sont riches en protéines et acides aminés et contiennent généralement une composante qui favorise la croissance de l'organisme que vous souhaitez étudier, comme les vitamines, le sang, le sérum, entre autres.

Il n'y a aucun moyen de culture générale ou universelle, car sa composition varie en fonction des besoins du micro-organisme d'intérêt. Certaines bactéries peuvent être développées dans n'importe quel milieu de culture, mais d'autres ont des exigences particulières.

En quoi consiste?

Les micro-organismes, tels que les champignons et les bactéries, ne peuvent pas être étudiés individuellement en raison de leur taille microscopique. Par conséquent, ils doivent être cultivés dans des médias artificiels qui permettent l'augmentation significative de la population.

Par exemple, si nous voulons étudier les bactéries, nous devons leur fournir les conditions appropriées afin qu'ils puissent proliférer et former une colonie (qui peut être observée à l'œil nu).

La préparation des médias de culture varie considérablement en fonction du type de micro-organisme que vous voulez cultiver. Avant de le préparer, il est nécessaire de connaître les besoins nutritionnels de base de l'organisme de travail.

Les composants les plus courants utilisés dans les supports de cultures seront décrits ci-dessous pour avoir une idée générale de sa préparation:

Gélose

Il est utilisé dans les cultures comme agent gélifiant et ajoute lorsqu'un milieu solide ou semi-solide est recherché. Le premier agent de solidification utilisé dans la préparation des médias a été la gélatine, mais en 1883, l'agar a été introduite dans le monde de la bactériologie par W. Hesse.

L'agar bactériologique a en tant que composant principal un polysaccharide de ramifications complexes, extrait des algues. Ce composé est utilisé comme un épaississant des aliments communs, comme la crème glacée et les confitures.

C'est un élément très précieux en microbiologie pour plusieurs raisons. Principalement, parce que les micro-organismes ne peuvent pas le dégrader, se liquéfie à une température de 100 ° C et reste à l'état liquide jusqu'à atteindre 45 ° C ou moins.

Dans le cas où vous souhaitez préparer un milieu solide, la concentration d'agar doit être d'environ 1,5%, tandis que les semi-solides doivent être préparés de 0,3 à 0,5%.

Liquides

La culture d'organismes pathogènes a besoin de liquides corporels afin qu'ils puissent se développer comme ils le feraient dans leur environnement naturel.

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Pour cette raison, du sang complet ou défibré est ajouté. Le liquide est extrait d'un animal sain et, une fois stérilisé, est ajouté dans le milieu de culture.

Extraits

Ils sont obtenus à partir de différentes parties d'animaux (comme la viande ou le foie) ou les légumes (graines) et sont transformés pour obtenir un concentré solide sous forme de pâtes ou de poussière.

Les plus courants sont les extraits de levure, de malt et de viande.

Peptonas

Ces composés organiques sont obtenus par enzymatique ou en chimie des tissus animaux ou végétaux. Le but est d'ajouter un contenu riche en acides aminés, qui sont les unités fondamentales des protéines.

Amortisseurs

Les "tampons" ou les systèmes d'absorption des chocs évitent les changements soudains de pH et aident à maintenir la plage optimale qui tolère l'organisme.

La plupart des organismes peuvent développer correctement un pH de 7, bien que certaines bactéries préfèrent les milieux alcalins. Cependant, il existe des bactéries qui résistent aux variations de pH entre les valeurs de 6 et 9.

Chez les espèces sensibles au pH, les dommages ne sont pas produits par la quantité excessive d'ions hydrogène ou hydroxyle, mais par l'augmentation des acides faibles ou des bases qui peuvent pénétrer la cellule.

De même, des indicateurs de pH sont ajoutés pour pouvoir le surveiller et éviter les écarts causés par les fermentations ou d'autres processus.

Objectifs

L'objectif principal lors de la préparation d'un milieu de culture est d'ajouter tous les composants nécessaires pour permettre le développement réussi de l'organisme qui souhaite être isolé. La combinaison de composants et de nutriments plus efficaces pour obtenir les moyens souhaités doit être identifié.

La préparation et le stockage moyen sont essentiels pour assurer une croissance réussie, car ces étapes dépend de la composition de l'environnement et de la disponibilité des nutriments.

Il convient de tenir compte du fait que la culture des micro-organismes est une tâche affectée par plusieurs facteurs externes à l'environnement de culture, tels que l'intensité de la lumière reçue, la température et le niveau d'acidité ou d'alcalinité du milieu.

Par conséquent, chacune de ces variables doit être prise en compte et rigoureusement surveillé.

Types de médias

Basé sur sa composition

Sur la base de sa composition, il existe trois principaux types de cultures: des moyens naturels ou empiriques, semi-synthétiques et synthétiques ou chimiques.

Environnement naturel

Dans les médias naturels, la composition exacte est inconnue. Il s'agit notamment d'ingrédients tels que le lait, le sang dilué, les jus de plantes, les extraits et les perfusions de viandes et de peptones.

