Sabouraud Agar Qu'est-ce que la fondation, la préparation, utilise

Il Gélose sabouraud, Également connu sous le nom d'agar de dextrose Sabouraud, il s'agit d'un milieu de culture solide, en particulier enrichi pour l'isolement et le développement de champignons, tels que les levures, les moules et les dermatophytes.

Par conséquent, ce support ne peut pas être manqué dans un laboratoire de microbiologie pour étudier la présence de champignons pathogènes ou opportunistes, qu'il s'agisse d'échantillons cliniques ou non cliniques. Il est également idéal pour la croissance des bactéries filamenteuses telles que les streptomes et les nocardias. Son utilisation est très large, car elle peut être utilisée dans la mycologie humaine, animale, végétale et industrielle.

POUR. Gélose Sabouraud sans truque. B. Gélose de sabouraud plantée de levure. Source: Photos prises par l'auteur MSC. Marielsa Gil

Ce médium a été créé en 1896 par le dermatologue exceptionnel Raimond Sabouraud, qui est devenu un spécialiste reconnu dans le monde entier des troubles du cuir chevelu, principalement causée par les dermatophytes.

Sa création était si importante qu'elle a été utilisée depuis lors et est maintenue aujourd'hui, bien qu'avec quelques modifications.

Bien qu'il soit spécial pour les champignons, dans ce milieu, les bactéries peuvent se développer, donc pour les échantillons avec une flore mixte, l'inclusion d'antibiotiques dans sa préparation est nécessaire et inhibe ainsi la croissance de la flore bactérienne qui peut être présente.

Le choix de l'antibiotique doit être effectué avec soin et prendre en compte le type de champignon à récupérer, car certains sont inhibés en présence de certaines substances.

Base

La gélose Sabouraud Dextrose est un moyen que dans sa formulation d'origine est faiblement sélective, en raison de son pH acide 5.6 ± 0.2, cependant, les bactéries peuvent être développées, principalement dans des incubations prolongées.

Le milieu contient la caseine pancréatique et la peptone de tissu digréatique des tissus animaux, qui fournissent la source de carbone et d'azote pour le développement de micro-organismes.

Il contient également une concentration élevée en glucose, qui agit comme une source d'énergie favorisant la croissance des champignons au-dessus des bactéries. Tout cela mélangé avec un composant d'agar -agar qui vous donne la cohérence appropriée.

D'un autre côté, la gélose Sabouraud Dextrose peut être sélective si des antibiotiques sont ajoutés.

Avec des antibiotiques, il est particulièrement utile dans les échantillons de plaies, les ulcères ouverts ou tout échantillon dans lequel une grande contamination bactérienne est suspectée.

Les combinaisons les plus utilisées de sabouraud dextrose avec des antibiotiques

-Agar Sabouraud avec chloramphénicol: idéal pour récupérer les levures et les champignons filamenteux.

-Agar Sabouraud avec la gentamycine et le chloramphénicol: presque tous les champignons filamenteux et les levures se développent dans ce milieu, et inhibe un grand nombre de bactéries, y compris les entérobactéries, les pseudomonas et Staphylococcus.

-Agar Sabouraud avec cycloheximide: il est particulièrement utile pour les échantillons de la peau ou des voies respiratoires, tant que la suspicion est de champignons dimorphes.

Le cycloheximide doit être utilisé avec prudence; Bien qu'il soit utilisé pour inhiber la croissance des champignons non pathogènes ou environnementaux et des levures qui peuvent être présents comme polluants dans un échantillon, il inhibe également la croissance de certains champignons tels que Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Boydii Allescheria, Penicillium sp et Autres champignons opportunistes.

-Agar Sabouraud avec chloramphénicol plus cycloheximide: il est principalement utilisé pour isoler les dermatophytes et les champignons dimorphes. A les inconvénients qui inhibe certaines espèces de champignons opportunistes tels que Candida no albicans, Aspergillus, zigomicetos ou c. Neoformans.

-Agar de sabouraud avec le chloramphénicol, la streptomycine, la pénicilline G et le cycloheximide: il est idéal pour les échantillons extrêmement contaminés par des bactéries et des champignons saprophytes, mais il a la gêne d'inhibition de la croissance de la croissance de Actinomyces et nocardias, En plus des champignons opportunistes mentionnés ci-dessus.

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préparation

S'ils ont des ingrédients séparés, il peut être préparé comme suit:

Sabouraud dextrose 

Peser:

- 40 gr de dextrose

- 10 GR de la peptone

- 15 GR d'agar -agar

- Mesurer 1000 ml d'eau distillée

Tous les ingrédients sont mélangés, le pH est ajusté à 5.6. Les solutés sont dissous par bouillant, 20 ml du milieu sont distribués dans des tubes de 25 x 150 mm, sans tenir et avec un couvercle de coton de préférence.

