Dextrose pomme de terre, préparation et utilisation

Il Gélose de pomme de terre dextrose C'est un milieu de culture nutritionnel solide et non sélectif. Dans ce document, les espèces bactériennes et fongiques peuvent croître, mais son utilisation est indiquée en particulier pour l'isolement des champignons filamenteux et des levures. Il est également connu sous le nom de médium PDA par l'expression dans la gélose de duxtrose de pomme de terre anglaise.

Il est particulièrement utile pour l'isolement des champignons phytopathogènes, c'est-à-dire ceux qui affectent les légumes. Pour semer les échantillons de légumes infectés, d'autres milieux tels que Sabouraud ou Malt-Agar peuvent être utilisés, mais pour une utilisation de routine, la gélose du pape de dextrose est préférée en obtenant.

Aspergillus Niger et Sinèmes dans Dextrose Pape Gagar. Source: Alextrevelian 006 à l'anglais wikipedia [Domain public] / Joselrojas [CC BY-SA 4.0 (https: // CreativeCommons.Org / licences / by-sa / 4.0)]

Il est également utilisé pour le comptage de colonies fongiques dans des échantillons de cosmétiques, de produits pharmaceutiques et de certains aliments laitiers. Il est également propice à la semage des échantillons de grattes cutanées à la recherche de dermatophytes, qui se développent très bien dans ce milieu, développant leurs pigments caractéristiques.

Le pape de dextrose moyen est un moyen très simple et facile à préparer en laboratoire. Il contient, comme son nom l'indique, la perfusion de pommes de terre, le dextrose et l'agar -agar. De plus, des substances inhibiteurs peuvent être ajoutées pour éviter la croissance bactérienne et augmenter la sélectivité pour les espèces fongiques.

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Base

L'agar du pape dextrose est un milieu de culture qui fournit les éléments nutritionnels nécessaires pour le développement de champignons filamenteux et de levure.

La combinaison de perfusion de pommes de terre avec du glucose fournit la source d'énergie parfaite afin qu'il y ait une croissance satisfaisante de champignons. Tandis qu'agar est celui qui assure la cohérence à l'environnement.

Le milieu seul n'inhibe pas la croissance des bactéries, il s'agit donc d'un milieu non sélectif. Pour ce faire, sélectif a besoin de l'agrégat de substances inhibiteurs telles que l'acide tartrique ou les antibiotiques.

préparation

-Agar de dextrose Papa dextrose (non commerciale non commerciale)

Plaques de Pétri

Il est préparé comme suit:

En premier lieu, les pommes de terre sont très bien lavées en enlevant la terre qu'ils possèdent. Ils sont coupés en fines tranches avec tout et coquille. 200 gr de pommes de terre sont pesées et bouillir dans un litre d'eau distillée, pendant une demi-heure.

Le temps est fini des filtres ou tendre toute la préparation par gaze.

Le liquide obtenu est complété avec de l'eau distillée jusqu'à atteindre un litre. La perfusion est ajoutée 20 GR d'agar -agar et 20 gr de dextrose, se mélange bien et autoclave à 121 ° C, 15 livres de pression pendant 15 minutes.

Peut vous servir: coévolution

Laisser refroidir jusqu'à 50 ° C et servir dans des assiettes stériles de Pétri. Les plaques préparées sont conservées au réfrigérateur.

Quartiers

Vous pouvez également préparer des quartiers de pommes de terre dextrose.

Dans ce cas, avant de stériliser dans l'autoclave. Sauver dans un réfrigérateur.

Le milieu est à un pH de 5.6 ± 0.2, cependant, certains laboratoires ajoutent 10% d'acide tartrique pour abaisser le pH à 3,1 ± 0.1 dans le but d'inhiber la croissance bactérienne.

Dans ce même sens, d'autres laboratoires préfèrent ajouter des antibiotiques pour le faire sélectif pour la culture des champignons et éviter le développement bactérien.

-Préparation commerciale de l'agar du pape dextrose

Peser 39 gr de déshydraté disponible dans le commerce et se dissoudre dans un litre d'eau distillée. Partir pendant 5 minutes.

Le mélange est chauffé en remuant fréquemment jusqu'à sa dissolution totale. Par la suite, il est stérilisé en autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

Vous pouvez préparer des assiettes ou des quartiers. Procéder comme décrit ci-dessus.

Le pH est de 5,6 ± 0,2. Si le pH de 3,1 est souhaité, 14 ml d'acide tartrique stérile doivent être ajoutés à 20% avant de servir dans les plaques.

La couleur du milieu non préparé est beige et préparée est claire ambre avec une apparence légèrement nuageuse ou opalescentes.

Applications

Processus de plantation d'échantillons de plantes dans du pot de dextrose

-Pour les feuilles avec des taches

Les feuilles sont coupées en morceaux.

Dans un navire de 50 cm3 avec 50% d'alcool, placez les morceaux des feuilles (morceaux tachés et sains), pour désinfecter la surface de 20 à 30 secondes. Jetez de l'alcool et ajoutez de l'hypochlorite de sodium 20% pendant 40 à 50 secondes s'ils sont de fines feuilles et augmentent le temps à 80 secondes si c'est l'écorce et les troncs.

