Bénération, préparation et utilisations EC

Il Bouillon EC ou bouillon Escherichia coli C'est un milieu de culture liquide sélectif. Ce milieu est recommandé par les méthodes standard pour le nombre de coliformes totaux et fécaux, par la technique de nombre la plus probable (NMP) dans les échantillons d'eau et de nourriture, où l'agent principal impliqué est le Escherichia coli.

Le bouillon EC est composé de tritéine, de lactose, de sels biliaires, de phosphate pipotasique, de phosphate monopotasique, de chlorure de sodium et d'eau. Sa formule est stratégiquement conçue pour favoriser la croissance des coliformes totaux et fécaux et empêcher le développement d'autres micro-organismes d'accompagnement.

Représentation figurative de la préparation du bouillon EC. Source: Pixabay.com

Les bactéries Escherichia coli C'est le principal coliforme fécal présent comme un polluant dans les sources d'eau et de nourriture, étant la cause des effets gastro-intestinaux importants.

Il convient de noter qu'il existe de nombreux sérotypes de Escherchia coli; Parmi eux, l'enterohemorrágica (EHEC), l'entéroïnasif (EIEC), l'Entéopathogène (EPEC), l'entéotoxigène (ETEC) et l'entéroagrégatif (EAEC) peuvent être mentionnés.

Ce médium a la capacité de permettre le développement de tous, mais incapable de les différencier les uns des autres. Pour cela, des tests supplémentaires doivent être effectués.

L'étude microbiologique de l'eau et des aliments pour le nombre le plus probable (NMP) pour la recherche de coliformes totaux et fécaux est un protocole composé de plusieurs phases; phase présumée, phase de confirmation et phase d'achèvement. Le bouillon EC est utilisé dans la phase de confirmation.

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Base

Bouillon EC

Le milieu EC est basé sur la fourniture des éléments nutritionnels nécessaires pour le développement optimal des coliformes totaux et fécaux, où les bactéries sont incluses Escherichia coli.

Ces éléments nutritionnels sont fournis par le triptein, étant une excellente source de peptides et d'acides aminés. De plus, il contient également du lactose, un glucides fermensible qui fournit de l'énergie et vous permet de montrer si la bactérie produit du gaz.

D'un autre côté, le milieu contient des sels biliaires qui fournissent la nature sélective, car il inhibe la croissance des micro-organismes gram positifs qui peuvent être présents dans l'échantillon.

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De même, dipotasy phosphat. Ce système est nécessaire, car le lactose contenu dans le bouillon a tendance à acidifier le milieu lorsqu'il est fermenté par des micro-organismes, mais cela est compensé par les sels de phosphate.

Par conséquent, ces éléments sont essentiels, car l'acidité sans contrôle peut affecter le bon développement des micro-organismes recherchés.

Pour sa part, le chlorure de sodium stabilise l'environnement, tandis que l'eau est le solvant des solutés présents et fournit une cohérence liquide à l'environnement.

Boulet EC modifié avec Novobiocine

Okrend et Rose ont créé une variété de bouillon EC, appelé EC Modified EC Brouth. La modification consistait en la diminution de la concentration des sels biliaires et de l'agrégat de 20 mg / dL de novobiocina.

Cette modification favorise la récupération des souches de Escherichia coli Enterohemorrágica (O157: H7).

Ce sérotype bactérien provoque une colite hémorragique sévère qui peut provoquer un syndrome hémolytique urémique (SUH); qui à son tour peut générer une insuffisance rénale aiguë, avec un taux de mortalité élevé qui peut atteindre jusqu'à 50% chez les personnes âgées.

En raison de la morbide causée par cette bactérie pour la consommation de nourriture contaminée, le Département de l'agriculture des États-Unis (USDA) recommande fortement l'utilisation de ce milieu.

préparation

Bouillon EC

Peser 37,4 GR du milieu déshydraté et se dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Le mélange doit être autorisé pendant 5 minutes. Par la suite, dans une source de chaleur, il finit par se dissoudre fréquemment.

