Tête czapek, préparation, utilisations et limitations

Il Gélose tsapek (CZA) est un milieu de culture solide sélectif spécialement conçu pour la culture des bactéries et des champignons saprophytes. Il a été créé par le botaniste Friedrich Johann Franz Czapek, d'origine polonaise, et le chimiste américain Arthur Wayland Dox; C'est pourquoi cette gélose est également connue sous le nom de moitié czapek-dox.

Le milieu d'origine était liquide, mais une gélose plus tard a été ajoutée pour faire un milieu solide. Le milieu czapek est composé de nitrate de sodium, de phosphate bipotasique, de sulfate de magnésium, de chlorure de potassium, de sulfate ferreux, de saccharose, d'agar et d'eau distillée.

Czapek a. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Source: A. Medmyco [cc by-sa 4.0 (https: // CreativeCommons.Org / licences / by-sa / 4.0)] / b. Photo: Dr. David Midgley. Wikipédia.com

L'agar czapék a 7.3, mais il existe une variante à laquelle 10% d'acide lactique est ajouté dont le pH est 3,5. Ce milieu acide est utilisé pour la culture de micro-organismes acidophiles.

D'un autre côté, certaines maisons commerciales ont modifié la composition de l'agar czapéque en changeant de sulfate de magnésium et du phosphate bipotasique par le glycéophosphate; Cette modification empêche le précipité du phosphate de magnésium observé avec la formule conventionnelle. De même, il existe une autre variante à laquelle l'extrait de levure est ajouté.

Enfin, l'agar czapek est recommandée par l'American Public Health Association APHA pour l'étude de Actinomycetes SP, Aspergillus SP, Paecilomyces SP et Penicillium sp. Ces espèces se caractérisent par des micro-organismes environnementaux et des agents pathogènes opportunistes.

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Base

Ce milieu contient du saccharose; Ce glucides sert de source de carbone, tandis que le nitrate de sodium est la source d'azote, mais contrairement à d'autres moyens, l'azote fourni est de type inorganique.

Pour cette raison.

En tant que substance régulatrice de l'osmolarité moyenne, est le phosphate bipotasique. D'un autre côté, le sulfate de magnésium, le chlorure de potassium et le sulfate ferreux fournissent des minéraux essentiels pour la croissance des micro-organismes saprophytes (vie libre). Avec cette formule, un précipité de phosphate de magnésium est formé.

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Enfin, l'agar est le composé qui fournit la cohérence solide à l'environnement et l'eau est le solvant de tous les composants.

Avec la formule de gélose Czapek modifiée, il n'y a pas de formation de précipité et améliore la croissance de la croissance de certains champignons.

L'acidité extrême de l'agar acide czapek en fait un moyen plus sélectif, ne permettant que la croissance des micro-organismes acidophiles, capables d'utiliser de l'azote inorganique. Tandis que la gélose czapek-levadura améliore les performances de certains champignons.

préparation

Demi-czapek-dox

Peser 49 GR de la culture déshydratée et se dissoudre dans l'eau distillée. Appliquer la chaleur sur l'ébullition. Secouez fréquemment le mélange jusqu'à dissolution complètement.

-Gélose tsapek

Distribuez le mélange dissous dans des tubes et autoclavate à 121 ° C pendant 15 minutes. Lorsque vous retirez de l'autoclave, homogénéiser avant le coucher et laisser se solidifier.

-Plaques de gélose czapek

Autoclavate le mélange dissous à 121 ° C pendant 15 minutes et lorsque vous laissez refroidir à 50 ° C, homogénéisant et versant 20 ml dans du pétri stérile. Laisser solidifier, investir et économiser dans le réfrigérateur jusqu'à utiliser.

Le pH doit être de 7,3 ± 0,2. La couleur du milieu déshydraté est blanche et préparée est de l'ambre légère, légèrement nuageux en raison de la présence d'un précipité floculant.

Demi-czapek un acide de pH

Préparez-vous comme décrit, mais en ajoutant 10 ml d'acide stérile stérile à 10% pour chaque litre de milieu préparé. Le milieu czapek modifié doit être à pH 3,5 ± 0,2.