Jetez l'hypochlorite de sodium et prenez les pièces désinfectées avec une pince stérile et placez-les sur la surface moyenne (un maximum de 10 pièces). Placer la date et incuber de 20 à 30 ° C.

-Pour les fruits et tubercules

Si le fruit est charnu, ouvrez les fruits affectés par le champignon et prenez des morceaux avec un scalpel stérile, à la fois de la maladie et de la partie saine et de la placer à la surface de l'agar.

Si le fruit est d'agrumes, comme un citron ou une orange, ses graines doivent être ouvertes et semer.

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Lorsque la surface des fruits est affectée et que la sporation est observée, l'idéal est d'utiliser la méthode râpée sur la plaque; Cela consiste à jouer de l'épineuse avec une spatule en forme de «L» stérilisé et refroidie, puis semé en zigzag 2 à 3 fois sur l'agar.

-Pour les grains

Ils désinfectent la même chose que celle décrite dans les feuilles et placés par la suite sur l'agar.

-Pour les branches et les tiges

Un raspeau du cortex est effectué, puis des morceaux de la partie saine et malade sont prises et semées directement sur l'agar.

Les plaques plantées sont incubées dans une aérobiose à 20-30 ° C pendant 72 heures.

Processus pour planter des écailles de peau, des cheveux ou des ongles sur la gélose du pape de dextrose

L'échantillon doit être effectué à l'aide d'une feuille de scalpel n ° 11, soit pour couper les écailles de cheveux, de peau ou d'ongles affectées à la recherche de dermatophytes. Avant de prélever l'échantillon, la zone avec 70% d'alcool doit être désinfectée.

-Échantillon de peau

Dans les lésions de l'escroquerie, le bord de la blessure doit être gratté, car il est plus susceptible de trouver le champignon.

Dans les lésions exsudatives, l'échantillon est prélevé avec un casse-écoute sec ou humide. Semez immédiatement au-dessus du pape dextrose ou de la gélose sabouraud. Évitez les moyens de transport.

Une autre méthode de prélèvement d'échantillons est la technique de Mariat et Ada Campos's Carpet Square. Dans ce cas, la zone affectée est frottée 5 fois avec un morceau de laine stérile pour sa récolte suivante.

L'échantillon peut être placé directement dans le milieu de culture.

-Échantillon de cheveux

Selon la pathologie, la partie affectée ou les démarrages peuvent être coupées. Placer l'échantillon dans le milieu de culture.

-Échantillon de clou

Ils peuvent être grattés ou couper une partie spécifique de l'ongle affecté. Dépendra du type de blessure.

Coupez l'échantillon en morceaux de 1 mm avant de semer afin d'augmenter la probabilité de contact des champignons avec le milieu de culture.

Procédure d'identification

Les colonies obtenues dans la plaque sont isolées dans les tubes contiennent.

L'étude microscopique (observation des structures et leurs formations) peut se faire par microcultures ou observation directe au microscope entre la feuille et la lamelle.

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Les colonies comptent

Ce milieu peut également être utilisé pour déterminer la charge de champignons et de levures présentes dans les échantillons de plantes, la nourriture, les cosmétiques ou les médicaments. À cette fin, une gélose complétée par des pommes de terre avec des antibiotiques est utilisée, comme: (chloramphénicol, chlorotetracycline ou les deux).

Verser 1 ml de l'échantillon - de préférence dilué - sur une plaque de Pétri stérile et vide, puis faire fondre un pistolet de pomme de terre dextrose et laisser refroidir à 45 ° C. Verser sur la plaque de Pétri et tourner jusqu'à homogénéisation. Laisser au repos jusqu'à.

Incuber dans l'aérobiose à 20-25 ° C (moules) ou à 30-32 ° C (levures) pendant 5 à 7 jours ou plus, selon le type de champignon recherché et le type d'échantillon. Deux plaques peuvent être utilisées pour incuber les deux plages de température.

Professeur de colonies fongiques dans un échantillon de nourriture. Gélose de pomme de terre dextrose complétée par des antibiotiques. Source: pxhere.com Photo / 777267

Entretien des souches de champignons

La gélose Dextrose Pape peut être utilisée pour maintenir des souches de champignon viables pendant plusieurs années.

Pour cela, le champignon est cultivé dans des coins de pommes de terre dextrose et une fois le champignon cultivé, il est recouvert d'huile minérale. L'huile doit être stérilisée en autoclave pendant 45 minutes et avoir une viscosité approximative de 300 à 330 Saybolt. L'huile doit dépasser 1 à 2 cm la pointe de la lunette.

Contrôle de qualité

De chaque lot préparé, 1 ou 2 plaques doivent être prises et incubées à 25 ° C pendant 48 heures ou 20 ° C pendant 96 heures. Un bon contrôle de stérilité est celui dans lequel le développement des colonies n'est pas observé.

Vous pouvez également utiliser des contrôles connus ou certifiés tels que:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Dans tous les cas, une bonne croissance est attendue.

Les références

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