Pour des raisons économiques, des composants à faible coût sont généralement ajoutés, comme l'extrait de soja, le sérum, la mélasse, etc.

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Média semi-synthétique

Il est appelé la semi-synthétique si la composition de la même est partiellement connue. Tout milieu contenant de la gélose est un milieu semi-synthétique.

Parmi eux, nous avons de la pomme de terre dextrose, une gélose tsapek-dox, de la gruau, une poignée de peptone de viande, entre autres exemples.

Médium synthétique ou chimique

Dans ce cas, la composition du milieu - comme pour la quantité de carbone, d'azote, de soufre, de phosphore et de tout autre facteur de croissance, est totalement connue - est totalement connue.

Il est très utile si vous souhaitez obtenir des résultats reproductibles pour d'autres chercheurs.

Pour les "micro-organismes SO appelés avec des exigences de croissance spéciales", vous devez ajouter les composants nécessaires. Un exemple de ce type est Lactobacillus.

Basé sur le type de micro-organisme

De la même manière, il existe une autre classification pour les médias de culture basés sur le type de micro-organisme qui peut s'y développer.

Suivant ce principe, nous avons ce qui suit: moyens généraux, enrichissement, sélectif et différentiels. Chacun est décrit ci-dessous:

Moyens généraux

Ceux-ci admettent le développement d'une grande variété de micro-organismes. Si un organisme a besoin de conditions spéciales pour sa croissance, il ne pourra pas se développer avec succès dans ce type de récolte.

Enrichissement des médias

L'enrichissement signifie favoriser la croissance d'un certain type de micro-organisme, mais aucune substance n'a été ajoutée pour empêcher d'autres microbes de croître.

Moyens sélectifs

Ils recherchent la croissance spécifique d'un micro-organisme, appellent des champignons, des bactéries, des protozoaires, entre autres. Pour ce faire, ils inhibent le développement des autres.

Pour atteindre cet objectif, des composés chimiques mortels peuvent être ajoutés pour un large groupe de micro-organismes et inoffensif pour le corps d'intérêt, ou l'ajout de sources d'énergie qui ne sont assimilables que par le microbe recherché.

Des milieux sélectifs sont utilisés lorsque des échantillons médicaux sont prélevés afin de cultiver un micro-organisme pathogène. Ici, il est nécessaire de favoriser la croissance de l'agent pathogène et d'inhiber le développement de la flore microbienne normale du patient.

La gélose au sulfite de bismuth, par exemple, ne permet pas la croissance des bactéries positives à Gram et un grand nombre de bactéries trouvées dans la cavité gastro-intestinale.

Par conséquent, il est utilisé pour cultiver les bactéries négatives à Gram qui provoque la fièvre typhoïde, Salmonella typhi, Dans des échantillons fécaux.

Means différentiels

Ce type utilise une caractéristique diagnostique de l'organisme d'intérêt (particularités dans son métabolisme, par exemple) pour les identifier contre une autre espèce qui se développe dans le même milieu.

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Les médias différentiels et les moyens sélectifs sont très utiles dans le domaine de la microbiologie clinique et de la santé publique, car ces disciplines doivent détecter la présence de micro-organismes spécifiques liés aux pathologies ou aux mauvaises conditions d'hygiène.

Vous pouvez ajouter des substances indicatrices dans la culture qui accordent une caractéristique distinctive à la colonie recherchée. Par exemple, à l'agar-éosine moyenne-ril du méthylène (ABR abrégé) et à l'agar-MacConkey est ajouté du lactose et un indicateur de pH.

Ainsi, lorsqu'une colonie se développe dans ces milieux avec la capacité de fermenter le lactose et de produire des aldéhydes, ils peuvent être observés de couleur spéciale.

Étapes pour la préparation des médias culturels

Actuellement, la culture peut être achetée de manière lyophilisée. Par conséquent, la préparation est facilitée et seul le produit reste.

Le contenu doit être lourd (en tenant compte du montant final que vous souhaitez préparer) et dissous dans l'eau distillée après toutes les indications de produit.

Le contenu du milieu liquide doit être divisé en conteneurs souhaités (plaques de Pétri, tubes, etc.) pour la stérilisation ultérieure.

Pour distribuer le milieu solide, il est nécessaire de le faire fondre à l'aide d'un micro-ondes ou de soumettre le matériau à un bain-marie. Le pH moyen doit être ajusté.

Habituellement, l'agar est utilisée dans les tubes à essai ou dans les plaques de Pétri. Si l'agar se solidifie dans une position inclinée, avec l'angle approprié pour que le bord final est diagonale, il est connu sous le nom de flûte ou de tubes pico inclinés.

Lorsque l'agar se solidifie dans une position totalement verticale, il est donné le nom de "Deep".

Après stérilisation des supports - en utilisant un autoclave - ils les ont laissés refroidir. Ceux-ci doivent être manipulés dans un environnement exempt de micro-organismes, le plus courant est de travailler avec un allumage plus léger qui assure un environnement aseptique à proximité.

Les références

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