Czapek à moitié modifié

Peser 45,4 gr du milieu déshydraté et se dissoudre dans 1 litre d'eau. Le reste de la préparation est égal à celui décrit ci-dessus. La couleur du milieu déshydraté est blanche et préparée est de couleur blanchâtre. Le pH final du milieu est de 6,8 ± 0,2.

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Demi-czapék-levadura

Aussi appelé Czapek-Extrat of Levy (CYA). Contient les éléments de l'extrait de levure classique de la gélose czapek plus.

Utiliser

Le milieu Czapek est utilisé pour rechercher des micro-organismes de saprophytes dans les échantillons de sol, les légumes, les céréales, l'air, les insectes, entre autres.

Czapek Une gélose acide est utilisée pour la croissance des micro-organismes acidophiles, tandis que la gélose tsapek modifiée est particulièrement utile pour la formation de clomidospores chez les espèces complexes Candida albicans.

Enfin, l'agar Czapek -levadura est très utile pour l'isolement d'Aspergillus et de Penicillium.

Semé

-Gélose tsapek

Pour rechercher des actinomycètes sur le sol, procédez comme suit: l'échantillon avec de l'eau phénolisé par 30 min est traité puis 1 ml de la suspension dans l'agar czapéque est plantée. Incube à 28 ° C pendant 5 à 7 jours.

Pour les échantillons de légumes, de céréales et d'insectes, ils sont placés directement sur l'agar. Des dilutions peuvent également être effectuées et semer 0,1 ml à la surface de l'agar.

-Gélose czapék modifiée

Pour le semé, une main droite ou une aiguille est utilisée, il est imprégné de l'écouvillon et inocule le scoop faisant une ponction jusqu'à toucher la base de la plaque. Incuber pendant 24 heures à 28 ° C et examiner au microscope au-dessus et en dessous de la plaque pour observer si les clomidospores se sont formées.

Température et temps d'incubation

La température et le temps d'incubation varient en fonction du type de micro-organisme qui est cherché à isoler. Habituellement, les plaques sont incubées d'une à deux semaines dans une plage de température de 20 à 25 ° C.

Cependant, il existe des conditions spécifiques pour certaines souches. Par exemple, la plupart des espèces du genre Aspergillus ont une croissance optimale à 30 ° C; cependant POUR. fumigatus pousser à 50 ° C.

Quant au temps d'incubation, une ou deux semaines est normale, cependant Candida albicans Il peut se développer en 24 à 48 heures à 25 ° C.

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Caractéristiques de certaines colonies dans ce milieu

-Penicillium atravenetum

Il se déroule dans 12 jours d'incubation à 27 ° C. Ses colonies sont petites (25 mm).

Les colonies ont l'air velissantes, avec un bord blanc défini et au centre, il présente un ton bleu verdâtre qui s'accompagne de devient gris. L'inverse de la colonie est orange, se plaçant au milieu de la même couleur par production de pigments.

-Aspergillus Niger

Il se développe avec un mycélium blanc à jaune et des spores noires.

-Candida albicans

Les colonies légères beige crémeuses se développent claires. Sous la forme de gélose czapék modifiée.

-Aspergillus parasiticus

Un mycélium vert foncé se développe en 7 jours à 25 ° C.

Contrôle de qualité

Pour évaluer la qualité du support de culture, les souches de contrôle certifiées peuvent être semées, telles que: Aspergillus Niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus Niger développe un mycélium blanc à jaune et des spores noires en environ 5 jours, tandis que Candida albicans Il aura une croissance satisfaisante en 24 heures d'incubation à 25 ° C; Les colonies sont de couleur crème.

Limites

Certaines études ont révélé que pour la récupération des actinomycètes, l'agar avec la meilleure performance est l'agar de dextrose du pape, laissant l'agar czapéque en deuxième place, mais pour la récupération d'Aspergillus et du pénicillium, l'agar czapek est celle qui offre la plus grande récupération taux.

Les références

1. Dávila M, et al. Actinomycètes antagonistes contre les champignons phytopathogènes d'importance agricole. Tour. Mix. science. Agriculture 2013, 4 (8): 1187-1196. Disponible sur: SCIELO.org.
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4. Conda pronadisa Laboratories. Gélose Czapek-Dox modifiée. Disponible sur: condalab.com
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