Une fois dissous, il est distribué dans des tubes à essai précédemment conditionnés avec un tube de Durham à l'intérieur. Stériliser en autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

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Le pH moyen doit être de 6,9 ​​± 0,2.  La couleur du milieu déshydraté est beige et préparée est de l'ambre clair.

Les bouillons sont stockés au réfrigérateur jusqu'à utilisation. Au moment de l'utilisation, les bouillons doivent être à température ambiante.

D'un autre côté, le bouillon EC peut également être préparé en double concentration.

Boulet EC modifié avec Novobiocine

Peser 36,7 gr du milieu déshydraté et se dissoudre dans 1 litre d'eau. Le reste de la préparation est égal à celui décrit ci-dessus.

Utiliser

Analyse des coliformes totaux et fécaux

Le bouillon EC est idéal pour la phase de confirmation de l'étude des coliformes par la méthode NMP, à la fois dans des échantillons d'eau, comme dans les produits pharmaceutiques et alimentaires.

Des bouillons de production plus serrés et de gaz obtenus dans la phase présumée doivent être restaurés dans des bouillons vert vif à 2% et dans le bouillon EC.

Pour les coliformes totaux, les bouillon EC sont incubés dans une aérobiose pendant 24 à 48 heures à 37 ° C, et pour les coliformes fécaux, ils sont incubés dans l'aérobiose pendant 24 à 48 heures à 44 ° C.

Dans les deux cas, il est interprété comme suit: les tubes troubles avec production de gaz sont considérés comme positifs. Si dans 24 heures, il n'y a pas de production de gaz continue l'incubation jusqu'à 48 heures.

Les bouillons EC positifs vont à la phase de confirmation complète, qui consiste à récompenser dans des médias sélectifs tels que Mac Conkey, EMB ou Endo Endo Agar.

Si le bouillon utilisé est modifié avec la novobiocine, les tubes positifs sont recommandés pour ressembler à Mac Conkey Agar avec du sorbitol.

Contrôle de qualité

Le contrôle de la qualité doit être effectué à partir de chaque lot moyen préparé. En premier lieu, la stérilité de l'environnement doit. En ce sens, un ou deux bouillons sans inoculation dans l'aérobiose pendant 24 heures à 37 ° C sont incubés. Le résultat attendu est un bouillon transparent, sans turbidité ni changement de couleur.

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Deuxièmement, la croissance des souches connues doit être évaluée, pour cela, vous pouvez utiliser les bactéries suivantes: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Dans tous les cas, un développement microbien satisfaisant est attendu, observant un bouillon nuageux avec production de gaz pour ET. coli et sans gaz pour les salmonelles.

Les autres souches qui peuvent être incluses dans le contrôle sont: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Ces souches doivent être totalement inhibées.

recommandations

-Le placement des tubes Durham est indispensable pour l'étude des coliformes.

-Distribuez le milieu dans les tubes à essai avant de stériliser, jamais après.

-N'utilisez pas si le support a plus de 3 mois.

-N'utilisez pas si un changement des caractéristiques habituels du milieu est observé.

Les références

1. Laboratoires britanniques. EC moyen. 2015. Disponible sur: Britanialab.com
2. ET. coli Entérohémorragique. Le Centre de sécurité alimentaire et de santé publique. 2010. Disponible sur: CFSPH.iastate.Édu
3. Corporation Neogen. Moyen EC. Disponible sur: Foodsafety.Néogen.com
4. Néogen. EC médifié modifié avec Novobiocina. Disponible sur: Foodsafety.Néogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, par Castillo M. Détection, isolement et caractérisation de Escherichia coli Producteur de toxines Shiga de la viande moulue fraîche de bouchers de Concepción, province de Tucumán. Rev Arg de Microbiol; 2010, 42 (4): 284-287.  Disponible sur: www.SciElo.org.