Agar vert vif, fondation, préparation, utilisations

Il Gélose verte brillante C'est un milieu de culture solide, avec un haut degré de sélectivité. Il est utilisé exclusivement pour l'isolement des souches du genre Salmonella; Cependant, il existe quelques exceptions, comme les espèces de Typhi et de Parathyphi qui ne se développent pas dans ce milieu.

La recherche du genre Salmonella est fréquente dans les tabourets, l'eau ou les échantillons de nourriture. En ce sens, ce support peut être très utile. Cette gélose a été créée en 1925 par Kristensen, Lester et Jurgens, ont ensuite été modifiées par Kauffmann.

Il est composé de multiplayones de la peptique digérée des tissus animaux et de la caséine digréatique, contient également de l'extrait de levure, du chlorure de sodium, du lactose, du saccharose, du phénol rouge, du vert vif et de l'adhérence.

Il se caractérise par un milieu assez inhospitalier pour la plupart.

Il est important de souligner que dans ce médium, le genre Shigella ne grandit pas et ni l'un ni l'autre Salmonella typhimurium, ni Salmonella paratyphi. Par conséquent, si vous souhaitez isoler ces micro-organismes, d'autres médias doivent être utilisés, comme l'agar XLD, entre autres.

Base

Gélose verte brillante

Chacun des composants qui composent le milieu remplit une fonction spécifique qui détermine les caractéristiques et les propriétés de l'agar.

Les pluripeptons et l'extrait de levure sont la source de nutriments où les micro-organismes prennent l'azote et les minéraux nécessaires à leur développement. Le lactose et le saccharose sont des sources d'énergie pour les micro-organismes capables de les fermenter.

Le vert vif est la substance inhibiteur qui empêche le développement de bactéries gram positives et un grand nombre de micro-organismes à Gram négatif.

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Le chlorure de sodium offre une stabilité osmotique à l'environnement. Alors que le phénol rouge est l'indicateur de pH, la même couleur vira lors de la détection de la production d'acides à partir de la fermentation des glucides.

Les colonies non fermentaires de lactose et de saccharose poussent dans ce milieu de couleur blanche ou transparente, sur fond rouge. Par exemple, les bactéries du genre Salmonella.

Alors que le lactose ou le saccharose fermentant les bactéries capables de grandir dans ce milieu, elles développent une couleur jaune ou jaune jaune, sur fond jaune verdâtre. Par exemple, Escherichia coli et Klebsiella pneumoniae.

Variantes d'agar vert vif (BGA)

Il existe d'autres variantes de la gélose vert vif; Girvobiocine APAR vert vert vif (NBG) et la cupidité brillante ont grandi glicerol avocin lactose (NBGL).

La gélose du novobiocine vert vif glucose (NBG)

Il contient l'agriculture de soja de soja, Citro d'ammonium ferrique.

Il est utilisé pour isoler les colonies de salmonelles à partir d'échantillons de selles.

Dans ce cas, le vert vif et la novobiocine sont les substances inhibiteurs qui empêchent la croissance des bactéries gram positives et de certains micro-organismes Gram négatifs.

Le thiosulfate de sodium est la source de soufre et le citrate ferrique est la source de fer, tous deux nécessaires pour révéler la production de sulfure d'hydrogène par la formation d'un précipité noir de sulfure ferrique.

Le glucose est des glucides fermensibles et le phénol rouge est l'indicateur de pH.

Dans ce milieu, les colonies de Salmonella se développent grandes avec un centre noir entouré d'un halo rougeâtre et suivi d'une zone visible claire. Quelques souches de Citrobacter freundii produire des colonies identiques à celles de Salmonella.

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Brilliant glicerol vert vert avobiocine lactose glycérol (NBGL)

Ce milieu contient l'agriculture de soja de soja, le citrate d'ammonium ferrique, le thiosulfate de sodium, le lactose, le glycérol, le vert vif, la novobiocine et l'eau distillée.

La différence dans ce support avec le précédent.

Le milieu est également utilisé pour isoler les espèces de Salmonella, les colonies se développent en noir, par la production de sulfure d'hydrogène.

Seules les colonies qui ne produisent pas d'acide à partir de glycérol ou de lactose atteignent un H₂S suffisant, car le pH sous interfère avec la formation de H₂S. Il en résulte des colonies incolores pour la plupart des espèces de Proteus et Cytrobacter.

préparation

-Peser 58 grammes de milieu déshydraté obtenu commercialement. Ajoutez-le dans un litre d'eauagère. Mélanger, laisser reposer quelques minutes et soumettre la préparation à une source de chaleur jusqu'à ce qu'elle se dissout complètement.

-Autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes, ne dépasse pas le temps de stérilisation.

-Laisser reposer et servir encore chaud sur des plaques stériles de Petri. Le pH final doit être de 6,9 ​​± 0,2.

-Laisser solidifier et économiser au réfrigérateur jusqu'à utiliser. Avant de semer les plaques, ils doivent prendre la température ambiante.

-La poudre est verte et préparée prend une couleur verdâtre brun orange ou rougeâtre, selon le pH et la maison commerciale. Une couleur très brune indique que l'agar a été surchauffée.

-Une fois la gélose non recommandée, il n'est pas recommandé de re -aud, car le milieu se détériore.

Utilisations / applications

Ce milieu est utilisé pour la recherche de souches du genre Salmonella des échantillons d'écois et d'aliments laitiers, entre autres.

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Étant un moyen assez inhospitalier, il est conseillé de semer un inoculum abondant si l'échantillon direct est utilisé. Sinon, la pré-enrichissement et l'enrichissement des échantillons doivent être effectués avant de semer dans ce support.

Comme certaines souches de Salmonella sont inhibées ou se développent avec difficulté, il est conseillé d'accompagner ce milieu d'autres âges sélectifs pour Salmonella.

Chaque colonie avec une caractéristique typique de Salmonella doit être soumise à des tests biochimiques pour une identification définitive.

Contrôle de qualité

Pour tester le bon fonctionnement de l'agar vert vif. Les souches ATCC peuvent être utilisées pour observer leur développement dessus.

Les souches les plus fréquentes utilisées pour le contrôle de la qualité sont: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Les 3 premiers doivent donner des colonies blanches roses ou transparentes sur un fond rouge. Salmonella avec un bon développement et Proteus avec une croissance rare ou régulière.

Pour Klebsiella et Escherichia, les colonies jaunes verdâtres sont attendues avec un fond jaune et dans le cas de Shigella et Staphylococcus, ils doivent être inhibés.

Le milieu déshydraté doit être stocké à température ambiante, dans un endroit sec, car le milieu est très hygroscopique.

Les références

1. Laboratoire britannique. Gélose verte brillante. 
2. Laboratoire de BD. Bd Great Brilliant Green.