Fondation de chromatographie liquide à haute efficacité (HPLC), équipement, types

La Chromatographie liquide à haute efficacité Il s'agit d'une technique instrumentale utilisée dans l'analyse chimique avec laquelle il est autorisé à séparer les mélanges, à purifier et à quantifier ses composants, ainsi qu'à effectuer d'autres études. Il est connu avec l'abréviation HPLC, dérivée de l'anglais: Chromatographie en phase liquide à haute performance.

Ainsi, comme le souligne son nom, il fonctionne en manipulant les liquides. Il s'agit d'un mélange composé de l'analyte ou de l'échantillon d'intérêt, et un ou plusieurs solvants qui agissent comme la phase mobile; c'est-à-dire celui qui traîne l'analyte dans toute l'équipe HPLC et la colonne.

Équipement HPLC. Source: dqwyy [cc by-sa 4.0 (https: // CreativeCommons.Org / licences / by-sa / 4.0)]

Le HPLC est largement diffusé par des laboratoires d'analyse de qualité dans de nombreuses entreprises; comme les pharmaciens et la nourriture. L'analyste en question doit préparer l'échantillon, la phase mobile, vérifier la température et d'autres paramètres et placer les routes à l'intérieur de la roue ou du carrousel afin que l'équipement effectue automatiquement les injections.

L'équipement HPLC est couplé à un ordinateur par lequel les chromatogrammes générés peuvent être observés, ainsi que commencer l'analyse, contrôler le flux de la phase mobile, programmer le type d'élution (isocratique ou par gradient) et activer les détecteurs (UV -Vis ou le spectrophotomètre de masse).

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Base

Contrairement à la chromatographie liquide conventionnelle, comme du papier ou de la colonne remplie de silice en gel, HPLC ne dépend pas de la gravité de sorte que le liquide facture à la phase stationnaire. Au lieu de cela, travaillez avec des pompes à pression haute, qui irriguent la phase mobile ou éluée à travers la colonne avec une plus grande intensité.

De cette façon, ce n'est pas nécessaire.

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Mais l'efficacité de cette technique n'est pas due exclusivement à ce détail, mais aussi aux minuscules particules de remplissage qui composent la phase stationnaire. Étant plus petit, sa zone de contact avec la phase mobile est plus grande, donc elle interagira à une meilleure mesure avec l'analyte et ses molécules seront séparées plus.

Ces deux caractéristiques, ainsi que le fait que la technique permet le couplage du détecteur, rend le HPLC beaucoup plus élevé que la chromatographie de couche fine ou papier. Les séparations sont plus efficaces, la phase mobile se déplace mieux à travers la phase stationnaire et les chromatogrammes permettent de détecter une analyse dans l'analyse.

équipe

Diagramme simplifié du fonctionnement d'un équipement HPLC. Source: Gabriel Bolívar.

Un diagramme simplifié est montré ci-dessus comment fonctionne une équipe HPLC. Les solvants se trouvent dans leurs conteneurs respectifs, disposés avec des tuyaux pour que la pompe en transporte un petit volume dans l'équipement; Nous avons la phase mobile.

La phase mobile ou éluent doit être usée en premier, de sorte que les bulles n'affectent pas la séparation des molécules d'analyte, qui est mélangée avec la phase mobile une fois que l'équipement a fait les injections.

La colonne chromatographique est située à l'intérieur d'un four qui permet de régulariser la température. Ainsi, pour différents échantillons, il existe des températures adéquates pour obtenir des séparations à haute performance, ainsi qu'un large catalogue de colonnes et de type de garnitures ou de phases stationnaires pour une analyse spécifique dans une analyse spécifique.

La phase mobile avec l'analyte dissous entre dans la colonne, et à partir de celui-ci, éluce d'abord les molécules qui "ressentent" moins d'affinité pour la phase stationnaire, tandis que puis éluuer ceux qui sont le plus conservés par celui-ci. Chaque molécule d'Eluida génère un signal visualisé dans le chromatogramme, où les temps de rétention des molécules séparés sont observés.

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Et d'un autre côté, la phase mobile après avoir traversé le détecteur se termine par un récipient de déchets.

Types HPLC

Il existe de nombreux types de HPLC, mais parmi tous, les plus remarquables sont les quatre suivants.

Chromatographie en phase normale

La chromatographie de phase normale fait référence à celle où la phase stationnaire est naturelle, tandis que le mobile apolaire. Bien qu'il soit appelé normal, il est en fait le moins utilisé, étant la phase inverse la plus répandue et la plus efficace.

Chromatographie en phase inverse

Étant une phase inverse, maintenant la phase stationnaire est apolaire et la phase mobile polaire. Ceci est particulièrement utile dans l'analyse biochimique, car de nombreuses biomolécules se dissolvent mieux dans les solvants d'eau et polaires.

Chromatographie d'échange d'ions

Dans ce type de chromatographie, l'analyte, avec une charge positive ou négative, se déplace à travers la colonne en remplaçant les ions qu'il abrite. Plus la charge est grande, plus sa rétention est grande, donc elle est largement utilisée pour séparer les métaux de transition ionique.

Chromatographie d'exclusion moléculaire

Cette chromatographie, plutôt que la séparation, est responsable de la purification du mélange résultant. Comme son nom l'indique, l'analyte n'est plus séparé en fonction de la façon dont la phase stationnaire, mais selon sa taille et ses masses moléculaires.

Les plus petites molécules seront plus conservées que les grandes molécules, car ces dernières ne sont pas piégées entre les pores des garnitures polymères des colonnes.

Applications

HPLC permet une analyse qualitative et quantitative. En ce qui concerne le qualitatif, lors de la comparaison des temps de rétention du chromatogramme dans certaines conditions, la présence d'un composé particulier peut être détecté. Cette présence peut être révélatrice d'une maladie, d'une falsification ou d'une consommation de médicaments.

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Par conséquent, c'est une équipe fait partie des laboratoires de diagnostic. De même, il se trouve dans les industries pharmaceutiques, car elle permet de vérifier la pureté du produit, ainsi que la qualité de la même chose que sa dissolution dans l'environnement gastrique. Les matériaux de départ se soumettent également à HPLC pour les purifier et garantir une meilleure performance dans la synthèse des médicaments.

HPLC vous permet d'analyser et de séparer les mélanges de protéines complexes, les acides aminés, les glucides, les lipides, les porphyrines, les terpénoïdes et, en substance, c'est une excellente option pour travailler avec des extraits de plantes.

Et enfin, la chromatographie d'exclusion moléculaire vous permet de sélectionner des polymères de différentes tailles, car certains peuvent être plus petits ou grands. De cette façon, des produits à faible ou élevées de masses moléculaires moyens sont obtenus, ce qui est un facteur déterminant dans ses propriétés et ses applications futures ou synthèse.

Les références

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