Sélénito Broth Qu'est-ce que la fondation, la préparation, utilise

Il Bouillon de sélénito C'est un milieu de culture liquide sélectif. Il a été conçu par Leifson pour l'enrichissement d'échantillons où la présence de bactéries entéropathogènes du genre Salmonella est suspectée.

Ce média répond aux demandes de l'American Public Health Association (APHA) et est donc accepté pour l'enquête sur la présence de Salmonella dans des échantillons de selles, des aliments d'urine, de liquide ou solide, de l'eau, entre autres.

Bouillon de sélénito. Source: Photo prise par l'auteur MSC. Marielsa Gil

La composition chimique qu'il a favorise la récupération de ces micro-organismes et inhibe à son tour la croissance des autres. Il est principalement toxique pour la plupart des bactéries appartenant à la famille Enterobacteriae. Cependant, il permet également la récupération des souches de Shigella et n'inhibe pas la croissance de Pseudomonas et Proteus.

Il est composé d'hydrogène de sodium anhydre, de selen, de phosphate de sodium anhydre, de peptonas et de lactose. Il existe également une variante à laquelle Cistina est ajoutée, d'où son nom Sélénito-Cistina Broth.

À l'heure actuelle, l'utilisation du bouillon de sélénito-cistine est préférée, car un pourcentage plus élevé de récupération de Salmonella équivalent à celui observé avec d'autres moyens sélectifs avec le même objectif est obtenu, comme le bouillon de tétration de sodium.

Base

Les peptones contenus dans le bouillon servent de nutriments pour le bon développement des micro-organismes. Les souches de Salmonella utilisent des peptones comme source d'azote, de vitamines et d'acides aminés.

Le lactose est des glucides fermensibles, tandis que le sélénite de sodium est la substance inhibiteur qui ralentit la croissance des bactéries gram positives et la plupart des bactéries présentes dans la flore intestinale, en particulier la famille des entérobactéries. Le phosphate de sodium est l'amortisseur qui stabilise le pH moyen.

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Dans le cas de la variante du bouillon de sélénito qui contient de la l-cistine, ce composé supplémentaire est un agent réducteur qui minimise la toxicité de la sélénite, augmentant la récupération de Salmonella.

préparation

-Bouillon de sélénito

Si vous avez les composants du mélange, vous pouvez peser:

4 GR d'hydrogène de sodium anhydre.

10 GR du phosphate de sodium anhydre.

5 GR de Peptones.

4 GR du lactose.

Dissoudre les composés dans 1 litre d'eau distillée stérile. Il peut être chauffé légèrement pour se dissoudre dans son intégralité.

Certains laboratoires exposent le milieu pendant 10 minutes à la vapeur Fluente pour la stériliser, car l'autoclave ne doit pas être utilisé. Si le milieu est stérilisé, il peut être stocké au réfrigérateur jusqu'à son utilisation.

Il peut également être préparé sans stérilisation et servir de 10 à 15 ml à des tubes à essai stériles.

Dans ce cas, vous devriez laisser reposer et utiliser immédiatement. Comme le milieu n'est pas stérile, il ne peut pas être stocké dans un réfrigérateur pour une utilisation ultérieure.

-Préparation des médias commerciaux

Si le milieu commercial est disponible, 23 gr du milieu déshydraté et dissous dans un litre d'eau distillée stérile. Brièvement de la chaleur pour terminer la dissolution. Ne stérilisez pas en autoclave. Servir aseptiquement 10 ou 15 ml dans des tubes à essai stériles.

Le pH final du milieu doit être de 7,0 ± 0,2.

Il convient de noter que la couleur du milieu déshydraté est beige et que la préparation est claire et translucide.

Variante du bouillon de sélénito-cistine

Il contient les mêmes composés de bouillon de sélénite, mais 10 mg de cystina est ajouté. Le reste de la procédure est exactement le même que celui décrit ci-dessus.

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Applications

Ce milieu est spécial à utiliser dans des études épidémiologiques, dans les cas où la maladie n'est pas à son stade aigu, des patients asymptomatiques ou des porteurs sains.

L'isolement des salmonelles de genre est généralement difficile, car ils contaminent normalement les échantillons. Être dans une noix.

D'un autre côté, la matière première avec laquelle les aliments transformés sont souvent préparés sont exposés à la chaleur, aux processus de déshydratation, à l'utilisation de désinfectants, de rayonnements et de conservateurs, entre autres.

Par conséquent, les salmonellas présentes dans la matière première sont maltraitées par la soumission du produit aux processus industriels susmentionnés. De même, dans le cas d'échantillons cliniques tels que les excréments, les souches peuvent être faibles si elles proviennent de patients traités avec des antibiotiques.

Par conséquent, tout échantillon est soupçonné de la présence de salmonelles doit être pré-enrichissant dans le bouillon de lactosado, puis enrichie dans le bouillon de sélénito pour optimiser sa récupération dans les milieux sélectifs, tels que la gélose SS, l'agar Xilosa, la lysine de -xiclate (XLD). , Hoktoen Enteric (He) et Green Apar -Brillante, entre autres.

Semé

Pour les échantillons de selles, prenez 1 gr d'échantillon et suspendez dans un tube avec 10 à 15 ml de bouillon de sélénito. Si les excréments sont liquides, prenez 1 ml et suspendez dans le bouillon. Pour les écouvillons rectaux, téléchargez le matériel d'écouvillon dans le bouillon.

Dans les échantillons d'aliments solides, prenez 1 GR et suspendez dans le bouillon de sélénito.

Dans les aliments liquides, mélangez à égalité avec un bouillon de sélénite à double concentration.

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Pour les échantillons d'urine, vous devez centrifuger, jeter le surnageant, prendre tous les sédiments et le suspendre dans le bouillon de sélénito.

Les bouillons à 37 ° C sont incubés pendant 24 heures d'incubation. La croissance bactérienne est mise en évidence par la turbidité. Un tube supplémentaire par échantillon peut également être inclus pour incuber 42 ° C. Par la suite, semez les médias solides sélectifs du bouillon de sélénito.

Contrôle de qualité

Pour le contrôle de la stérilité, 37 ° C est incubé pendant 24 heures un bouillon de sélénito de chaque lot sans inoculant. On s'attend à ce qu'il n'y ait pas de turbidité, pas de changement de couleur moyenne.

Pour contrôler le bon fonctionnement du milieu, des souches connues peuvent être utilisées, telles que:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 et Proteus mirabilis ATCC 43071.

Les résultats attendus sont:

• Pour les trois premières souches bactériennes, la croissance doit être satisfaisante.
• Pour Escherichia coli Inhibition partielle.
• Pour la croissance modérée de Proteus.

Limites

Le bouillon de semi-sélection est toxique pour la peau humaine, donc le contact direct doit être évité.

Les références

1. Laboratoires britanniques. Bouillon de sélénito. Disponible sur: Britanialab.com
2. Laboratoires Neogen. Bouillon de sélénito. Disponible sur: Foodsafety.Néogen.com