Gélose

Corynebacterium Stratum sur l'agar collée. Source: Nathan Lire de Halesowen, Royaume-Uni, CC par 2.0, Wikimedia Commons

Quelle est la gélose accrochée?

Il Gélose (Le cistine-lactose-électrolytes-résistant) est une moyenne de culture solide différentielle, utilisée pour le diagnostic des infections des voies urinaires. La composition du milieu de culture est conçue pour la bonne croissance des agents pathogènes urinaires et est idéal pour la quantification des unités de formation du côlon (UFC).

Le milieu de culture d'accès est non sélectif, car les micro-organismes à Gram négatifs et à Gram-positifs peuvent y développer. Mais ce n'est pas un problème, car la plupart des infections urinaires sont causées par un seul type de micro-organisme.

En cas d'infections polymicrobiennes, 2 ou 3 bactéries différentes peuvent être réalisées, mais elle est très rare, et la plupart du temps, ce sont des échantillons contaminés.

Parmi les bactéries négatives de Gram qui peuvent se développer dans ce milieu figurent les bacilles appartenant à la famille des entérobactéries et à d'autres bacilles entériques, étant les uroopathogènes les plus fréquemment isolés dans les échantillons d'urine ce qui suit: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella Morganii, Pseudomonas aeruginosa, entre autres.

De plus, parmi les bactéries positives à Gram qui peuvent se développer dans ce milieu sont Staphylococcus aureus, Staphylococcus Saprophytic, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Chorynebacterium SP, Lactobacillus SP Et ils peuvent même faire pousser des levures, comme le complexe Candida albicans.

Cependant, en raison de la composition chimique de l'environnement, elle ne permet pas la croissance de certains agents pathogènes génito-urinaires exigeants, tels que Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella Vaginalis, entre autres.

Fondation de la gélose accrochée

Le milieu de culture accrochée a une source d'extrait d'énergie de viande, de caséine hydrolysée et d'hydrolyz de gélatine hydrolysée. Ils fournissent des nutriments pour le développement de bactéries peu exigeantes.

Il contient également de la cystine, un acide aminé qui permet la croissance des coliformes, distinguant par sa petite taille.

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Il contient également en tant que lactose de glucides fermensible, donc ce milieu est différentiel, en mesure de distinguer les bactéries fermentes de lactose non fermentant le lactose.

Les bactéries fermentes tournent le pH moyen par la production d'acide, en développant des colonies jaunes, tandis que les bactéries non fermentantes ne génèrent pas de changements dans le milieu, par conséquent, ils prennent la coloration de la gélose d'origine, la couleur verte.

La réaction de fermentation est révélée grâce à la présence de l'indicateur de pH, qui dans ce milieu est le bleu bromotimol.

D'un autre côté, la faible concentration d'électrolytes moyens inhibe la croissance invasive typique du genre Protéus, appelé effet d'essaimage. Cela génère un avantage par rapport à d'autres médias, car il permet le comptage de l'UFC, y compris si le sexe est présent Protéus.

Cependant, la faible concentration d'électrolyte inhibe la croissance de certaines espèces du genre Shigella, Ceci étant un inconvénient en ce qui concerne les autres médias.

Fondation de la gélose accrochée (Bevis)

Il existe une variante ou une modification de ce milieu, fabriqué par Bevis, qui a incorporé la composition d'origine acide fuchsin (Andrade). Le même agit avec le bleu bromotimol pour différencier les bactéries de fermentation de la non-fermentation.

La différence entre l'environnement conventionnel et modifié est la couleur que les colonies adoptent. Dans le cas de bactéries en fermentation du lactose, les colonies acquièrent une couleur orange rougeâtre avec un halo rose ou rouge, tandis que non fermentant est gris-mâchoire.

Applications

La gélose accrochée est utilisée exclusivement Pour les échantillons d'échantillons d'urine. L'utilisation de ce médium est particulièrement fréquente dans les laboratoires européens, tandis qu'en Amérique, il est moins utilisé.

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La collecte de l'échantillon doit répondre à certains paramètres pour obtenir des résultats fiables, notamment:

Ne pas prendre d'antibiotiques avant la prise d'échantillon.

De préférence, prenez l'urine de la première heure de la matinée, car elle est plus concentrée, alors qu'il n'est pas possible de prélever des échantillons par des méthodes invasives.

Laver les parties génitales bien avant de prélever l'échantillon.

Jeter le premier jet de miction puis placer le conteneur.

Collectez entre 25 et 30 ml de l'urine dans un récipient stérile bien étiqueté.

Prenez immédiatement le laboratoire entouré sur la glace.

Il doit être traité avant 2 heures d'émis ou de réfrigération à 4 ° C pendant un maximum de 24 heures.

Échantillons d'urine

L'échantillon d'urine doit être dilué 1:50.

Pour dilution, colloqar 0,5 ml d'urine patient et diluer avec 24,5 ml de solution physiologique stérile. Mesurez 0,1 ml de l'urine diluée et semez par surface avec une spatule Drigalski sur le milieu collé.

C'est la méthode semée indiquée pour compter les colonies. C'est pourquoi il est utilisé dans des échantillons d'urine, car les résultats doivent être exprimés en UFC / ML.

Pour la quantification des colonies obtenues, procédez comme suit: Comptez les colonies de la plaque et multipliez par 10 puis par 50. C'est la quantité d'UFC / ml d'urine.

Interprétation

Entités au-dessus de 100.000 UFC / ML -indica Infection urinaire.

Rencontre en dessous de 1000 UFC / ml - il n'y a pas d'infection.

Entre 1000 et 10.000 UFC / ML -udoso, contamination possible, échantillon répété.

IDENTIFIANT

Un gramme doit être fait aux colonies cultivées en altération.

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Par exemple, s'il s'agit d'un bacille négatif à Gram, il sera semé sur une gélose MacConkey, où la fermentation ou non du lactose est corroborée. De plus, une gélose nutritive est attachée pour effectuer le test de l'oxydase.

Dans le cas où Gram révèle des noix de coco-positives, elle peut être soumise à une gélose salée du mannitol et à une gélose nutritive. Dans ce dernier, le test de catalase est effectué. Enfin, si les levures sont observées, elle sera semée sur une gélose Sabouraud.

De nombreux laboratoires ignorent l'utilisation du milieu et préfèrent uniquement utiliser du sang, du macconkey et de la gélose nutritive pour semer des échantillons d'urine.

préparation

Dans un Felola avec un litre d'eau distillée, dissoudre 36,2 GR de gélose en poudre collante. Après 5 minutes de repos, chauffez l'agar remise en suspension, en mélangeant constamment jusqu'à ce qu'il bouiltre pendant 1 minute.

Puis stériliser à 121 ° C pendant 15 minutes dans l'autoclave. Temps terminé, retirer de l'autoclave et laisser refroidir jusqu'à ce qu'une température de 45 ° C soit atteinte. Par la suite, il est servi entre 15 et 20 ml sur chaque Petri stérile.

La procédure des plaques servies doit être effectuée à l'intérieur d'une cloche d'écoulement laminaire ou devant le briquet de Bunsen, pour éviter la contamination.

Les plaques servies sont autorisées à se solidifier, à commander sous une forme inversée et stockées dans un réfrigérateur (2-8 ° C) jusqu'à utiliser.

Le pH final du milieu préparé doit être à 7,3 ± 0,2.

Les références

1. Recommandations pour le diagnostic microbiologique de l'infection urinaire. Chil. Infecter. Récupéré de SciElo.org.
2. À moitié accroché. Récupéré de Britanialab.com.