Tubes avec couvercle de coton. Source: Photo prise par l'auteur MSC. Marielsa Gil

D'autres mesures de tube peuvent également être utilisées, selon la disponibilité.

Ils prennent l'autoclave pendant 10 minutes jusqu'à une atmosphère de pression (121 ° C). Il ne doit pas être dépassé dans le temps autoclavé. Lorsque vous quittez l'autoclave, les tubes sont inclinés à l'aide d'un support jusqu'à ce qu'ils se solidifient dans un pic de flûte.

Une autre façon consiste à dissoudre les ingrédients en chauffant jusqu'à ce qu'il fasse bouillir. Dans le même Felola autoclave pendant 10 minutes, puis distribuez 20 ml dans des plaques de Petri.

Si un milieu de dextrose Sabouraud est disponible qui contient déjà tous les ingrédients, la quantité spécifiée par la maison commerciale pour un litre d'eau est spécifiée. Le reste des étapes est égal à ceux décrits ci-dessus.

Agar de dextrose Sabouraud (modification Emmons)

Peser:

-  20 gr de dextrose

- 10 GR de la peptone

-  17 GR de l'agar -agar

-  Mesurer 1000 ml d'eau distillée

Tous les ingrédients sont mélangés, le pH est ajusté à 6.9. Procéder à la même manière du cas précédent.

Il y a des maisons commerciales qui offrent le médium avec tous les ingrédients. Dans ce cas, pesez et préparez la façon dont l'insert le décrit.

Agar de dextrose Sabouraud (modification des Emmons) avec du chloramphénicol

Solution mère du chloranfénicol

- Peser 500 mg de base de chloramphénicol

- Mesurez 100 ml d'éthanol à 95%

- Se mélanger

Le milieu de dextrose Sabouraud (Emmons) est préparé comme déjà décrit et en outre pour chaque litre d'ajout de 10 ml de solution de mère chloranphénicol avant autoclavique.

Sabouraud Emmons avec du cycloheximide dextrose

Solution mère cycloheximide

- Peser 5 GR de cycloheximide

- Mesurer 100 ml d'acétone

- Se mélanger

Le sabouraud dextrose apoure.

Agar de dextrose Sabouraud (Emmons) avec le chloramphénicol et le cycloheximide

Le milieu de dextrose Sabouraud (Emmons) est préparé comme déjà décrit et en outre pour chaque litre d'ajout de 10 ml de solution de mère chlorphénicol et 10 ml de solution de mère cycloheximide avant l'autoclavé.

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Autres antibiotiques qui peuvent être ajoutés

vingt.000 à 60.000 unités de pénicilline par litre de médium.

30 mg de streptomycine par litre de milieu.

Les deux doivent être incorporés après le milieu, légèrement refroidi (50-55 ° C).

0,04 g de néomycine par litre de milieu.

0.04 g de gentamicine par litre de médium.

Considérations particulières

La sécurité est préférée pour semer la gélose de le dextrose Sabouraud dans des tubes en forme de coin (enclins à un pic de flûte) plutôt que dans les plaques de Pétri, pour éviter la dispersion et l'inhalation des spores.

Il est important que les tubes à âges sabouraud soient recouverts de coton et non d'un couvercle de filet Coccidioides immitis. De plus, la plupart des champignons sont des aérobes.

En cas d'utilisation d'un couvercle de filetage, non étroitement fermé.

Contrôle de qualité

Les supports préparés doivent être contrôlés par la qualité pour vérifier leur bon fonctionnement. Pour cela, certaines souches sont semées.

Pour le dextrose Sabouraud Candida albicans, qui doit avoir une excellente croissance. Une autre plaque est inoculée avec des souches d'Escherichia coli, doit être complètement inhibé.

Une plaque sans inoculation est également incubée dans laquelle aucun micro-organisme ne devrait croître.

Pour la gélose Sabouraud Dextrose avec le chloramphénicol et le cycloheximide  Trichophyton mentagrophytes, doit bien se développer. Une autre plaque est inoculée avec une tension de Aspergillus flavus, dans lequel il doit y avoir une croissance rare ou non de croissance. De plus, une plaque non occupante est incubée pour démontrer sa stérilité.

Pour le dextrose sabouraud avec le cycloheximide, les souches de Candida albicans, Rubrum de Trichophyton  soit Canis microsporum, qui doit démontrer une bonne croissance.

De même, une tension de Aspergillus flavus, démontrer une croissance rare ou non-croissance. Enfin incuber une assiette sans inoculation pour le contrôle de la stérilité.

Applications

Culture primaire

L'agar de dextrose Sabouraud classique contient 4 GR de dextrose et est excellent comme moyen principal d'isolation, car il montre la morphologie caractéristique de chaque champignon.

Il est également excellent pour démontrer la production de pigments. Cependant, ce n'est pas le moyen le plus approprié d'observer la sporulation.

Il n'est pas non plus recommandé de cultiver Blastomyces dermatitidis, qui est inhibé par la concentration élevée de glucose actuel.

D'un autre côté, certaines considérations doivent être gardées à l'esprit.

Certains champignons se développent mieux à température ambiante, comme les moules, d'autres se développent avec succès à 37 ° C, comme certaines levures, et d'autres peuvent se développer aux deux températures (champignons dimorphes).

Par conséquent, parfois c'est nécessaire.

Par exemple, Sporothrix Schenckii Il est semé sur deux assiettes; L'un est l'incuba à température ambiante pour obtenir la phase de moule et l'autre est incubé à 37 ° C pour obtenir la phase uppaduriforme, mais dans ce dernier, il est nécessaire d'ajouter 5% de sang à l'environnement.

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Dans d'autres cas, comme dans les échantillons de mythom, deux plaques d'agar Sabouraud sont semées, une avec du chloramphénicol et une autre avec du cycloheximide. Le premier permettra la croissance des agents causaux du mythome d'origine mythique (eumicetome) et les seconds agents causaux des micetomes d'origine bactérienne, tels que les actinomicetomes.

Sporulation

L'agar de dextrose Sabouraud modifiée par Emmons contient 2 GR de dextrose et non seulement pour l'isolement, mais aussi pour la sporulation et la conservation des champignons.

Dans ce milieu si vous pouvez récupérer les souches de Blastomyces dermatitidis.

Conservation

Pour conserver les cultures de champignons, ils peuvent être stockés au réfrigérateur (2-8 ° C). Le temps de conservation peut varier entre 2 et 8 semaines. Après ce temps, ils doivent être subjectifs pour répéter le processus.

Certains champignons restent meilleurs à température ambiante, comme Epidermophyton Foccosum, Trichophyton Schoenleinnii, t. Violaceum et Microsporum audounii.

Le maintien de la souche peut être étendu pour éviter le pléomorphisme si le dextrose de l'agar est complètement éliminé et si la quantité d'agar à l'environnement est réduite pour éviter la sécheresse.

Microcultures

Pour l'identification de certains champignons filamenteux, il est nécessaire d'effectuer des microcultures en utilisant une gélose Sabouraud ou d'autres moyens particuliers pour observer les structures de reproduction sexuelles et asexuées.

En mycologie humaine

Il est principalement utilisé pour le diagnostic des maladies fongiques, en particulier celles qui affectent la peau et ses annexes (cheveux et ongles).

Les échantillons peuvent être des sécrétions, des exsudats, une peau, des poils, des ongles, des expectorations, des LC ou de l'urine. Les agents pathogènes couramment isolés sont des dermatophytes, des champignons provoquant une mycose sous-cutanée et systémique.

Mycologie animale

Les animaux sont souvent affectés par des infections fongiques, donc la gélose Sabouraud est aussi utile en mycologie animale que chez l'homme.

Par exemple, les dermatophytes peuvent affecter les animaux. Tel est le cas de Canis var distortum microsporum, qui infecte fréquemment les chiens, les chats, les chevaux, les porcs et les singes. En outre, Microsporum Gypseum infecte les chiens, les chats et les bovins.

Les oiseaux comme les poulets, les coqs et les poulets sont affectés par Microsporum gallinae.

Autres champignons, comme Zymonema farciminosum, Ils sont également une cause de maladie chez les animaux, principalement chez les chevaux, les mules et les ânes, produisant une inflammation importante dans les vaisseaux lymphatiques.

Sporothrix Schenkii et Histoplasma capsulatum Ils affectent les animaux domestiques et humains.

Mycologie environnementale

De nombreux champignons pathogènes ou opportunistes peuvent se concentrer à un moment donné dans un environnement donné, en particulier dans les salles d'opération et les unités de soins intensifs (USI) des cliniques et des hôpitaux. Il est donc nécessaire de contrôler la même chose.

Les autres espaces vulnérables sont les anciennes bibliothèques et bâtiments, qui peuvent être affectés par la concentration de champignons environnementaux.

Dans les études environnementales, la gélose Sabouraud Dextrose pour l'isolement des champignons est utilisée.

Mycologie industrielle

La gélose Sabouraud Dextrose ne peut pas être manquante pour l'étude des champignons polluants dans la production de cosmétiques, de nourriture, de boissons, de cuir, de textiles, entre autres.

Planter la mycologie

Les plantes souffrent également de maladies de champignons, affectant différentes parties de la plante, qui peuvent même mettre fin à la récolte, causant des pertes importantes en agriculture.

Les références

1. Laboratoire de Valtek. (2009). Agar Sabouraud Dextrose avec Cycloheximida. Disponible sur: Andinamedica.com.
2. Navarro ou. (2013). Mycologie vétérinaire. Université agraire nationale. Nicaragua.